细胞功能测定

血清热灭活�您是否在浪费时间？血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题，价格不菲的血清中含有诸如生长因子，维生素，氨基酸等珍贵物质，而将它们置于50℃以上的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此，在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行，多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子，氨基酸等成分带来的负面影响，在我们的技术热线中最常被提到的就是否该对血清进行热灭活，下面我们就对胎牛血清的热 ...

1.如何选用培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI- 1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）2.为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培 ...

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。Ø WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。 Ø WST-8是MTT的一种 ...

这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。1．Transwell关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane ...

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(45)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-35-di- phenytetrazoliumromide MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（ ...

2．步骤2．1 Transwell小室制备2．1．1 无基质胶Transwell小室制备① 包被基底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃风干。如果需要在下室面铺FN的话，可将200ul枪头的尖端剪掉吸取FN均匀涂抹在小室的下面。用胶原（collagen）的话，一般配成0.5mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。② 水化基底膜：吸出培养板中残余液 ...

293细胞培养293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1区缺陷互补细胞系。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与J.S.Miley于1976年用DNA转染技术构建而成。293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁 ...

1..培养人脐静脉内皮细胞：1 材料与方法1．1 材料1．1．1 新生儿脐带 由重庆医科大学附属第一医院提供。在无菌条件下，于健康产妇分娩后立即取新生胎儿脐带。长度20 cm，两端扎紧投入到4℃脐带保存液中，1 h内送细胞培养室。1．1．2 仪器与试剂倒置相差显微镜(日本Olympus公司)；超净工作台(苏州净化仪器厂)；5％C02培养箱(美国Heraeus公司)；离心机(上海安亭仪器厂)；2 ...

前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰查了一些资料现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助!培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中置于ＣＯ2培养箱(37℃95%空气5%ＣＯ2)培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4高糖)加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形直径15～20μｍ也有椭圆或多角形的扁平的细胞少见倾向于聚集成小团簇状(A图)。分化 ...

本人总结了下大鼠内皮细胞的培养方案一，消化法。优点：获得的细胞比其他方法纯。缺点：获得细胞比较少。常见问题及解决方法：1.消化的时间不好控制时，建议大家分两段时间消化，消化30分钟时收取消化液放入一个离心管，30分到45分钟段收集的放入另一离心管，离心后看看第二管是否有杂细胞，若没有就把两管混合用，若有就只用第一管的。2.消化液，我的经验是5份0.2％胶原酶和1份0.125％胰酶。3.若很难消化时 ...

前阵子做单抗，做了几次细胞融合都没做出来，后面怀疑是SP2/0受支原体污染，细胞生长速度减慢，出现细胞碎片，换液后情况稍好。怀疑受污染后我对细胞做了一系列的处理，终于有一种处理成功地削除了支原体污染，细胞融合也成功了，现在单抗已经做出来。现在想把我的处理方法贴出来，希望对一些遇到同样问题的朋友有用。处理方法：以两种抗生素交替使用，第一种是2-3倍于正常浓度的双抗（青霉素、链霉素），第二种是10ug ...

最近在培养细胞中使用胎牛血清由于发现有沉淀不知是否变质在查阅相关文献也没有得到确切的答案.因此不敢再用原来的血清导致浪费.在这提醒大家做细胞培养时要注意血清的分装.血清是细胞培养中最重要的元素之一。在实验室操作中要注意及处理方法：1. 血清保存: 建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。2. 解 ...

一、酶消化法。1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温和， ...

做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确，这也是偶参照老外的方法吧。1　计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM37度30分钟。2　拿出后，1000rpm5min可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次3　 ...

一、材料　纯系SD雄性大鼠，体重180g～200 g，由浙江大学医学院实验动物中心提供。食用酒精选用北京酿酒总厂出品的56度红星二锅头。二、方法　将大鼠随机分成5组，饲养在23℃～25℃室内，自由进食、进水；根据大鼠体重，A、B、C、D组每日用56°红星二锅头白酒以10ml/1Kg分别灌胃 0、4周、8周和12周；E组于酒精灌胃12周后，停止灌胃4周。大鼠通过股动脉采血处死，收集血浆和肝脏标本。三 ...

1　大鼠肝细胞的分离和培养　大鼠4％戊巴比妥麻醉，门静脉插管，先以无钙灌流液灌流，继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。将肝脏移至一平皿内，轻轻撕去肝包膜后，加入含5％小牛血清的清洗液，用吸管吹打成单个肝细胞悬液，200目尼龙网过滤，低速离心（500 r・min-1，1 min，4℃）弃上清，同法用清洗液反复洗3次。然后用完全1640培养液（内含10％小牛血清，105　U・ ...

1.材料与方法取新生的wistar 大鼠脊髓剪碎0125 %胰蛋白酶消化1h 用含血清的DMEM培养液终止胰蛋白酶的作用; 而后吹打成散在的单个细胞进行细胞计数按5 ×105 个Pcm2 密度进行接种。培养至第10天时加10mM Leu2methy12ester 除杀小胶质细胞。于16d 时用塑料吸管头划刮培养皿产生三条宽约1mm长约1. 5cm 的损伤带对照组未划伤每组共分为7 个时间点分别是划 ...

取出生1-2d的乳鼠，用麻醉剂处死。在D-hanks液中取大脑并分离海马组织，胰蛋白酶消化，获得细胞悬液，胎盘蓝染色进行死活细胞记数，将细胞以5×105/ml的密度接种于预先经L-多聚赖氨酸处理的96孔和24孔培养板其中24孔板中预先放置有盖玻片。细胞维持在培养液中，置入5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养，24h后全换液，接种当天为第一天每3d半量更换培养液一次，培养第3天时加入阿糖胞苷终浓度为1 ...

体外培养的中脑多巴胺能神经元MPTP损伤模型l实验操作：实验采用胚胎龄14一16天的大鼠，剖子宫取胎，取胎鼠中脑腹侧区。可将多个胚胎来源的组织收集在一起，置Fl2培养基（Gibco）至35mm的培养皿中，以细剪刀剪碎。将2ml含0.125％的胰酶的F12加入到组织中，该混合物于37oC孵育10分钟后，加入DNase I（Sigma）至终浓度80ng／m1，继续于37oC孵育10分钟。消化后的组织以 ...

原代心肌细胞培养及APC模型的制作参照先前报道的方法。即取出生后1－2 d乳鼠心尖部组织 胰酶消化 离心后用含20%小牛血清的DMEM培养基制成细胞悬液 过滤 按差速贴壁分离法纯化心肌细胞 以1×105 cells/cm2接种于24孔板 每24 h更换培养液。贴壁生长2 d 于实验前24 h更换为无血清DMEM培养基 随机分组 每组双平行孔 重复4次操作。缺氧/复氧(anoxia/reoxygen ...