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细胞功能测定

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从单个核细胞中分离T细胞

从单个核细胞中分离T细胞1)用玫瑰花结形成试验分离E+细胞1.制备AET-绵羊红细胞1)在刻度离心管中,用无菌的含5%小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次,每次离心500×g 10分钟。2)吸净上清液,测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞,加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液,混匀。室温中反应30分钟。3)用无菌的含5%小牛血清的Hanks液洗涤AET-绵羊红细胞5次,每次离心500×g, ...

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T细胞亚群的分离

T细胞亚群的分离分离T细胞亚群,包括各种CD抗原阳性的亚群、αβ型T细胞受体阳性的T细胞或γδ型T细胞、或者其它表面标志不同的T细胞亚群,通常需要有相应的特异性抗体。用直接或间接免疫荧光染色,通过FACS分离细胞;或用抗体包被的免疫磁珠,通过磁场分离细胞;或用抗体亲和层析柱分离细胞。 ...

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羊水细胞染色体标本的制备

一、原理 人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养,但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞,依据其外形和生长特征可区分为以下三类:上皮细胞(E)、成纤维细胞(F)和羊水细胞(AF)。E细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长,所以在培养过程中的生长期最短。AF细胞在再培养中一开始就长得很好,染色体分析大多用这类细胞。F细胞在再培养中潜在的生长期最长,在较老的羊 ...

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胸腹水染色体标本制备

一、原理 某些肿瘤细胞可脱落入胸腹水中,并继续生长、增值。因此,由胸腹水细胞可制备较好的染色体标本。胸腹水细胞染色体分析对恶性肿瘤具有辅助诊断的价值。如分裂相多,异倍性,有结构畸变,常支持阳性诊断。二、用品和试剂 同外周血染色体制备。三、操作步骤 l.新鲜胸腹水20―40毫升,以1000rpm离心10分钟。弃去上清液。 2.加入37℃预温的营养液RPMI-1640 10ml ...

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染色体CBG标本制备

一、原理 异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的,因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近,或在染色体臂上呈现“团块”,这些染色质主要由C显带技术呈现,故称为C带。CBG即C带、Ba(OH)2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA,但在C带区有很强抗性,仍保留大部分DNA,Giemsa染色后可见效果良好的C带。抽取DNA的过程由三个连续操作形成。首先,酸处理可 ...

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人体间期细胞X―小体的制备

一、原理 1949年Barr等发现,在雌性体细胞中的两条X染色体有一条(或这条的大部分)处于凝集不活动状态,从而形成X-小体(或称X-染色质、性染色质、Barr小体)。进而发现,所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体,当在个用雌或雄体中,有多于2条X染色体时,在间期细胞内除一条外,其余均形成X-小体。 人类正常的男女体细胞中,22对常染色体并无区别,但其性染色体分别为XY和X ...

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细胞学技术

概述及注意事项:细胞学检查包括有细胞的涂片与染色技术,其来源先于组织切片技术,目前是较为常用的病理检查方法之一。它所运用的范围也很广泛,如女性生殖系统、食管、胃、肺、浆膜腔积液、泌尿管道、鼻咽部等部位的脱落癌细胞,以及胸、腹腔的肿块、淋巴结、乳腺、和其它组织器官的细胞学诊断。标本采集注意事项::1、要在较为准确病变的部位采集病变标本。2、标本应及时处理,固定。以防止细胞自溶腐败。 3、避免异物掺入 ...

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侧群干细胞(sp细胞)的分离与分选

准备工作: DF12加入0.1%BSA,100ml取10ml冰浴,40ml放入孵箱;其余的放入4度; DNaseI10undefined;PI:50ug/ml;Hoechst33342:1000ug/ml(allfromSigma) 计数板,冰盒;各种离心管,无菌流式管(BD),400滤网(BD) 染色方案: ①细胞染色: 细胞消化计数,用DF12重悬,调整到1×106/ml浓度 ...

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人类胚胎干细胞培养扩增方法

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人类胚胎干细胞实验方法

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大鼠骨髓基质细胞的体外培养

大鼠骨髓基质细胞的体外培养大鼠骨髓基质细胞的体外培养.pdf ...

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人皮肤角质形成细胞的分离与原代无血清培养

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各类上皮细胞培养

上皮细胞培养 1)表皮细胞培养 1.取材:取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤更好,切成0.5~1平方厘米小块。 2.EDTA处理:先置入0.02%EDTA中室温置5分钟。 3.冷消化:换入0.25%胰蛋白酶中,置4℃过夜。 4.分离:取出皮肤,用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。 5.温消化:取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,3 ...

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高纯度黑色素细胞培养方法的改进

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从活组织培养层中分离独立的细胞团

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培养基的配制与灭菌

培养基的配制与灭菌1目的1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法1.2掌握各种实验室灭菌方 以下内容需要登录后才能完全查看,请您登录马上登陆| ...

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动物细胞大规模培养技术

一、前言 动物细胞培养开始于本世纪初1962年,动物细胞培养规模开始扩大,发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法,利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等,动物细胞培养已成为医药生物高技术产业的重要部分。利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占世界生物高技术产品市场份额的50%。动物细胞大规模培养技术是生物技术制药中非常重要的环节。目前,动物细胞有悬浮培养和贴 ...

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细胞培养中支原体污染的特点及检验的笔记

最近看大家常提到支原体污染,就翻了翻书,做了些笔记,现在贴出来和大家分享: 支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2um)并独立生活的微生物。约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性。可为圆形、丝状或梨形。支原体形态多变,在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构。其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微 ...

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H9C2心肌细胞系的特性

首先,它肯定不同于原代细胞系的,最大的区别,原代的心肌细胞基本不能分裂,而H9C2可以分裂,最大的区别了吧!原代心肌细胞会跳动,你的H9C2不会吧。虽然都是梭形的,但是H9C2来源于胚胎期心脏,而心肌细胞一般用新生大鼠分离获得。H9C2与原代心肌细胞有那么大区别,当然不能替代它,所以在研究方向上,你要根据自己的实验需求选择自己合适的细胞,一般来讲呢,如果你研究与心脏相关的信号通路,我建议你还是选用 ...

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小鼠胚胎成纤维细胞MEF培养相关知识总结

小鼠胚胎成纤维细胞的富集1、给13-14天的孕鼠注射大约0.5ml阿佛丁。当鼠麻醉后,实施断颈法处死小鼠。2、用70%乙醇擦拭腹部,把皮肤向后拉,暴露出腹膜。用消毒过的工具,剪开腹壁以暴露出子宫角。将子宫角移到10cm的皿里。用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。3、用剪刀剪开每一测的胚囊并将胚胎移到培养皿中。4、用两副钟表镊子将胎盘和膜与胚胎分离开,分离后切除内脏(所有深色的东西)。将胚胎转移到 ...

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