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        Aβ损伤模型

        互联网

        1587

        取出生1-2d的乳鼠,用麻醉剂处死。在D-hanks液中取大脑并分离海马组织,胰蛋白酶消化,获得细胞悬液,胎盘蓝染色进行死活细胞记数,将细胞以5×105/ml的密度接种于预先经L-多聚赖氨酸处理的96孔和24孔培养板,其中24孔板中预先放置有盖玻片。细胞维持在培养液中,置入5%CO2,饱和湿度的培养箱中培养,24h后全换液,接种当天为第一天,每3d半量更换培养液一次,培养第3天时加入阿糖胞苷,终浓度为10μmol/L,以抑制神经胶质细胞的过度增殖,24h后更换全部培养液继续培养,第10天进行细胞造模,开始实验。

        也可以用PC12细胞株,常规培养

        Aβ产物诱导海马神经细胞,建立细胞模型:
        选择Aβ25-35片段,用三蒸水配制成100μmol•L-1,过滤,分装,-20℃冻存;使用前老化处理并配制成所需浓度。(将Aβ25-35溶解在DMSO中,在用DMEM稀释,置于37℃下孵育7-14天,即为老化状态)。

        细胞模型建立:加入浓度为20µmol/L的Aβ25-35,接触24h,诱导建立AD细胞模型.

        检测指标:MTT LDH 凋亡 细胞内钙离子 以及SOD等

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