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w_dennis 请教各位高人前辈，有做过基因的部分核苷酸缺失后，回补株构建实验吗？如何操作？请教下pBAD/gⅢ和pBR322质粒构建回补株的原理？叩谢！！:)woxingwosu 看看这个有没有帮助了：http://journal.shouxi.net/qikan/article.php?id=534304w_dennis 谢谢，请问有pBAD/gⅢ和pBR322质粒的信息吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以 ...

proteining 如题，我的实验是缺氧复氧处理脐静脉内皮细胞，一组实验细胞给予适当剂量的P38抑制剂SB203580，在进行缺氧复氧，另外一组不加直接缺氧复氧处理，（另外组此处略去），我得出的结论是加入SB203580预处理的组，其磷酸化的P38的水平显著低于未加SB203580组，也就是它可以抑制P38的磷酸化，我看国内外大部分的实验也是得出的中国结论，但是审稿人却找出了一篇99年BBRC的文献，来质疑我的 ...

yn850307 请大家帮忙提供G418筛选的具体步骤和注意事项。谢谢！zhujoker 筛选之前确定G418浓度：1，由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。2，G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。neo就是编码 ...

heward N-乙酰半胱氨酸DMEM配成50mM母液，NaOH调PH值6.8，然后稀释成10mM、5mM、2.5mM加到大鼠原代肝细胞中，即使不加肝损伤药，单加N-乙酰半胱氨酸，细胞的存活率也在降，与药合用后细胞存活率降得更多，为什么？请教高手，NAC不是对肝损伤有保护作用么？怎么按照上面的方法加了下反而增加毒性？kern6549 不知道你说的单加NAC细胞的存活率也在降的结果是怎么得出来的？有没有设置NAC浓度为0的对 ...

xjcaoliqiong 各位战友，IL-10等细胞因子在组织中检测能否不经过培养，直接匀浆提上清液做免疫组化？刚刚接触实验的新手衷心请教，谢谢！kern6549 两种方法：1、免疫组化检测IL-10。2、组织匀浆ELISA检测IL-10。请不要相混，匀浆还怎么做免疫组化。xjcaoliqiong 谢谢了！zaiju512 呵呵非专业选手wuushark 细胞提cdna，QT-PCR也可以测。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中，我把一个基因的一部分启动子插入到载体中（包含该基因转录起始点），请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变，而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢？比如所包含启动子区域为-1000！~+27（此处是否必须为3的整倍数）woxingwosu 我觉得只要从翻译开始，即ATG， 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好要 ...

清泉煎 本人研究生即将学习生物化学与分子生物学，本科还没有基础，求高手指点，现在应该做好什么准备工作freecell 先买一本本科的教材，仔细自学一下。pengqianjin 以我的经验，最后买这些教材：无机化学、有机化学、生物化学，真正静下心来好好研读，一般3个月就差不多了。无机化学是比较基础的，跟高中学的化学有一定联系。有机化学又是以无机化学为基础。devil19840 用不着从无机化学、有机化学开始学，直接拿一本权威的生物 ...

jianglitcm 我们的试验中要给180-220g大鼠侧脑室注射H89以阻断Pka再观察药物的抗抑郁作用，我之前查到的文献中只有小鼠海马注射H89的量，为5.19ug/ul，那么大鼠的注射剂量如何定？注射5ul够吗？另外，我需要用药物治疗三周，那么H89是这三周内都要给药还是在治疗前给一次就够了呢？向各位专家大侠赐教！感激不尽！鱼cynthia 麻烦问一下 你的H89是用什么稀释的chenlinghezzx 应该是先用D ...

sharon_yin 现在手头有一批病人的血清和血浆，想做些什么，不知道最近有什么比较火的？？zhujoker 多看看nature，cell，sience，你可能就知道到可以做点什么了？LoftyMan 都是些什么狗血的问题和回答啊，你手上有菜刀就能表示你刀工出神入化可以在最新的电视节目上亮相，做梦吧看几篇Nature就能知道怎么做，做梦吧版主zhujoker留言:请您在回答问题时更加注重问题的本身!sharon_yin 你们 ...

dnazyme 全基因组瓦片芯片（whole-genome tiling array）谁用过，给大家讲讲。8D有谁了解这个技术的发展历史和特点、用途的吗？http://en.wikipedia.org/wiki/Tiling_arrayfreecell Whole genome tiling arrays (WGA) use array-based hybridyzation to scan the entire genome of an organism. This is achieved by using a s ...

小猪阿姨 请教各位大侠，本人想建一些列的肿瘤细胞的文库，不知道选择噬菌体文库，还是酵母菌文库好，噬菌体文库是原核表达，酵母菌是真核表达。请分子生物学方面的大侠指教一下！小猪阿姨 请教请教啦！小猪阿姨 请教请教啦！小猪阿姨 没人指教下吗？dnazyme 你的实验目的是什么？噬菌体文库是一种展示短肽的文库，寻找体外的分子间相互作用；酵母菌双杂交文库一般用来模拟体内相互作用。原理和应用差别很大。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

springhello 我想使用流式细胞术分析lentivirus转染293T后滴度，MOI怎么检测？zhujoker 你就使用1ml的病毒上清感染10的6次方个细胞，然后按照流失的结果比值就可以确定你的病毒滴度了。springhello 谢谢你有具体的步骤吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

fanghuili2007 S100A8/A9 induces autophagy and apoptosis via ROS-mediated cross-talk between mitochondria and lysosomes that involves BNIP3.Ghavami S, Eshragi M, Ande SR, Chazin WJ, Klonisch T, Halayko AJ, McNeill KD, Hashemi M, Kerkhoff C, Los M.Cell Res. 2010 Mar;20(3):314-31. Epub 2009 N ...

霍墨轩 :):D8D:I;)ssycock 刚好有，给你发过去了osto 好人啊 可否给我也发一份 sunshineyg01@yahoo.com.cn 谢谢了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

梦话小子 大家给推荐几本实用的分子生物学实验技术的参考书吧，最好是带有原理及常见问题解答的，谢啦！jian_an1 分子 克隆yueweilei 我们实验室也是用的Molecular clonging，挺好的！恋梅时节 刚找到一个，挺好的！huerduo 谢了恋梅时节ulicy1 这个可以不？万流归宗 谢谢了，我也有同样的问题，刚开始准备实验本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄 ...

kaige88 今天看到"转基因玉米惹祸 "文章，想就此对转基因食品安全的问题从专业角度分析其真伪，望大家积极讨论参与。附带转发"转基因玉米惹祸 "报道一篇，希望有些专业人士意见。http://news.sina.com.cn/c/2010-09-22/100318149161s.shtml转基因玉米惹祸http://www.sina.com.cn 2010年09月22日10:03 大众网-齐鲁晚报　　大老鼠消失、母猪爱生死胎、狗肚子里都是水，此外，羊 ...

liuer2000 求助大家一下，我在SIGMA公司买的粉剂药物，用来做细胞处理的，由于量少，我只能一次性全部溶解配成一定浓度的储存液，现在要带去另一个地方（两地约四五个小时的路程），怎样处理才能尽量保持药物的药效？放在冰袋中运输不知是否可以？:)liuer2000 大家有遇到这方面的问题吗？怎么解决的？给点意见啊:)ylhuang0502 这个LZ要查该粉剂药物的稳定性，先在Sigma网站查，如果没有, 就google一下，一般要 ...

xiaonichi 想考博了，要考医学分子生物学，看了有好多人写的。请问有经验的同志觉得谁编的医学分子生物学比较好一点呢。lingyuyuxin 医学分子生物学（供研究生用）——全国高等学校教材、全国高等医药教材建设研究会规划教材、研究生规划教材作 者： 刘德培 主审 查锡良 主编 药立波 副主编出版社： 人民卫生出版社挺好的freecell 这个问题，版内已经讨论多次。建议参考高等教育出版社出版的《医学分子生物学原理》，王琳芳院士主编。这本书的特色是语言通 ...

lingwu 酪氨酸激酶抑制剂PP1和PP2有什么区别？如何选择，急切想知道，谢谢！ylhuang0502 首先纠正一下， PP1和PP2都不是酪氨酸激酶的通用抑制剂，两者均为Src family kinase的选择性抑制剂。其中PP2更常用些，两者的差异很小，化学结构非常相似，两者均不是Src family kinase 特异性抑制剂，两者均可抑制别的激酶的活性，，比如：The Src-selective Kinase Inhibitor PP1 Also Inh ...

KingXY 如题，看文献cross-presentation of cell,是指哪类细胞，和APCs（抗原提呈细胞）是什么关系？谢谢ylhuang0502 The term cross-presentation denotes the ability of certain antigen-presenting cells to take up, process and present extracellular antigens with MHC class I molecules to CD8 T cells (cytot ...