细胞形态检测

PI染色法（活细胞染色）检测细胞凋亡【染料及试剂】（1） 含0.1%TritonX-100的PBS缓冲液（pH7.4）（2） PI染液:将PI（碘化丙啶）溶于含0.1%TritionX-100的PBS中，终浓度为50μg/ml，含RNase 100μg/ml，避光保存。（3） 荧光显微镜【操作方法】制备凋亡细胞悬液，浓度为106/ml；取1ml的 ...

DAPI染色法检测细胞凋亡【材料与试剂】含0.1%Triton X-100的PBS缓冲液；DAPI染料（4，6-diamidino-z-phenylindole）100μg，溶于100ml含0.1%TritionX-100的PBS缓冲液中，避光保存。【操作方法】将制备好的石蜡切片按常规脱蜡、水化（按HE染色的脱蜡方法），用PBS洗5min；或冰冻切片用冰丙酮固定15min，吹干，用PBS洗５m ...

电子显微镜检测法检测细胞凋亡 具有凋亡特征的细胞程序性死亡后，可在扫描或透射电镜下观察到“凋亡小体”，该小体系由细胞膜卷曲、脱落形成的小泡，其内包含有完整的细胞器及核片段。这种小体易被巨噬细胞、上皮细胞等吞噬，借以清除正常发育过程中死亡的细胞。细胞坏死则无此小体形成。但是并非所有发生程序性死亡的细胞皆形成凋亡小体。【仪器与试剂】射电子显微镜或扫描电子显微镜，组织切片机，离心机，离心涂片机 ...

DNA ladder法检测细胞凋亡 发生细胞凋亡时，内源性核酸酶被激活，染色体DNA链在核小体之间被切割，形成180～200个碱基或其整数倍的DNA片段，将这些DNA片段抽提出来进行电泳，可得到DNA梯状条带（DNA ladder）。【材料与试剂】凋亡细胞；蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸钾白细胞裂解液：pH8.0，10mmol/L Tris-HCl，10mmol/L NaC ...

末端转移酶标记技术（TUNEL法）检测细胞凋亡【材料与试剂】（1）TUNEL试剂盒（Boehringer Mannheim公司产品）： ①从瓶2中取出标记液100μl分别作为两个阴性对照. ②将瓶1的全部溶液50μl加入瓶2剩余的450μl标记液中，使其成为500μl的TUNEL混合物。（2）POD转换液（一旦溶解，储存于4℃，不得再冻存）（3）漂洗液：PBS（4）固 ...

凋亡指数和细胞活力的定量测定（荧光染色法） 将细胞悬液与DNA结合的荧光染料混合，应用荧光显微镜观察以显示和计数伴有异常染色质的组织细胞。常用染料为丫啶橙，染色后可以检测整个细胞群中有多少细胞发生了凋亡，但不能区别活细胞和死细胞。因此将丫啶橙和溴化乙啶混合使用，根据两种染料的吸收情况可鉴定死、活细胞。【材料与试剂】100μg/ml丫啶橙或100μg/ml丫啶橙与100μg/ml溴化乙啶的混 ...

Caspase 3 活性测定（FIENA法）检测细胞凋亡 Caspase3 的激活在凋亡过程的细胞事件启动中起着重要作用，有证据表明，在蛋白酶级联切割过程中，Caspase 3处于核心位置。本法运用荧光酶联免疫吸附法（flurometric immunosorbent enzyme assay， FIENA）的原理， Caspase3激活后会作用于其特异的底物: 乙酰化天冬氨酸-谷氨酸- ...

荧光标记法检测细胞凋亡【仪器与试剂】（1） TdT酶（25U/μl）；（2） 生物素标记的-dUTP（Biotin-dUTP）或地高辛标记的dUTP （Digoxingening-11-dUTP）1nmol/μl；（3） 反应缓冲液；（4） 洗涤缓冲液；（5） 异硫氰酸荧光素（FITC）标记的亲合素或链霉亲合素 （2 ...

靶细胞DNA片段的定量分析与杀伤细胞介导的细胞溶解试验 应用此法可以研究CTL、NK细胞介导的凋亡。通过125I-UdR和51Cr双标记细胞，可以同时检测DNA片段和溶解的细胞。【材料及材料】 (1) 125I-UdR标记细胞核和51Cr标记细胞浆的靶细胞：用完全RPMI-1640培养液配成5×104～1×105/ml的细胞悬液；(2) 未标记的CTL；CTL杀伤试 ...

组织和细胞的固定方法 固定的目的是用人为的方法尽可能使组织细胞的形态结构和化学成分保持生活状态，防止组织细胞死后发生自溶和组织腐败。固定还能增加组织块硬度，使其更容易切片，使不同的结构更容易染色。 固定方法有物理固定和化学固定两类，物理固定可采用空气干燥(血涂片)、骤冷(在液氮中迅速冷冻)或微波固定等；化学固定有浸润法(immersion method)和灌流法(perfusion ...

一、形态学鉴定 二、免疫组织细胞化学

一、形态学鉴定 二、免疫组织细胞化学鉴定

一、形态学观察方法 　　（一）、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 　　（二）、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 　　（三）、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死 ...

本文介绍了传代培养细胞染色体的显示方法

在有丝分裂过程中，随着纺锤丝的形成，染色体被牵引到一起难以观察其形态。纺锤体的形成在于细胞质和纺锤体成分的粘度之间的平衡，因此，改变细胞质的粘度，即可破坏纺锤体形成，从而使得染色体均匀散开，且染色体缢痕区更为清楚。

细胞计数方法

问：复苏后的L929培养第三天出现如图所示的情况，细胞形态不好，而且看上去细胞底层有层模糊的东西，电镜下观察有成块的黑点出现。是什么原因呢？另：培养液偏碱。 看上去细胞处于亚健康状态： 1、可能由于培养瓶不干净，而造成细胞底层模糊，而造成的污染； 2、成块的黑点出现可能由于刚复苏出来的细胞部分死亡而聚集成的死细胞团； 3、可能由于细胞在冻存时或是复苏时发生了污染，例如培养基的污染，胰酶的污染，传代 ...

1、原理 用稀乙酸将血液稀释20倍，使红细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在显微镜下计数，求得每立方毫米血液中的白细胞数. 2、器材和试剂 2.1器材 生物显微镜、Neubauer氏血细胞计数池、0.02ml吸管、小试管、刺血针、2ml吸管 2.2试剂 白细胞稀释液：采用3%乙酸溶液。 3、稀释液的配制 采用3%乙酸溶液。即取冰乙酸3ml，加蒸馏水至100ml混合。亦可于上述稀释液中加美蓝或龙胆紫 ...

用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。 轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。 ...

问：我的HeLa的细胞，转了H2BGFP的，已经传了很多代了，慢慢的像是伸出触角一样，起初不是很明显，现在变成这样了。可能是因为什么原因呢？请看图片： 答：Hela细胞在没有加胰岛素的培养基培养下容易形态变化。建议： 1、可能由于血清浓度不够高，导致细胞营养缺失或不良，建议加大血清用量，一般为10%FBS。 2、肿瘤细胞传代次数过多容易影响细胞生长状态细胞容易分枝生长建议传代时控制细胞生长密度而且 ...