细胞功能测定

相关专题 我们实验室最近一次的情况:我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但 ...

相关专题 培养活细胞可用相差显微镜，也可用缩时摄影直接记录活细胞的动态变化，还可将离体活细胞染色。 一、相差显微镜直接观察法 活细胞对光线是透明的，光线通过活细胞时，波长和振幅几乎没有改变，所以用普通光镜无法看清未经染色的活细胞。为了观察活细胞的结构，则需要通过其他途径提高结构的反差。20世纪30年代，荷兰物理学家Zernike设计的相差显 ...

相关专题 CO2培养箱广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产，已经成为上述领域实验室最普遍使用的常规仪器之一，其通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境如恒定的酸碱度(pH值：7.2～7.4)、稳定的温度(37℃)、较高的相对湿度(95%)、稳定的CO2水平(5%)，来对细胞/组织进行体 ...

相关专题 细胞株(系)的使用，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的，长期连续传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物力，而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化，因而细胞失去原有的遗传特性，有时还会由于细胞污染而造成传代中断，种子丢失。因此，在实际工作中常需冻存一定数量的细胞，以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养室的常规 ...

相关专题 通常情况下，分子生物学研究都是针对组织样本或者一个细胞群来进行。然而，组织样本中一般包含多种类型的细胞，即使来自于同一个细胞群的各个细胞间的基因水平、表达水平会存在不同程度的差异，互为异质细胞。以组织或细胞群为起始样本的研究，可能会因为细胞异质性而获得错误的结果。以肿瘤发生为例，肿瘤的发生是单细胞中多种突变积累演化的结果，一个肿瘤 ...

相关专题 293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因，治疗恶性肿瘤，心血管疾病或一些遗传疾病已取得可喜进展;利用腺病毒载体在包装细胞 293中表达分泌性蛋白质，如蛋白酪氨酸激酶 1C等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善 293细胞的大规模培养技术具有越来越重 ...

相关专题 基础篇-无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品 ...

相关专题 (一)培养板的清洗和消毒 培养板一般为一次性使用，尤其在接触了有毒、有害等物质后更应该处理后丢弃。但如果要反复使用则一定要进行正确的清洗和消毒，以保证细胞培养的效果。 问：只有紫外照射可以保证无菌吗?可不可以从清洗方面做点工作? 答：看你什么用途了，一般贴壁生长的细胞用重复利用的培养板效果不是很好，因为培养板表层在生产时涂有一层促 ...

相关专题 在细胞复苏过程中，有多次复苏失败，最终在查阅了相关技术积累了足够的复苏技能后复苏成功，现将细胞复苏的操作程序和注意事项总结如下，望能为同行提供些参考。 【材料】 1.常规细胞培养仪器设备、恒温水浴振荡器。 2.培养液(DMEM)胎牛血清(CBS)二甲基亚砜(DMSO)。 【操作程序】 1.细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min ...

相关专题 第一，盖玻片需要过酸，并且自来水、蒸馏水冲洗干净。两张或者以上的玻片很容易因为虹吸作用粘到一起，很容易冲不干净，很容易把两张完全重叠在一起的玻片当成一张，一定要看清楚，晾干片子最好是在消毒饭盒中进行，饭盒底面放上纱布，将玻片斜靠在饭盒侧壁，玻片正面不要接触纱布，否则会粘上毛毛的。然后高压蒸汽灭菌，烤箱中烤干。 第二，爬片前最好用多 ...

相关专题 目是什么单位?目与微米怎么换算? 解释(一) 筛子内径(μm)≈14832.4/筛子目数。计量单位目粒度是指原料颗粒的尺寸一般以颗粒的最大长度来表示。网目是表示标准筛的筛孔尺寸的大小。在泰勒标准筛中所谓网目就是2.54厘米(1英寸)长度中的筛孔数目并简称为目。 泰勒标准筛制：泰勒筛制的分度是以200目筛孔尺寸0. ...

相关专题 1.观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。观察时拧紧盖子。 2.加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。 3.打开超净台(先开风机，后开照明)，用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。取小离心管一个，置于架 ...

相关专题 1.细胞爬片; 2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮); 3.PBS漂洗5min; 4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理); 5.PBS漂洗2次，每次5min; 6.1%BSA封闭30min; 7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h; 8.PBS漂洗2次，每 ...

相关专题 一、血清灭活问题。 1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗? 答：不是必须的，看做什么实验了。 2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗? 答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。 ...

相关专题 问：G418筛选预实验用未转染的细胞做，选10-14天内细胞死亡的最小浓度，然后将更高一级别的浓度应用于转染的细胞，是这样吗? 答：G418是一种细胞毒性药物(氨基糖苷类抗生素)，依不同浓度，对细胞有一定的抑制或杀伤作用，而拟转染的质粒上带有G418的药代酶，能降解G418，从而使细胞获得对G418的耐药性。也就是说转染后的细胞可 ...

相关专题 一、关于血清使用的几点建议： 1、血清必须贮存-20℃，如存放于4℃，请勿超过两周，对于某些单位一次无法用完一瓶，可在无菌条件下将其40-45ml分装于无菌50ml离心管中(或血清瓶中)，由于血清解冻时体积会增加10%，必须预留此膨胀体积的空间，否则易发生污染或容器冻裂的情形。 2、一般公司所提供的血清一般为200ml和500ml ...

相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶的制备至关重要，凝胶制备不均，好好的样品就给糟蹋了，以下是SDS-PAGE胶凝胶的制备步骤。 如何配制SDS-Page胶凝胶的制备过程： 1、 按要求装配好垂直电泳板，两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边，防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。 2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45～60℃角 ...

相关专题 一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法—脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白)，为染色准备实验材料。 基因转染示意图 二、实验原理 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂 ...

相关专题 冻存液：一般用10%DMSO(推荐用sigema原装的，质量好不用预消毒)+10%血清的完全培养基，如果细胞珍贵的话最好用10%DMSO+90%全血清。 降温方法：用最少两厘米厚的医用棉纱将冻存管紧紧包裹，扎紧，直接放入-70度冰箱，隔夜取出冻存管直接放液氮冻存。 复苏效果对比：细胞冻存2周后复苏，本方法冻存的细胞与使用程序性降温 ...

相关专题 一)从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞 1.取6周左右的小鼠(或600克左右的豚鼠，或3公斤左右的家兔)，剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml(豚鼠20ml，家兔200ml)无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4%淀粉肉汤。3～4天以后收集腹腔细胞。 2.如要收集腹腔静置巨噬细胞，不注射刺激物，直接从这一步开始。放血处死动物，以减少腹腔 ...