细胞功能测定

本人把大鼠原代肾小管上皮细胞的取材、培养方法进行了总结，请分享！取材：1.肾小管节段的分离(机械网筛滤过法)：①取 Wistar 大鼠断颈法处死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分钟。②将大鼠转移入超净工作台，取腰部切口迅速取出肾脏，置于盛有生理盐水的培养皿中清洗并除去包膜和肾蒂组织。③取皮质置于80目筛网上，剪碎成1-2mm3大小组织块，网下放盛有少量生理盐水的培养皿。④用玻璃注射器内芯于80目网上充 ...

准备工作：准备酶，一般80ml，（0.1%的胰酶与0.03%胶原酶2，用HBSS配。准备3个中皿（10cm），每皿到入HBSS备用。一盒冰，数个离心管，一个小烧杯（装酒精用），75%的酒精，两个小玻璃瓶，一个小转子，37度水浴，4-6个玻璃瓶，以及手术器材。1。取出乳鼠先在酒精的消毒，而后取出心脏。2。将取出的心脏放入装有HBSS的中皿中，3。将取出的心脏移到第二个中皿中，漂洗会，再移到第三个中皿 ...

以兔软骨细胞为例：①一般根据实验要求，选取不同年龄组的兔子，实际上兔子的年龄越小越好，毕竟幼体组织的活力要高于成体组织的活力，耳静脉空气注射法处死后无菌条件下分离后肢关节软骨和肋软骨，剥离包裹软骨组织的筋膜和软骨膜，放入盛有PBS液的培养皿中。②将分离得到的软骨组织剁碎成0.3-0.5mm的组织块，移入25cm2培养瓶，用含双抗的PBS液冲洗软骨3次。③加入软骨体积10-15倍的0.25%胰蛋白酶 ...

以下是我最近在分离枯否细胞时得出的一点个人经验，仅供大家交流：1，严格的无菌原则2，充分的麻醉效果3，开腹前腹腔注射肝素形成全身肝素化4，插管前先将前灌流液及IV型胶原酶预热37度5，先分离门静脉肝动脉及下腔V，结扎肝A，在门静脉下穿两根线6，门静脉插管双重结扎，以防分离肝脏时硅胶管脱落7，插管成功后，剪断下腔静脉放血，肝脏在体灌注前灌流液20ML/MIN20MIN8肝脏变白后，小心将肝脏游离出腹 ...

选用DMEM高糖培养基。1.取5-7天大鼠心脏，用PBS洗净血液2.用75%乙醇浸泡30s3.用PBS冲洗后，剪碎，用适量0.5%胶原酶在37度摇摆水浴中消化30min，加入适量0.02%胰蛋白酶，用吸管轻轻吹打，37度水浴中消化30min。4.分离下的细胞过200目筛网，过滤液用20%小牛血清DMEM培养基混悬离心（1000转/min，5min），未过网的弃之。5.所得细胞悬于20%小牛血清DM ...

微载体细胞培养法 1.微载体选择：先用利用三种小量微载体做培养实验，观察细胞在一定时间内细胞的吸着率和计算细胞数，以得到最大量细胞为佳。 2.水化：称一定量的微载体放入容器中，按每克微载体加50～100ml的比例，加入无Ca2＋和Mg2＋的磷酸缓冲液（PBS），室温下放置应不少于3小时，并不时轻微搅动，然后再用新鲜PBS洗一次。 3.消毒：可采用高压蒸汽消毒，也可在水化后用70％酒精浸泡消 ...

球体细胞培养 1.琼脂铺底的培养瓶：30ml无菌培养瓶，每瓶中加5ml2%琼脂培养基，冷却，形成平坦底层后备用。 2.取生长状态良好已连接成片的细胞，用弯头吸管伸入瓶内，把细胞纵横割划成若干小区后，倒出培养液。 3.加入0.25%的胰蛋白酶液，在倒置显微镜下边消化边观察，当细胞小区边缘微卷起后便立即终止消化，倒出消化液，用Hanks轻轻漂洗一次，加入新培养液3~5ml，用吸管把已松动的细胞 ...

Healthy Sp2/0 cells should be rapidly growing by this time. Sp 2/0 cells should be started about two weeks before the cell fusion. Every two days they should be centrifuged at a 64.4 xg on the IEC cli ...

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ、材料1、PI（e.g.Cat #537059CalbiochemSan DiegoCA）2、缓冲体系：1×PBS(Ca2+ and Mg2+ freee.g.Cat#9240Irvine ScientificSanta AnaCA)+2%新鲜小牛血清＋0.1%叠氮钠A、 PI缓冲液用缓冲液将PI溶解至终浓度为 ...

Koshland LabCarnegie Institute http://www.ciwemb.edu/labs/koshland/Protocols/MICROTUBULE/mmb.html Determine the OD600 and correlate the cell density from the chart. Set up four 100mL YPD cultures at t ...

Devreotes Lab John Hopkins Medical Institutions http://www.hopkinsmedicine.org/cellbio/devreotes/needle.htm Equipment and chemicalsZeiss inverted microscope eppendolf microinjector eppendolf micromani ...

Mitshison Lab Department of Systems Biology Harvard Medical School http://mitchison.med.harvard.edu/protocols/chr1.html Buffers:Swelling Buffer (PME): 5 mM PIPES pH 7.2 5 mM NaCl 5 mM MgCl2 1 mM EGTA ...

Dr. William H. Heidcamp Biology Department Gustavus Adolphus CollegeExercise 10.3 - Extraction of ChromatinLEVEL II Materials Bovine or porcine brain0.25 M Sucrose containing 0.0033 M calcium aceta ...

（一）原理凋亡细胞是由于内源性核酸内切酶的激活后，将DNA切割成许多双链DNA片段以及高分子量DNA单链断裂点（缺口），暴露出大量3-羟基末端，如用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）将标记的dUTP进行缺口末端标记，则可原位特异地显示出凋亡细胞。主要应用的是荧光标记法和酶标记法。（二）荧光标记法1．材料与试剂 采用德国Boehringer-Mannheim公司In Situ Cell Death De ...

Materials 8% (w/v) paraformaldehyde stock solution: Dissolve 8 g of powdered paraformaldehyde in 100 ml water. Heat and stir (55-60 C � do not go higher). Add a few drops of 2 N sodium hydroxide until ...

一、国内实验室应用试剂配制（一）培养液（1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节 pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。（2）小牛血清商品：成都生物制品厂。（3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重庆药检所）。（4）pH调整液：5% NaHCO3溶液高压灭菌（8磅15min），0.1N稀盐酸液100ml。（5）秋水仙 ...

一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上()再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2―7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确 ...

一、固定细胞的染色方法 1）PI单染色法 方法一 1．收集细胞（1～5）×106个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。 2．3ml PBS洗一次。 3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。 4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。 5．400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。 6．用1ml PI染液，4℃避光30mi ...

基本原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白，Annex ...

以兔软骨细胞为例：①一般根据实验要求，选取不同年龄组的兔子，实际上兔子的年龄越小越好，毕竟幼体组织的活力要高于成体组织的活力，耳静脉空气注射法处死后无菌条件下分离后肢关节软骨和肋软骨，剥离包裹软骨组织的筋膜和软骨膜，放入盛有PBS液的培养皿中。②将分离得到的软骨组织剁碎成0.3-0.5mm的组织块，移入25cm2培养瓶，用含双抗的PBS液冲洗软骨3次。③加入软骨体积10-15倍的0.25%胰蛋白酶 ...