前沿科技及其它

hetingcopy 大家好，我现在正在做慢病毒包装，用的是CLONTECK的包装系统，第一次感染293T细胞后，荧光很亮，48H后收集病毒上清，离心后冻于-80度，一天后感染靶细胞，什么都没有？请问大家是怎末做的？谢谢。大鹏鸟 看到荧光并不代表包装成功,它代表的只是你的质粒转进去了。做慢病毒包装时必须要搭配好几个质粒的比例。转染之后要能看到细胞形态的病变。收集上清的时候要注意尽快分装保存。有可能的话最好把细胞也裂解一下， ...

涛声依旧神游天下 你好，我想问下，对于转膜，干转，半干转，湿转，它们适应的分子量是多大的蛋白呢？比如我的目的蛋白是192KD，那么用哪种转膜方式较好呢？什么条件？依据是什么呢？谢谢cfss0925 现在一般都选择湿转的吧。selleckchem01 需要湿转3H以上，这么大的分子半干很难转过去；如果蛋白丰度有比较低的话，基本是检测不出来的~cherrycherry 湿转，90V，120min，依据不同转膜液配方，转膜时间可能有所不同 ...

dangyonghui2 大侠们，我现在用的是promega公司的cAMP测定试剂盒，按照说明书上面要求做的标准曲线，可是我做了几次出来和说明书上面都不一样，是怎么回事？求解！！！现在有测cAMP的同志们一起讨论下，我的Q:1186130200bianbenjamin 我们用的是PE的盒子LANCETM cAMP 384Kit（PE公司）1.检测原理：该试剂盒是一种时间分辨的荧光共振能量转移免疫分析，该反应是一个竞争免疫反应，即 ...

mahaizhi 各位前辈，请教一下在国内能不能购买到ATCC的原装细胞，有没有哪家公司或者什么机构是ATCC在国内的指定代理。如果有的话，请不吝赐教联系方式。谢谢。ddh382 我也想知道veimojie ATCC 在中国的总代理是北京中原公司 比较放心 都是ATCC原装干冰包装发给客户 有兴趣可以去公司主页看看 网址http://www.sinozhongyuan.com/index.aspxiaojianmao 同中原，我们上回说要定一个， ...

dery 谁有pJim19 vector map and it's sequence呢，贡献一下吧！！！！freecell 耶鲁大学的邓教授实验室有此质粒。可以写信求助：Xing Wang Dengxingwang.deng@yale.edu版主dachong99留言:欢迎前辈常来坐坐...dery 请问你有这方面的信息吗，网上怎么找不到？seank 扣扣1843439339本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

mirror122 大家好，我从中山大学发表的论文中看到，他们没有提取RNA，而是直接用特异的引物对其中的microRNA进行反转录，然后再做定量PCR，不知道大家有人用过这种方法吗？可行吗？haidaweishengwu 我也在座microRNA的提取，有机会交流一下mirror122 好呀，不知道你是怎么提取RNA的？huahuaxxh66 现在检测血浆microRNA都很昂贵，请问国内目前有没有相对合适的方法吗？或者哪 ...

bigyo 急求解决！有谁给大鼠注射过SB203580，怎么用DMSO溶解后，再用PBS稀释又析出沉淀呢？yxj360367100 你好。除了用DMSO溶解，SB203580还能用其他的溶剂溶解吗？zhaichao_1 我的也是这个样子，于是我就将药物这样悬浮打入，结果老鼠死了xiye616 请问你的析出问题解决了么 我们遇到同样问题 比较着急 感谢zcbpaul 我也是同样问题啊，怎么解决呢bigyo 毕业了，解决不了，换公司吧本文由丁香园论 ...

qulinyd 最近在做hsv tk,所用前药为粉末状GCV（购自sigma），但不知道怎么溶解合适，还请各位帮帮忙哦freecell 你从sigma买来的东西，应该有个datasheet吧：Preparation InstructionsSoluble at 10 mg/ml in 0.1 N HCl.Storage/StabilityStore desiccated at 2-8 °C. Under these conditions the product is stable for 3 years.说明 ...

hanrui1009 各位同仁：对于大于5KB的片段如何选择合适的载体进行克隆？为什么？什么公司的什么产品尽可能详细！fengye_liu 一般的T VECTOR作为克隆载体是可以胜任的！hanrui1009 是吗？可是很多前辈都说 不好做啊！成功率不高啊！纠结啊！ylong12 hanrui1009 wrote:各位同仁：对于大于5KB的片段如何选择合适的载体进行克隆？为什么？什么公司的什么产品尽可能详细！克隆 好像大都用T vector 一般大于 ...

能nca 要菌摇了一整夜早上才发现摇床培养箱的温度不对，本来应该是37度，可是昨天晚上，昨天晚上做实验太忙了，只在28度呆了一整夜，早上看菌都没有很大的变化，怎么办啊？我现在把温度该过来，正在37度接着摇菌呢。能nca 十分的着急，希望大家快点来帮忙ylong12 取菌 重新摇 28度摇的菌活性不好 后即实验很难进行能nca 谢谢了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄 ...

霍一刀hxs 在 一篇论文的实验步骤中，其buffer添加了P.I.，我不知其为哪种试剂的简称。希望有高手可以指点。急！谢谢！大鹏鸟 什么实验？说清楚点好帮你啊natprod 是做细胞周期或凋亡试验的吗，propidium iodide (PI) 染DNA用的。xzx8066 如楼上所说，最好说清楚点。我仅提供一个参考。PI染色法（活细胞染色）检测细胞凋亡碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种DNA 结合性染料，其激发和发射波长分别为536 ...

mirror122 大家好，下面这篇文章我在PUBMED上找不到全文，大家谁能找到全文麻烦传给我吧，非常感谢！Blood. 2011 Jul 14;118(2):413-5. Epub 2011 May 20.CirculatingmicroRNAs let-7a and miR-16 predict progression-free survival and overall survival in patients with myelodysplastic syndrome.zzjjzhoujing ...

Drnw 我在紧接翻译区后的3‘UTR区发现一个突变，但如何预测3‘-UTR区的突变是micoRNA结合位点，并与基因的表达有关。急求！！万分感谢！！lide658 把这个基因的名字输入到microrNA预测软件中，然后看你所发现的突变位置是否有microrNA结合，然后再看是不是突变位于种子序列中，如果是可以进一步研究突变与否是否会影响microrNA的结合，进而影响到基因的的表达。Drnw lide658 wrote:把这个 ...

wangch84 最近要构建miRNA的表达质粒，要设计引物从基因组中扩增目的基因，发现一些文献里设计引物时用的模板序列是基因组DNA模板序列的反向互补序列，不知具体原理，请赐教。大鹏鸟 DNA是双链啊，PCR扩增出来就都包括了wangch84 to大鹏鸟，有些miRNA位于正链，有些位于负链，具体原理找不到liangpz 这个跟载体有很大关系，取决于载体promoter的方向。如果载体promoter是反向的话，就是这样了 ...

xun梦中 各位大侠好，想请教一下，DNA跑完琼脂糖凝胶电泳，EB染色之后还能做切胶回收吗（排除毒性问题）？在此先谢过各位侠们了啊hdlhq 可以 没有问题shylook 就是得EB染色后你才能看到条带切胶回收呀。。。xun梦中 恩，用Loading buffer作指示的话就得染色。先谢过了啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

小红赛 Lentivirus shRNA-mediated Knockdown of NF-2FG12 lentiviral vector, with an independent open reading frame of green fluorescence protein (GFP), was used to produce small, double-stranded RNA (siRNA) to inhibit target gene expression in targeting cells. To construct the hairpin s ...

我是风儿 请教各位大侠：最近准备用腺病毒作为载体，将某受体的hs-RNA 尾静脉注射干扰肝脏组织的该受体表达，好像hsRNA干扰用于动物模型的研究不是太稳定，请问有哪位高人做过类似实验，给予指点：1、这种干扰方法的效率如何；2、这种干扰作用持续的时间？如果想保持这种干扰作用更长时间，需再次注射？请高手给予指点！谢谢师兄师姐们。乐观自信 你好！有个疑问你从尾静脉注射腺病毒怎么能保证在肝脏组织高表达该ShRNA？为何不直接注射到 ...

penghu 各位同道老师好.本人近期做了一组肿瘤NimbleGen HG18_CpG_Promo Microarray Methylation芯片筛选，结果出来后，有些问题向大家讨教：问题1：发现有的基因启动子甲基化有多个结果，实验人员说是不同转录本的问题。以CITED1为例：但是我不清楚 1、该基因启动子到底有没有被甲基化；2、只有这三个转录本的结果都显示甲基化了才能认为该基因因启动子甲基化而沉默了吗？问题2：在pubmed上， ...

能nca 第一次，自己配了DEPC，还没来得急摇匀，老师就让我们泡上枪头了。实验失败了无数次，要了命了，没找出原因。这次准备重新处理枪头，有几个问题想问问各位师兄师姐：1.装枪头的盒子怎么处理，用DEPC水多擦洗几次烘干行不行？2.那个DEPC水是不是按比例配好之后摇匀一整夜，就可以使用了？3.我把枪头和EP管直接泡在DEPC水里，浸泡24小时候，手带着干净的手套然后一个个的插到枪头盒子里行吗？gjs713 我们这里都是这 ...

飞一闪 本人是全新手，现在手上有一些作为对象的miRNA，想要预测它们的靶基因，具体操作到底应该怎样呢？这段时间经过自己摸索，知道是要用mirbase,tagetscan,starbase来达到目的，也去过这些网站上操作过，但所得结果到底该如何用实在是不知道啊，而且，也不知道自己的这些操作到底有没有意义。虚心求助各位高手，能帮我就下面这个例子解释一下，说说具体流程，感激万分啊！例如：现在想对 let-7 miRNA家族的miR ...