细胞形态检测

材料： 新鲜脐带 方法： 冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌胶原酶消化液（1mg/mL)，室温消化30min，1000rpm离心5min，弃上清，加1mg/mL胰蛋白酶3 ...

1、如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 ...

问：A549细胞到底是如何形态？我见过三角形，近乎MDCK细胞形态的，还有的呈长梭形。我感觉自己的细胞好像混进了MDCK细胞。大家帮忙诊断一下，谢谢。 ...

1.细胞种类：hepg22.1.5 2.培养天数：传代后第3天； 3.放大倍数：倒置显微镜 X10； 4.培养基种类：DMEM+10%胎牛血清+G418 5.细胞状态与特征简述：细胞贴壁生长 ，抱聚成团 初次培养细胞，请大家看看，给一下意见和建议，谢谢^^ p.s谁能告诉我图中红色箭头所指出的那坨黑乎乎的东西是什么，细胞还是污染？ ...

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以前一直认为大鼠HSCs分离在保证纯度非常高的基础上充其量最大只能得到两个皿光景的量最近分了 得了五个100mm皿密度可以纯度的话我认为是非常高了可以见图分离后48H的老板看了也认同细胞的纯度但他建议可以提高50%得率也就是要78个大皿的数量因为我实验用的是传一代细胞. 大家可以讨论讨论。请点击参加丁香园论坛 ...

Publisher: CRCNumber Of Pages: 288Publication Date: 2006-11-06Sales Rank: 797631ISBN / ASIN: 0849339197EAN: 9780849339196Binding: HardcoverManufacturer: CRCStudio: CRCAverage Rating: Total Reviews: B ...

Description Recent advances in the imaging technique electron microscopy (EM)have improved the methodmaking it more reliable and rewardingparticularly in its description of three-dimensional detail。T ...

1. 分离制备单细胞悬液： （1） 体外培养的细胞株：用胰酶消化，最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液，细胞要计数，具体的量我前边已经说过。 （2） 体内脏器细胞：处死动物，取出脏器，于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。 2. 胶板制备： （1） 取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。盖玻片推匀，不能有气泡，4度凝固5至8分钟。 （2） 水平取 ...

1.细胞爬片； 2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)； 3.PBS漂洗5min； 4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)； 5.PBS漂洗2次，每次5min； 6.1%BSA封闭30min； 7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h； 8.PBS漂洗2次，每次5min； 9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h； 10 ...

1.做细胞爬片(爬片的步骤就不详述了)，注意: 洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛一定要新鲜配制的(一周以内的都能用)， 因为PBS和4%多聚甲醛放久了后，都会有自发荧光。 2.抗体的孵育: 预实验的时候荧光根据文献和经验设定一、二抗的浓度，一抗4度孵育过夜（时间8－12h）；二抗（荧光抗体）孵育时要避光，孵育好后用PBS充分冲洗；可以将做好的片子直接在板子中孵育，如果从节约的角度来看，可以用1 ...

1.细胞欺负生手，也就是消化、吹打操作还有有一定影响的。 2.细胞生长不好与培养基直接相关，培养基中影响最为严重的就是牛血清。 3.支原体污染也是重要原因。但是正如上面朋友讲的，支原体在普通光学显微镜下是读不到的。我曾经检测过支原体污染，用的是牛心浸出液，即：将牛心去结缔组织，剁碎，浸煮，过滤，然后加琼脂成半固体。将细胞培养液做穿刺接种，有支原体者，围绕穿刺管道，会长出云雾状菌落。 4.细菌污染： ...

很多细胞实验都要检测荧光，为方便大家选择合适的方法，在此简单说一下各种荧光检测方法的特点。不足的地方，欢迎大家补充： 1、流式，优点是速度快，非常适合做大数量统计，且样品只被检测一次，完全不用担心荧光淬灭的问题。缺点是只能检测荧光的有无、强度大小，无法提供空间定位信息，无法做荧光定位变化的实验；由于样品只被检测一次，因此无法对同一个样品进行连续观察。例如，做膜蛋白定位时会得到这么一个结果&mdas ...

一、关于如何计算IC50 1、改良寇式法:lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4) Xm:lg 最大剂量&nb ...

丁香园网友hyong915的观点为： 成纤维细胞培养 （一） 原代培养 1、在手术室无菌条件下，切取新鲜的皮肤，增殖性瘢痕和瘢痕疙瘩组织，修除表皮和皮下组织，盐水反复冲洗后放入含PS的DMEM培养液内带回无菌工作间。 2、把组织块置于培养皿内，Hanks液漂洗三遍后吸净Hanks液，眼科剪反复剪切组织块成0.5－1mm3大小。用弯头吸管吸取组织块接种于40ml培养方瓶瓶壁上，组织块间留 ...

PROCEDURE for preparation of activated platelets 1. Centrifuge tube of freshly drawn HEP or EDTA blood at 600 rpm (75xg) for 20 minutes. 2. Remove all of platelet rich plasma (top layer) and place i ...

Trypan blue will stain dead or dying cells. Viable cells are able to repell the dye and do not stain. Note: Trypan blue has a greater affinity for serum proteins than for cellular protein. If the back ...

1. Resuspend cells (vegetative or developed) in phosphate buffer at 1 x 10 8 /ml . 2. Add 50 ul cells to 50 ul 20 nM 3H-cAMP in 5-10 mM DTT (for background binding add same amount of hot cAMP plus 10 ...

I. General Considerations In situ hybridization is a powerful technique which can be very informative. It should be however carefully controlled since it can lead to artefacts. One of the most importa ...

immunofluorescence labeling; that is the antibodies have the fluorescent dye attached. Direct labeling is simpler and quicker than indirect labeling. We strongly recommend direct labeling if you're pl ...