1、用异硫氰酸胍提取 提病毒的详细步骤,可参考(我提过N次做定量PCR都没问题): 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管 2、加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀 3、13000rpm离心15min 4、在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul -20度预冷的异丙醇 5、取第3步离心的 ...
1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。 2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。 3、重复2。 4、加入5ml DNA提取缓冲液,(10m mol/L Tris-cl,0.1 mol/L EDTA,0.5% SDS),混匀。5、加入25ul 蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h。 6、用等体积的酚抽提一次,2500r/min 离心收集水相。用等体积的(酚,氯仿,异戊醇)混 ...
(一)试剂准备 1.TRIzol试剂。 2.氯仿 3.异丙醇 4.75%乙醇(DEPC H2O配制) 5.DEPC H2O (二)操作步骤 1. 样品处理: (1)培养细胞:收获细胞1-5×107,移入1.5ml离心管中,加入1ml Trizol,混匀,室温静置5min。 (2)组织:取50-100mg组织(新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可)置1.5ml离心管中,加入1 ...
一、组织抽提: 1. 取组织块50-100㎎用液氮在研钵中研磨成粉末 2. 移入玻璃匀浆器加入1ml Trizol 抽打匀浆 3. 移入1.5ml新离心管用5 ml针头抽打 4.&nb ...
(一)细菌的收获和裂解 1.收获 1)将2ml含相应抗生素的LB加入到容量为15ml 并通气良好(不盖紧)的试管中,然后接入一单菌落,于30℃剧烈振摇下培养过夜。2)将1.5ml培养物倒入微量离心管中,用微量离心机于4℃以12000g离心30秒,将剩余的培养物贮存于4℃。3)吸去培养液,使细菌沉淀尽可能干燥。除去上清的简便方法是用一次性使用的吸头与真空管道相连,轻缓抽吸,并用吸头接触液面。当液体从 ...
一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。 三、试剂 1、无RNA酶灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小时)装蒸馏水,然后加入0.01%的DEPC(体积/体积),处理过夜后高压灭菌。 2、75%乙醇:用DEPC处理水配制75%乙醇,(用高温灭菌器皿配制),然后装入高温烘烤的玻璃瓶中,存放于低 ...
测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑(1)细胞纯度;(2)细胞获得量;(3)细胞活力;(4)使用方法的简易程度和本室条件等。目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。 (一) 原理: 常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是 1.077± ...
摘要:简要介绍了一项高效、经济的机械除尘技术,一种新型的旋流除尘离心机,给出了这种离心机除尘性能指标等的中期试验结果,指出了它的技术特点。 1、背景技术 用离心机分离烟气中颗粒物是五十年代提出的一种机械除尘技术。这种离心机的启旋转子是一种滚筒或称为转鼓,滚筒转速高达6000r/min,动平衡要求较高;滚筒转动惯性扭力矩大。因此,都采用直径小长度大的滚筒。由于其转子耗能太高,加上处理气量太小,运行成 ...
摘要:蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质,综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异,利用一种同时多种性质差异,在兼顾收率和纯度的情况下,选择蛋白质提纯的方法。 关键词:蛋白质 分离纯化 前言 蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有成千种不同的蛋白质。蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务 ...
仪器名称:高速冷冻离心机 仪器型号:TGL-20M台式 生产厂家:长沙高新技术产业开发区 使用方法: 一、操作程序: 1、把离心机放置于平面桌或平面台上,四只橡胶机脚应坚实接触平面,目测使之平衡,用手轻摇一下离心机,检查离心机是否放置平稳。 2、打开门盖,将离心管放入转子体内,离心管必须成偶数对称放入(离心管试液应称量加入),注意把转子体上的螺钉旋紧,并重新检查试管是否 ...
正题名:生物大分子离心分离技术任者第一责任说明:叶正祥著个人名称:叶正祥 出版发行出版地:长沙出版者名称:湖南科学技术出版社出版日期:1990.1分类号:Q71 ISBNISBN:7-5357-0445-X定价:RMB4.90载体形态数量及单位:251页尺寸或开本:21cm 相关图书 生命的化学基础,夏宗芗,上海科技教育出版社,7-5428-2691-3,Q71-49生物大分子实验手册,张德安,吉 ...
例( 1 )去蛋白的 RNA 分离: ( i ) 样品匀浆加入 9 倍容积的冰冷 20mM Tris-HCl ( PH8.0 ) 1mMEDTA 。 ( ii ) 加入 1/10 容积的 10% SDS ,再加入等容积的(苯酚:氯仿:异丙醇)(容积比 50 : 50 : 2 )溶液并含有 0.1% 的 8- 羟基喹啉溶液充分混合使其乳化。 ( iii ) 以上溶液在 10000xg 离心 10 ...
血清脂蛋白是由血液中脂质与某些特异的蛋白质组成的一类不均一的复合物。因其所含脂与载脂蛋白的比例不同,其密度范围在0.96g/ml或更低至1.21g/ml之间。纸电泳中显示四条带即:乳密颗粒,极低密度脂蛋白,低密度脂蛋白,高密度脂蛋白。每种脂蛋白还可以分为更多的亚组分。 用电泳法分离含载脂蛋白较高的组份(HDL,VHDL)比较成功,而离心分离法则适合用于各种密度的血清脂蛋白分离。 一、梯度材料: 血 ...
引 言 1文献综述1.1原油乳状液简介1.2沉降罐中间乳化层的特性1.3国内外原油脱水常用的方法1.4国内外对含油废水处理常用的方法1.5利用微波辐射处理油田沉降罐乳化层的理论基础1.6微波辐射技术在石油行业的研究应用现状1.7微波辐射技术在其他行业的研究应用状况1.8小结 2试验原料、设备以及研究内容和方法 3乳化油脱水工艺方案的确定 4微波破乳—离心分离试验研究 5隧道式箱型连续微 ...
(一)差速离心法 它利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别,在同一离心条件下,沉降速度不同,通过不断增加相对离心力,使一非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分部沉淀。操作过程中一般是在离心后用倾倒的办法把上清液与沉淀分开,然后将上清液加高转速离心,分离出第二部分沉淀,如此往复加高转速,逐级分离出所需要的物质。 差速离心的分辨率不高,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,常用于其他分离手段之前 ...
离心机是利用离心力,分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械。 离心机主要用于将悬浮液中的固体颗粒与液体分开;或将乳浊液中两种密度不同,又互不相溶的液体分开(例如从牛奶中分离出奶油);它也可用于排除湿固体中的液体,例如用洗衣机甩干湿衣服;特殊的超速管式分离机还可分离不同密度的气体混合物;利用不同密度或粒度的固体颗粒在液体中沉降速度不同的特点,有的沉降 ...
问:看了一些关于CSCL梯度离心的资料,但是感觉都不一样,而且过程不清楚。现在想请教一些问题: 1、CSCL的密度和转数问题。 2、关于CSCL的灭菌。 答:因为是要做体内实验,谢谢各位了这是我们实验室的操作步骤: 在每4 ml溶解质粒的TE溶液,加入4 g 的CsCl,手温加热使CsCl固体溶解,然后转入超速离心管中,向每管中加入0.2 ml的EB(10 mg/ml),再用TE调节平衡,使液面离 ...
问:哪位大侠做过病毒纯化,可以提供一个病毒立离心纯化的详细protocol吗?拜托了,先谢谢大家了! 答:病毒提纯有很多方法的 ,可以用理化方法浓缩,吸附法,超速离心法等。我以前用PEG沉淀法,比较简单。 1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒; 2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L有助于病毒的沉淀,再等量加入10%PEG; 3、4度过夜或放置一段时间; 4、8000/min离 ...
最近 葫芦丝走天下兄 2f8c1兄在帖子中都谈到 让痉挛肌群做离心性收缩解决痉挛问题, 降低肌张力的方法 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=148&id=10613816&sty=3&keywords=%C0%EB%D0%C4%D0%D4%CA%D5%CB%F5瘫痪的运动分析与环境矫正 http://www.dxy.cn/bbs/pos ...
基本原理 当一个粒子(生物大分子或细胞器)在高速旋转下受到离心力作用时,此离心力“F”由下式定义,即: F = m·a = m·ω2 ·r a — 粒子旋转的加速度, m — 沉降粒子的有效质量,ω—粒子旋转的角速度, r—粒子的旋转半径( cm )。 通常离 ...