细胞周期/增殖/凋亡检测

willion1985 直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一，是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法，其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物----BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期，和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中，再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合，就能够检测到DNA复制活跃的细胞。但BrdU有一大缺点，就是需要变性DNA后才能与抗体结合，但这就破坏 ...

whl111 P53蛋白具有肿瘤抑制作用，其机制可能是影响肿瘤细胞的凋亡。各位战友有没有想过如果将P53于体外直接作用于肿瘤细胞是不是会引起细胞的凋亡？而如果想办法让P53蛋白在体内能够接触到肿瘤细胞是不是可以起到抑制肿瘤细胞生长的作用呢？pub_wang 不太可能，其通路在肿瘤发生中已被打破，肿瘤中整个平衡都变了。5米 一颗种子当它还是种子的时候，你把种子煮一下也许再也不会发芽，当这颗种子已经长成大树，你在树边浇点热水 ...

韶光逐浅 我想问一下Hoechst凋亡染色试剂盒国产的哪个公司的好啊？yunitongxing 原装进口试剂韶光逐浅 好的，多谢啦本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

lsc000211 最近本人的实验课题中，需要用氧自由基诱导细胞凋亡，目前，氧自由基和凋亡均为研究的重要内容，然而通过产生氧自由基达到凋亡的实验文献却很少，我把收索到的内容上传，大家共勉：(1) 巨噬细胞的吞噬作用　　当细菌、病毒等异物侵入人体时，若身体不作出任何反应，这些异物会在体内迅速繁殖，导致身体患病；庆幸的是，人体遭到异物袭击时会动员其防御系统(主要是白细胞和巨噬细胞，以下称之为“食细胞“)将异物吞噬掉。这些细胞在不断吞噬 ...

carl97 本人最近想本人最近想研究某药物对凋亡调控的机理，如何筛查出该药物相关的作用通路？？？凋亡有很多的信号转导通路，每一通路中涉及很多的分子。如果要筛查，是不是每条同路的关键分子在药物作用后都要分析其表达的情况？？工作量是不是太大？？有无其它好的分析方法？谢谢！！ylhuang0502 估计你用的这个药物不是全新结构的，是否先查查它的类似物的作用靶点？如能查到，这样有的放矢，工作量就会大大降低。另外如果有钱的话，还可 ...

栽好梧桐等凤凰 本人最近用病毒刺激细胞后用荧光定量检测到几个基因下调表达，我的预期效果是要他上调表达的。很多文献报道的是某个基因上调表达后如何做，很少报道下调表达该怎没做，请各位前辈指教下调表达该怎么做。谢谢，提供相关文献更好，谢谢。freecell 你的问题很不清楚。是问下调基本表达的方法还是问怎样检测基因表达是否下调？LoftyMan 一样做，上去了会引起什么改变，下来了又会引起什么改变。比如你发现semaphorin ...

栽好梧桐等凤凰 本人最近用病毒刺激细胞后用荧光定量检测到几个基因下调表达，我的预期效果是要他上调表达的。很多文献报道的是某个基因上调表达后如何做，很少报道下调表达该怎没做，请各位前辈指教下调表达该怎么做。谢谢，提供相关文献更好，谢谢。ylhuang0502 这个要相对麻烦一点，一种办法就是用一种或几种下调表达的基因的质粒转染细胞，进行过表达，然后再进一步研究，你可以先查今年的文献，相作者索要质粒，大部人都会给的。祝好运！ ...

yy59410 在下在做MAPK通路对皮肤成纤维细胞凋亡诱导的作用，我分别用p38,JNK,ERK相应的通路抑制剂阻断相应的通路后看给药后细胞的情况，发现这些通路的阻断并不能阻断药物对细胞的凋亡诱导，想请教坛子里的高手们这是怎么回事？我接下来需要做什么?希望大侠们赐教。不甚感激啊。chuckdouble yy59410 wrote:在下在做MAPK通路对皮肤成纤维细胞凋亡诱导的作用，我分别用p38,JNK,ERK相应的通 ...

barin 前期的石蜡IHC结果发现某某基因在指定类型肿瘤中是高表达的。请问用什么指标、方法检测该基因在指定肿瘤细胞株凋亡和增值好呢？barin 看来只好留着自己解决了。ylhuang0502 1. flow cytometry or other techniques to detect apoptosis2. MTT assay for cell proliferationgood luck!barin 谢谢楼上的。chuckdouble barin wrote:前期的石蜡IHC结 ...

shuaierhu 大家好，最近在做悬浮细胞的实验，要观察药物对细胞的杀伤作用，想请问各位高手，除了mtt，台盼兰染色外，还有没有别的方法呢？barin 我想流式是可以的吧？shuaierhu 我们这里流式坏了，现在准备用hoechst试试，谢谢楼上啊！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

真爱满行囊 我最近在体外细胞做的关于gsk3-beta功能问题，发现药物处理以后，gsk-3-beta的总表达量下调，如果是这样的话1、我是否能够得出gsk-3-beta的活性下调的结论？2、是否还有必要做非活性形式的表达量？我的理解是，基础状态下，gsk-3beta维持的是低活性状态，如果总量都下调了，那应该能够得出活性降低的结论了吧？3、另外，在这种情况下我是否有必要去做gsk-3-beta的216位点的活性形式的表达 ...

sakura042 本新手欲研究nfkb引起内皮细胞凋亡的机制：是否通过jnk通路。这是否是一个信号通路串话的问题？我们用特异性抑制剂阻断nfkb后发现jnk活性下降，是否就能说明nfkb促进内皮细胞凋亡是通过jnk通路呢？还需要再阻断或者过表达jnk通路来反证吗？这个问题困扰了我好久，请教各位高手。sakura042 自己顶一下三叶虫 请问一下你是通过什么方法检测NF-kB的活性的?sakura042 我就做western ...

edwardellen 求助！！！本人菜鸟，最近开始接触凋亡相关信号，在HepG-2中做实验，有一点很困惑，HepG-2中的p53是野生型的还是突变型的？还是两者都存在？查了一些资料，有些文章之间表达的意思模凌两可。困惑啊！哪位好心的达人能给我一个确定的答案呢？另外，是否有做p53相关的牛人能告诉我P53在哪些实验用肿瘤细胞系中是野生型的，在哪些是突变型的？谢谢！谢谢！谢谢！doctormy HepG2是p53野生型的。如果你 ...

antonio2001 调节细胞增殖 的信号通路有哪些？ 那个最重要！！sakura042 Akt通路？ylhuang0502 PI-3K/AKT肯定可以，但问题是，谁最重要？还真是一个好问题？！期待高手回答。chuckdouble antonio2001 wrote:调节细胞增殖 的信号通路有哪些？ 那个最重要！！这个问题好比,一个光棍在找对象时问别人"好女人都有哪些,哪个最好?":D:Dylhuang0502 chuckdouble wrote:这个问题好比, ...

rainbubu 想研究β-catenin在某肿瘤中和细胞增殖和预后的关系，材料用存档的蜡块和冰冻，想用免疫组化来检测β-catenin的表达情况，然后想检测β-catenin的表达和细胞增殖的关系，能不能简单的看β-catenin和PCNA、ki-67之间的关系，有统计学意义就得出β-catenin和细胞增殖有相关性。但是也不能说明细胞增殖就是β-catenin表达异常的结果啊那么怎么才能说明β-catenin和 ...

lsdcfhyj 以及检测PARP的裂解前后蛋白水平用的抗体是否都是一样的？edwardellen 有两者都识别的，也有专门识别剪切体不识别酶原的，用过cell signal的，两种都很好用。PARP也有可以同时识别全长和剪切体的抗体。magichunter 检测caspase-3和激活型的caspase-3分别需要两种不同的抗体，一般CST公司卖的分别包括：cleaved-caspase-3（#9664）和原形态的caspa ...

zj000718 想请问各位大虾 如果损伤致凋亡模型中，经典凋亡途径（caspase-3为代表）表达很好，还会有AIF等非caspase依赖性通路存在吗？(怎么验证他们之间是否存在交互效应呢)如果想从体内抑制caspase通路 什么方法比较可靠呢？基因敲除、局部注射siRNA、局部注射广谱caspase通路抑制剂？？？是否有比较确切的方法呢？？？请做过这方面研究的大神们指教，谢谢!!!freecell http://www.google. ...

einstan001 最近本人正在做缺氧复氧诱导细胞凋亡实验，实验对象为贴壁细胞，诱导完凋亡后须收集细胞提RNA和蛋白并检测一些凋亡相关酶的活性与表达，在缺氧复氧后出现大量漂浮变圆的细胞，由于我采用采用胰酶消化的方法收集细胞后提RNA和蛋白，由于消化前需将原培基倾倒掉并用PBS洗涤细胞，因此这些漂起来变圆的细胞大量丢失，请问这些漂浮变圆的细胞我需要收集吗？这些细胞的丢失对我的实验结果影响大吗？谢谢hggjoy 需 ...

magichunter 我的药物本来是可以促进细胞凋亡的，后来想研究一下自噬和药物促进凋亡之间的关系。所以分别用自噬抑制剂3MA和促进剂Rapamycin与药物共同作用细胞。结果发现，无论是促进自噬还是抑制自噬，均导致细胞的死亡率比原来药物单独作用还要高，这应该怎么解释呢？为什么促进自噬和抑制自噬均增加了细胞的死亡？组别 存活率（1）正常细胞 100%（2）药物处理 57%（3）药物+3MA 36%（4）药物+Rapamycin 38%mag ...

imnini 各位专家，有谁能比较详细的讲解一下影响细胞增殖和迁移的细胞内信号通路？dream82 STAT3介导的信号通路对细胞增殖和迁移都有重要的意义。当然还有很多通路调节细胞增殖和迁移。我主要做STAT3 signaling，所以比较了解。stat3为正常细胞增殖所必须，STAT3敲除的老鼠是胚胎致死的。而绝大多数肿瘤细胞中STAT3都是持续激活的，持续激活的STAt3转录激活下游许多与增殖有关的target ge ...