生化实验离心技术

在实验过程中，由于样品的各种性质差异，只有选择了正确的离心方法，才能获得预期的分离纯化结果。常用的离心方法主要有差速离心法、密度梯度离心法。其中密度梯度离心法又可细分为速率区带离心和等密度梯度离心法。小贝离心学堂将对这三种常用的离心分离方法分别进行专题介绍。离心方法——差速离心 差速离心法 (differebtial velocity centrifugation method) 又称离心力差分离法。原理是利用样品中各组分沉降系数的 ...

1、 物质在体内氧化和体外氧化有什么异同？ 体内氧化即是生物氧化。它是在细胞内的由酶催化的氧化反应，几乎每步反应都由酶来催化进行。不需要高温，也步需要强碱及强氧化剂的协助，在体温和中性pH环境中即可进行；是逐步进行、逐步完成的，不会骤然放出大量的热量。更不会产生高温、高热。另外，反应中逐步释放的能量相当一部分可使ADP生产ATP，储存在ATP分子中，以供生理生化活动的必需 ...

目前对水资源和环境中刚地弓形虫卵囊流行率的了解很有限，主要是因为缺少从猫科动物高度纯化刚地弓形虫卵囊的方法而没法检测环境中的卵囊。本视频介绍由不连续氯化铯密度梯度离心改进而来的的感染猫科动物刚地弓形虫卵囊纯化方法。

问：在实验室里做工艺，我用到2万转的告诉离心机进行微滤的前处理，不知道生产中的转速能达到这个吗？ 答：我们这里有13000转的。 答：管式离心机可达到1万转以上。 ...

问：请问质粒提取中各步离心时离心力怎么确定？离心力的大小是不是对质粒的提取很重要？谢谢！ 答：现在提质粒的技术已相对成熟，离心时一般都用12000rpm/min；也有一些方法是采用10000rpm/min，对质粒的影响不大。但在提取大分子量质粒时，要特别注意离心的速度，速度过高会使质粒断裂。离心力在质粒提取时很少会提到。至少我没有听说过。 ...

问：我想分离平滑肌中的神经细胞，用1000转离心5分钟，共3次，得到的神经节特别少，是不是转数问题？ 答：我每次都是1000转8分钟，两次，效果还可以，不过也是越来越少。我认为不是细胞没有离心下来的原因，是本来细胞数量就少，我们肉眼所看到的越来越少，只是离心洗掉了很多杂质的成分，如一些膜的成分。 答：每一次离心都会丢细胞你可以延长离心时间减少细胞丢失。 ...

问：有没有人了解生产中使用的离心机，一般如何去选择型号规格，离心前的溶液密度多大合适？板框过滤和离心那个效果好些，板框能达到离心的澄清效果嘛？ 答：板框过滤倒是经常用，板筐过滤，还真是头一回听说。如果想用离心代替过滤，可能转速大些的会好点，1w转以上的应该就可以了，上离心机的药液浓度不宜太大，以免离心过程中损失过多，具体多大的药液密度，买了设备自己考察吧，不同的设备，数据可能会有偏差。 答：我公 ...

问：我在做病毒纯化时，需先用超速离心，再用蔗糖密度梯度离心，求助高手用蔗糖密度梯度离心时的转速与超速离心时的转速有联系吗，是相等还是蔗糖密度梯度离心的转速要比超速离心的速度高？若为后者，那又若何决定蔗糖密度梯度离心时的转速？谢谢！ 答：1、病毒的纯化时，先用超速离心，你应该查一下资料，看在多大的转速时能够把病毒离心下来．那么你的这一步的转速应该至少不小于该转速，你这一步离心下来的沉淀中含有病毒和蛋 ...

问：各位战友，想问一下，RNA担取的过程中能用室温离心吗，为什么很多都要用冷冻离心的，冷冻离心的目的是什么呀，由于没有冷冻离心机，想用室温离心，想问一下这对提RNA有影响吗？ 答：室温离心会加速RNA降解，冷冻离心的目的就是降低RNA降解的速度，和将样品置于-80度冰箱保存以及加液氮研磨是同样的道理，都是尽量降低RNA降解的速度。 答：冷冻是为了减少RNA降解。但是感觉如果做RT-PCR的话对R ...

问：请教离心机的r是怎么得来的？说明书上没写，是不是以说明书上说的最大离心力和转速算出来的就是它的r？ 答：离心机的基本原理：物体围绕中心轴旋转时会受到离心力F的作用。当物体的质量为 M、体积为V、密度为D、旋转半径为r、角速度为ω（弧度数/秒）时，可得：F=Mω2r或 F=VDω2r （ω的2次方） 上述表明：被离心物质所受到的离心力与该物质的质量 ...

问：请教各位高手：超滤离心管可以反复使用多少次？使用一次后应该如何保存？用超滤离心可以把盐分彻底清除干净吗？我用的是3.5ml的超滤离心管，加样量正好3.5ml，4000rpm，40min，冷冻干燥后还是发现有很多盐分，这是什么原因？谢谢。 答：1、如果你用离心管浓缩一种蛋白，可以考虑使用，直到滤膜堵住为止。 2、离心管其实是一次性耗材，如果非要反复使用，可以考虑用碱处理一下，然后放到防腐剂里面保 ...

问：我看很多文献中涉及细胞离心时一般都是用多少克力来表示。请问这个单位和离心机的转速如何换算呢？应该与离心机的半径有关吗？特此请教大侠，谢谢！ 答；RCF（相对离心力）=0.00001118XRXN（2）（2为平方）；R为离心管底端到轴心距离；N为转速 例：离心半径12CM，转速2000R/MIN，RCF=0.00001118X12X2000（2）=536.64g 原理：F=W（2）XR----- ...

问：对于裂解、匀浆后的组织匀浆液，采用什么样的离心参数（转速，时间，温度）得到蛋白上清液比较好？ 答：我们实验室采用：4℃ 14000rpf 5min效果很好，但是要注意离心前后都置于冰浴中，以免你要提的物质（如蛋白）降解。 答：做4度10000rpf30分钟。我们实验室都是这么提取组织里的蛋白的。蛋白质的组织液一定要全程冰浴！ ...

问：终止消化过滤后离心，3000转/分 15分钟，离心管碎了，为什么呢？跟离心速度有关么?请大家帮忙分析。 答；如果没有猜错的话，你使用的是垂直离心机，我认为这个和角速度及离心力没有太大的关系，可能是你一次离好几管时，放置在一个大离心杯里的2－3个离心管因离心力相互挤压造成的，或者是大离心杯里的橡胶垫老化变硬，离心时也会挤压离心管。建议离心时，800－1000rpm，5min就可以离下细胞；或者往 ...

问：包含体先用TritonX100(1%)和尿素（2M）分别依次洗涤，12000转/分钟离心20分钟，为何包含体离心后不结实，离心后沉淀分层，下层结实，上层就不结实，请问是何原因？ 答：包含体洗净后应该是白色. 包含体抽提液应该是无色透明的. 但有时包含体洗不干净会略显黄色。 答：包含体应该很容易就离心下来的，分层很有可能就是细胞碎片（黄色的），多洗几次看黄色的那层会不会变少。 ...

问：FICOLL离心后分界面不清楚一般是什么原因？ 答：原因有很多种： 1.FICOLL没有室温平衡； 2.血液稀释时没有充分混匀； 3.加血的时候就分层不清； 4.血液抗凝不充分，细胞成块，建议采好血后室温放置半小时~1小时期间不时的混匀； 5.个体差异，同一种实验条件，不同来源血可能情况不一； 6.离心速度过小以致尚未完全分层，或离心期间速度不稳定； 7.降速太快，降速时间应5min以上。 ...

问：我的样品析出后，悬浮在母液中，不便将母液吸出，我就离心，母液中有氯仿，会腐蚀离心管吗？我这样操作行吗？ 答：不会腐蚀。离心管是聚四氟乙烯材料的，性质十分稳定。 答：我觉得离心效果不会很好，因为离心后的上层液也是浑浊的，可能有损失！ ...

问：我要在肿瘤细胞中提取一种酶.按药理实验技术操作：PBS洗涤后的细胞加入TMN buffer(10mM Tris.HclPH7.5 ，1.5mM MgCl2，10mM NaCl)，冰浴10min，加入 3% sarcosyl 后冰浴15min，时常振摇.2500 g离心20min，沉淀为絮状，且溶液呈粘稠状。无法去上清取沉淀。重复了几次都是一样的结果，我不知道怎么回事，请大家帮我分析一下。 答： ...

根据调亡的生化特征的检测方法 一、琼脂糖凝胶电泳 1）常规的琼脂糖凝胶电泳 方法一： 1．收集细胞（5×106）1000r/min，离心5min，去上清。 　　2．PBS洗一次，1000r/min，离心5min，去上清。 　　3．加细胞核裂解液500μl重悬细胞，50℃水浴，3～5h，不时振摇或37℃过夜。 　　4．加0.5ml平衡酚抽提，上下颠倒几次混匀，6000r/m ...

大豆的蛋白含量较高而且营养丰富，一般含蛋白30%——50%。大豆蛋白含有8种人体必需氨基酸，且比例比较合理，只是赖氨酸相对稍高，而蛋氨酸和半胱氨酸含量较低。目前大豆蛋白已成为一种重要的蛋白资源，特别是大豆分离蛋白含蛋白质90%以上，是一种优良的食品原料。大豆分离蛋白主要由11S球蛋白（Glycinin）和7S球蛋白（β-con-glycinin）组成，大约占整个大 ...