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【求助】HEK293细胞中是否能查到p53蛋白 参与者：yuncheng1973 请问各位同行，正常的人胚肾HEK293细胞做免疫细胞化学染色是否能测到p53蛋白呢？因为p53蛋白在正常细胞中含量很低，所以担心会测不到，有谁做过可以告诉我吗，谢谢！ 参与者：louise3653 你的问题提得好。 HEK293的详细资料请参看美国ATCC网： http://www.atcc.org/common/c ...

【求助】关于血管生成实验 参与者：erik 想设计一实验研究一蛋白对肿瘤细胞血管生成的影响，但不知道需要几种实验方法同时运用才能说明问题，或者说哪几种是常用的（最好简单易行），我是外行，谢谢指教！ 参与者：viv2005 动脉环，小管生成，鸡胚，这几个比较常用，要么就是直接上动物 参与者：erik 我的意思是同时做哪几个就可以说明问题，呵呵，谢谢您的回复！ 参与者：viv2005 我们都是一起做的 ...

【求助】悬浮细胞的免疫组化 参与者：joveandjuno 各位前辈，我想做悬浮细胞的免疫组化，看帖子说应该滴片，滴完片子怎么做组化呢？ 用不用固定什么的？ 我想要看的抗原在细胞膜上。还有，贴壁细胞做免疫组化的话，观察细胞膜上的抗原，应该用什么固定？ 谢谢～ 参与者：laugh 用多聚赖氨酸包被片子来滴片，滴片后离心，去除多余液体，一般用甲醛或多聚甲醛固定，也可以视情况用其他固定剂如冷的丙酮或乙醇 ...

【求助】谁知道液体闪烁仪的探测下限啊 参与者：joytcm 哪位知道液体闪烁仪的探测下限啊，最小能测多少微居呀，多谢啦 参与者：fishbody 这很难说。不同的仪器对不同的核素的测量效率是不一样的，而且液闪的测量还由闪烁液转换光子能量效率的因素。 另外，液体闪烁仪测量到的是cpm（count per minute），而不是uCi。 一般，0.01uCi甚至更低的放射性量就可以测量的。 参与者：j ...

【求助】淋巴细胞分离 参与者：zhangwenli 请教：我现在在做实验，第一步就是取健康人的外周血5ml，分离出里面的淋巴细胞.可是做了好几次都没能把它给分离出来.最后一次，我吸取了白雾状的一层，离心后看不到红色沉淀，结果放在高倍显微镜下一看，绝大部分还是红细胞，里面的淋巴细胞少得可怜.我是按照步骤一步一步的做了，怎么还是把淋巴细胞分离不出来呢?从血中分离淋巴细胞究竟需要注意什么?关键在什么地方 ...

【求助】有没有高人做过细胞-基质粘附实验啊？ 参与者：从天而降的少女 96孔扳上是先铺mtrix gel 再铺FN，还是直接铺FN就可以了呢?滴上去以后风干了就可以吗?还是要等一段时间才可以加细胞悬液?谁告诉我一下啊，多谢.我想检测肿瘤细胞的黏附能力. 有没有高人做过细胞-基质粘附实验啊？ 参与者：sunnyziyang 直接铺FN，超净台内过夜风干，使用前PBS 冲洗2遍，重新水化，再加1%BS ...

【求助】免疫磁珠分选后阳性细胞极少 参与者：fjxm81 今天第一次用MACS磁珠进行胚胎肝细胞阳性分选，我是先将细胞与兔抗鼠一抗孵育，然后再用相应磁珠（羊抗兔磁珠）进行孵育。结果得到的阳性细胞极少无比，从早上到现在饭都没有吃，结果。。。呜呜，各位高手有没有做过类似的实验，给指点一下啊！谢谢。象这样的实验，你们一般一抗会按什么浓度开始试呢？10的7次方的细胞一般是用多少μg抗体进行孵育？ 参 ...

【求助】请教各位老师在测细胞内钙离子浓度时出现的问题 参与者：haitingmao 我在用Fluo3-AM，通过激光共聚焦显微镜检测肿瘤细胞内钙离子浓度的改变时，药物作用24小时后，一个显微镜视野下仅有2－3个细胞内有荧光，且集中在细胞的某一点，而非在细胞内均匀分布。请问这是怎么回事？为什么不是所有细胞都有荧光？ 焦急等待中 参与者：ljch20011455 我前段时间刚做了细胞内钙离子浓度变化检 ...

【求助】PPARγ基因的序列 参与者：清风一号 有谁能提供PPARγ基因的序列吗?我将十分感激，谢谢！！！！ 参与者：yangea 楼主的描述不清楚，PPARγ基因的序列，哪个种属？楼主可以按照下述方法自己查找所需要的： 1、打开ncbi的主页http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ 2、在search项下拉菜单中选择gene，同时在右边for查 ...

【求助】关于ROS的检测方法，谢谢 参与者：llemontree ROS的检测方法都有哪些呢？比如HVA assay，luminol-enhanced chemiluminescence 方法等等，都有什么区别呢？谢谢 参与者：lwjssry ROS的测定方法 细胞内ROS的检测可用DCF法 细胞外可用ROS试剂盒，步骤按说明书进行。 以下是其他信息和文献： key words： 关键词：二氯荧 ...

【求助】启动子片断插入到了pgl3basic载体中，为什么没有检测到荧光？ 参与者：smile1688 我把一个基因的启动子片断插入到了pgl3basic载体中，但是却没有测到荧光。阳性对照，即Pgl3 control检测到荧光。 推测： 1、启动子片断错误。 1000bp，已测序验证，在ATG前40bp，推测离转录起始位点还有200bp以上。 2、细胞的转录效率太低。 但是Pgl3 contro ...

【求助】急！请问淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞需要设门吗？ 参与者：二分之一幸福 分析T细胞亚型，通过淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞，需要向白细胞那样设门吗？谢谢！ 参与者：liu2050 淋巴细胞分离液分离出来的是单个核细胞而不仅仅是单纯的淋巴细胞，还包括nk等一些其他种类单个核细胞。你要分离T细胞亚型，肯定需要2色以上标记，一种是总t细胞的标记，另外一种才是你需要检测的细胞亚型的标记。用总T的标记 ...

【求助】ELISA检测中的问题 参与者：zhou3303 请教各位大虾，小弟用LPS刺激中性粒细胞（2.5×106/ml）表达细胞因子IL-1，TNF-a，IL-6的实验中，ELISA检测上清后，空白孔（只有培养液和细胞）的值也较高，有50pg/ml，甚至有的有300pg/ml，而LPS刺激组的值也只有空白组的2倍多，不知是什么原因，望不佞赐教。 参与者：用心聆听 我在做跟你类似的实验 ...

【求助】MALDI-MS分析 参与者：wuwanjun MALDI-MS分析是什么分析，谢谢 参与者：wuwanjun 是不是-基质辅助激光解析电离质谱分析？ 参与者：jfeiharry MatriX AssistedLaser Desorption Ionization （MALDI），中文一般译为基质辅助激光解吸附质谱技术，其基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，由 ...

【求助】关于如何测定物质的亲水性和疏水性问题 参与者：香香会馆 大家好，对于亲水性和疏水性问题，我的理解是与水的接触角小于90度的就是亲水的，反之就是疏水的，但是对于具体的物质该如何判断，或者有什么方法直接测定呢？ 比如小分子的多肽，该如何判断其亲水性？请大家不吝指教！ 参与者：fishbody 一般化合物的亲水亲脂性是通过测它在水及正辛醇中分配系数。 正辛醇是一种长链烷烃醇，在结构上与生物体内的 ...

【求助】高分子物质如何溶解用于细胞实验？ 参与者：lihai584 我做的实验是考察一种高分子物质对细胞的作用，现在碰到的一个问题是用什么来溶解这种高分子物质。看到别人考察某种药物对细胞的作用，通常选用的方法是用培养基溶解药物，然后和细胞共孵育；我选用的那种物质水溶性很好，但是由于是高分子多糖，所以在预定的浓度下黏度很大。 现在用流式细胞仪进行检测，这个难点更加突出。 方案一：细胞培养，加入高分子 ...

【求助】测定细胞内钙离子浓度都有哪些方法？ 参与者：junxia 想测定某一蛋白对细胞内钙离子浓度的影响。请教各位大虾都有哪些测定方法？好像常用的是共聚焦？除此之外呢？ 参与者：gzgygy 单个观察用confocal。 群体准确性最高的不是confocal而是流式。 参与者：jc_484190 对，流式是不错的，建议你可以试试， 参与者：junxia 楼上两位能提供流氏的参考文献或资料么？ 参与 ...

【求助】关于测定细胞MDA的方法 参与者：m05yuwei 各位战友： 大家好！我想做细胞的MDA，不知用什么方法好。用比色方法一个样本需要多少细胞？细胞太少是不是测不出？有人说要达到一定数量才行。具体步骤可否详告？ 参与者：m05yuwei 没人帮个忙吗？ 参与者：无影无踪 MDA是丙二醛吗？如果是的就比较容易了 参与者：无影无踪 细胞内的检测需要经过适当的处理，即制成约10%的匀浆液，放置-2 ...

【求助】测细胞上清液胰岛素 参与者：hanfeng8225 各位师兄.师姐： 我养的INS－1细胞，想测细胞上清液胰岛素，请问用什么方法啊，谢谢指教！ 新手请多帮助！谢谢！ 参与者：yuqi881 检测液体中胰岛素含量可用的方法： 1、ELISA方法：需要ELISA方法检测胰岛素的试剂盒和酶标仪。 2、放射免疫方法：需要放射免疫法检测胰岛素的试剂盒和放射免疫分析仪 3、化学发光方法：需化学发光法检 ...

【求助】免疫细胞化学固定液的选择 参与者：swift11 求助各位大虾： 我是新手上路，准备做免疫细胞化学。我要检测细胞内的一种蛋白质，用什么固定也比较好？ 参与者：琴心剑胆 4%多聚甲醛 参与者：docqian 用4% PFA固定一般比较好。 此外也可以用丙酮，或者甲醇固定。 需要说明的是，固定对有些抗体很重要，需要选择特定的固定，一般时候，抗体的说明会说明。例如，我染色细胞线粒体的时候（oxp ...