细胞功能测定

Fixation and Immunofluorescence of the Cytoskeleton (Mitchison Lab) Recycling Tubulin (Mitchison Lab) Labeling Tubulin and Quantifying Labeling Stoichiometry (Mitchison Lab) Tubulin Polymerizati ...

何立铭　 段开来　 张晨　 何林玲　 熊巍　 李洁　 周专　 何立铭（中国科学院神经科学研究所上海200031;华中理工大学生物物理与生物化学研究所湖北武汉430074）　 段开来（中国科学院神经科学研究所上海200031）　 张晨（中国科学院神经科学研究所上海200031）　 何林玲（中国科学院神经科学研究所上海200031）　 熊巍（中国科学院神经科学研究所上海200031）　 李洁（中国科学 ...

褚福亮王福生 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室 北京市 100039项目负责人 王福生 100039 北京市丰台路26号 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室. fswang@public.bta.net.cn电话:010-66933332 传真:010-63831870收稿日期 2002-08-15 接受日期 2002-09-03摘要新近广泛应用蛋 ...

市场上供应的大多数培养液的配方非常接近，这使得细胞很容易适应新的培养液。这里我将详细介绍一个方法，这个方法是保守的，在大多数情况下可以进行删减一些步骤。最简单最节省时间的情况是把细胞直接分装到新的培养液中，观察几代以保证细胞的生长参数是可以接受的。这个方法适于悬浮细胞，不过也很容易扩展到贴壁细胞。 细胞的生长参数1．翻倍时间（Doubling Time）细胞的翻倍时间在评价昆虫细胞健康程度的参数中 ...

感染悬浮细胞是使杆病毒系统生产蛋白的普遍方法。悬浮培养的细胞很容易从10ml扩大到100L。一般来说，悬浮的细胞在无血清的培养液中培养。这种培养液许多公司有售，比如Life Technologies、Hyclone、Biowhitaker、JRH Biosciences、Expression Systems等，用起来都不错，尽管由于细胞株和目的蛋白的不同，效果有所差异。最好是将目的蛋白和细胞株用不 ...

高MOI（ Multiplicity Of Infection，等于用于感染的病毒数目与细胞数目的比值）感染是生产蛋白的最好方法。这有两个原因。一是不用考虑DIP（Defective Interfering Particles，即只包装入部分基因组的病毒颗粒）的形成，因为关心的是细胞或者培养液中的蛋白；二是高MOI感染是最便于控制、重复性好的方法，以达到高的蛋白表达水平。低MOI感染也可用于生产蛋 ...

Ⅰ、将经荧光标记的抗体进行稀释。如果浓度过高，背景会因为的非特异性的相互作用的增加而增加。Ⅱ、在使用第一抗体之前，将样品与过量的蛋白一起培育，如小牛血清蛋白（BSA），脱脂干奶酪，或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。这个步骤通过阻断第一抗体和细胞表面或胞内结构的非特异性的交互作用来降低背景。Ⅲ、在使用第一抗体之后，将样品与5%至10%的来自于同一寄主的正常血清作为标记的第二抗体一起培育 ...

简介 细胞因子是可溶性蛋白，在淋巴细胞应答中有重要的免疫调节作用。细胞因子可以调节细胞生长、分化以及一系列功能，并且介导正常与病理性免疫应答。细胞因子是具有效应及调节双重作用的独特蛋白。近来研究显示，细胞因子可以具有多重功能，作用于多个细胞亚群并可在不同亚群细胞表达。 早期细胞因子表达与T细胞功能相关性研究是基于特定克隆细胞的激活。尽管研究应用T淋巴细胞克隆证明了不同细胞因子的合成，如TH1(IL ...

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ、材料1、 PI（e.g.Cat #537059CalbiochemSan DiegoCA）2、 缓冲体系：1×PBS(Ca2+ and Mg2+ freee.g.Cat#9240Irvine ScientificSanta AnaCA)+2%新鲜小牛血清＋0.1%叠氮钠A、 PI缓冲液用 ...

This protocol describes a procedure for isolating human peripheral blood mononuclear cells (lymphocytes and monocytes) from a Buffy Coat (obtained from a blood bank). Platelets red blood cells and neu ...

IntroductionMaintaining healthy growing cell cultures is a demanding task made more difficult by the ever-present risk of their loss through accidents or contamination. In addition actively growing ce ...

Tissue Culture - Storage of Cell LinesMETHOD:Established hybridomas and other cell lines can be stored in liquid N2 using this method.Have everything ready before you start working with the cells (i.e ...

Freezing and Thawing cells Freezing It is best to freeze cells that are growing rapidly. With adherent cells it is easiest to set up 100 mm dishes give them fresh medium the day before you freeze them ...

Cell Freezing Reagents / Solutions Cells! (at least 5 x 106). Foetal calf serum (FCS) heat inactivated at 65 � for 1 hr. Dimethylsulfoxide (DMSO). Freezing vials. Hi - Tech Cell freezer (polystyrene ...

Master Cell BankAuthor: Nanci DonackiSource: Contributed by Nanci DonackiAbstract: Provides detailed protocol for establishing a master cell bank PurposeTo describe the preparation of a Master Cell Ba ...

直接计数细胞1．如果靶细胞是帖壁细胞，在细胞因子作用适当时间后，用生理盐水洗去死亡细胞，用0.25％胰蛋白酶液消化细胞。加适量生理盐水吹打，使细胞分散成单个细胞。直接在血细胞计数板上计数细胞。2．如果靶细胞是悬浮细胞，则需要用染色剂区分死细胞和活细胞然后再计数。通常用台盼蓝染色细胞，活细胞可以排除进入细胞的台盼蓝而不着染，死细胞着染呈深蓝色。3．计数血细胞计数板上4个大方格中的全部活细胞，按下式计 ...

4小时51Cr释放法检测CMC活性1）用51Cr铬酸钠标记靶细胞短期标记法1．用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。2．如上用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用50ml RPMI-1640培养液悬浮细 ...

LDH释放法1）测定方法1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105/ml，此浓度需根据情况预先标定。2．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞，只加100μl培养液。3．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与靶细胞的比例根据要求而定，通常为5：1～20：1。自然释放孔不加效应细胞只加100μl培养液，最大释 ...

时间分辩荧光分析法1）铕荧光检测法标记靶细胞1．EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2．用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖，置冰浴中20分钟，其间摇晃数次。3．加入30μl 100mmol/L CaCl2溶液 ...

荧光法检测CMC1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×105/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×106/ml浓度。2．取96孔圆底细胞培养板，每孔加0.1ml K562细胞悬液；每孔加适量PBMC使效靶比为1：1～5：1，每种处理3个复孔；3个对照孔只加效应细胞；8个对照孔只加靶细胞；4个对照孔只加细胞培养液。每孔加20μl Alamar Blue；每 ...