细胞周期/增殖/凋亡检测

一、细胞凋亡的形态学检测 1、光学显微镜和倒置显微镜 （1） 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 （2） 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。2、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋 ...

MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。 1、培养好细胞点板。 养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。如果知道了细胞的名字，就可以上www.atcc.org检索细胞的培养信息，这个 ...

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(45)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-35-di- phenytetrazoliumromide MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（ ...

(一)细胞： 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。 2 ...

细胞爬片可以买专门的爬片，几块钱一小包的，爬片用前泡酸，高压消毒（包括镊子和枪头）。把用过的24孔板清洗干净，一孔一片，很方便，又互不干扰。把细胞培养到对数生长期，消化后再滴上去，爬1-2天贴壁后（中间可加适量培养液），可在板子里一直做完。清洗时，将PBS滴在片子上即可，不要剧烈摇晃。需要照相时候，再取出来，细胞面贴在载波片上，最好用50%甘油，中性树脂贴不好，容易毁坏细胞形态。取爬片时候，可以用 ...

Chemotaxis Assayby Melissa Swope Purpose The purpose of a chemotaxis assay is to determine whether your protein or small molecule of interest has chemotactic activity on a specific cell type. Chemota ...

Internalization of receptor is measured as the reduction of receptors on the plasma membrane surface. Surface receptors are labeled with fluoresent antibodies which is in turn measured using a flow cy ...

ABER 能实时在线检测发酵罐内活细胞的浓度，密度，干重，生物量体积，电容大小，导电率大小；而不受细胞碎片，细胞团块，死细胞，发酵液泡沫，微载体颗粒等影响。

Terminal deoxynucleotidyl Transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) is an in situ method for detecting the 3'-OH ends of DNA exposed during the internucleosomal cleavage that occurs during a ...

Protocol for Paraffin Sections: Dewax paraffin sections: Incubate slides 55°C 30 min. Xylenes 2 times 2 min. each 100% EtOH 2 times 2 min. each&nb ...

Protocol I: Triton X-100 Lysis Buffer In 96 flat-wells plate incubate 4x10 6 target cells (40 wells of 105 per well) with desired concentration of effectors (105 target cells per well). After incubat ...

Materials from a workshop held March 1997 in Modena Italy. All materials reproduced with permission. Introduction A. Cossarizza Workshop Sponsors Methods in analysis of apoptosis and cell necrosis. Z. ...

BrdU Incorporation Protocol Day 1 Label cells with media containing100 μM BrdU (6 μL/mL of 5 mg/mL stock): Diploid Fibroblasts 4-6 hours ES cells 30 minutes 3T3 cells 2.5 hours Trypsinize ce ...

FIXATION and DNA Staining for Cell Cycle Analysis BackgroundThis method of DNA staining utilizes ethanol to fix the cells and permeabilize the membrane which allows the dye (Propidium Iodide) to enter ...

Fixation 1) Collect 2 X 106 cells. 2) Pellet cells by spinning at 1000 rpm 4°C for 5 minutes. 3) Resuspend cell pellet in 1 ml of cold PBS. 4) Fix cells by adding 4 ml of -20°C absolute ethano ...

许多时候，我的体会，我们会分不清浓缩核，比如分裂后期、分裂末期的核。有时候会误认为是凋亡，所以有必要分清楚。一般认为最大的区别是分裂后期的核是浓染的，但是通常都是成对的或对称的。 我用hoechst，AO/EB染色均能明显显示这个特征，。下面是一些细胞周期的片子吧，hoechst染色中也能看到。Subsequent stages of the cell division cycle. Histon ...

Important notes： Morphological data so far are most reliable and convincing evidence for apoptosis， especially with electromicroscopy Morphological analysis should be included together with ot ...

流式细胞术（Flow Cytometry FCM）是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。其特点是：①测量速度快，最快可在1秒种内计测数万个细胞；②可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；③是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和成果；④既是细胞分析技术，又是 ...

一、开机程序 1．检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。 2．打开储液箱，倒掉废液 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用三蒸水，做分选必须用 PBS 或 FACSFlow ），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 3．将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY ，预热 ...

流式细胞术（FCM）简述 流式细胞术 (Flow Cytometry)是70年代发展起来的一种利用流式细胞仪对细胞等生物粒子的理化及生物学特性（细胞大小、DNA/RNA含量、细胞表面抗原表达等）进行定量、快速、客观多参数相关检测分析的新技术。它借鉴了荧光显微镜技术与血球计数原理同时利用荧光染料激光技术单抗技术以及计算机技术的发展大大提高了检测速度与统计精确性而且从同一个 ...