细胞培养

一、细胞冷冻保存1.材料生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(SigmaD-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene　5000-0020)、0.4％（w/v）trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)2、冷冻保存方法（1）传统方法:冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储存。-20 ...

r&d Systems如今提供两种新的无血清培养基添加剂，是专为神经细胞的培养而优化的。N21-MaX Media Supplement:适合无星形胶质细胞滋养层的神经元长期培养无血清培养基添加剂，与神经细胞培养的基础培养基共同使用，为神经元的长期培养提供了一个营养丰富且完全限定的培养基，而无需星形胶质细胞滋养层。N21-MaX Media Supplement包含21种不同组分，以支持培养中神经元的长期生存。它经过验证，可支持 ...

开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1 万单位）、7.5％NaHC03 溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS 洗液。用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1）、细胞吹打管（20 ml）(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰 ...

InSphero是通过类器官式3D微组织培养(supplieroforganotypic,biologicalinvitro3Dmicrotissues)开展新药测试的领军型开发商。当前全世界最知名的前十家药物和护肤品制造商产品测试都使用到InSphero的专利微组织技术。InSphero3DInsight™微组织用于化学品应用的效能和毒理体外测试，包括长期效应和炎症介导的毒性效应。开发有可供选择的多种肿 ...

背景细胞的多能性被定义为一个干细胞能够分化成除了胚外组织（如胎盘）的身体所有类型的终末成熟细胞的能力。这种多能性随着多能干细胞分化为终末分化细胞的逐级分化过程中而逐渐丢失。两个众所周知的多能干细胞是胚胎干细胞(ESC)和诱导多能干细胞(iPS) 。图1：多能干细胞(PSC)起源和命运的图示。胚胎干细胞(ESC)来源于正在发育的胚泡的内细胞群(ICM)；诱导多能干细胞（iPS）来自于人为通过对细胞核重新编码而返回多能性状 ...

做cell biology实验，细胞铺板大概是最常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领，铺得不是均匀： 要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。以前分享的一些技巧：1、一般96孔板我每孔是加100微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入，加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下再，继续加剩余的半边板子，都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆 ...

1、称体重：2、腹腔内注射苯巴比妥钠50ｍｇ/kg将大鼠处死,用酒精严格消毒大鼠下颌至全腹皮肤及鼠毛,剪开下颌至中腹部皮肤,打开腹腔,推开肝脏并分离出肝及膈肌间的下腔静脉并给予切开放血。3、肺血管灌洗：分离并部分横断切开气管,插入连接有10ｍｌ注射器(内装ｐＨ7.0ＰＢＳ)的灌洗管并用细线加以固定,在固定的离心段剪断气管,剪开肋骨并打开胸腔将肺和心脏提出胸腔。用20号针(另一端连接20ｍｌ的注射器)穿刺进入右心室并顺 ...

1 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分 ...

版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很 ...

一、酶消化法1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温和，对细胞损伤较小，但是，价格也较贵。中 ...

1、作者：windboy77实验感受：记得刚养心肌细胞时候，开始时候很顺利，但有一次突然细胞就不怎么贴壁了，换液时候一吹打，就发现有许多细胞脱落。我检查了培养箱，可是别人的细胞都长的很好啊，培养基的问题？我仔细观察了一下，培养基粉红透亮，绝对不会污染，血清也没有问题啊，大家都是公用的血清，当时我很迷惑，后来我象老师如实反映问题，他听完我的叙述后想了想，让我把培养基拿给他看，然后告诉我，你的培养基颜色太深了，肯定偏碱，细 ...

1. 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后， 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2. 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15 ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分 ...

一、酶消化法1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温和，对细胞损伤较小，但是，价格也较贵。中 ...

作为一只刚进实验室的菜鸟把自己遇到的东东总结一点发出来，抛砖引玉吧，为即将进实验室的朋友些资料，同时欢迎老鸟们指正。1、在实验室登记领试剂和药品pbs 1640 Gbico的FBS 台盼蓝 计数板 酒精灯 胶塞 封口胶 消毒的喷剂 记号笔 镊子 标签 饭盒 消毒时包饭盒的布 冻存管 冻存剂 离心管 培养瓶 6孔板 96空板 吸管 吸球。pbs 1640 Gbico的FBS 我都是买的现成的，就是那些实验室老师用原料配好了来卖的那种，我是害怕自己本来就是一个新手，为省那钱自己配，别污染了多的事情都来了， ...

本视频主要介绍了用慢病毒腺病毒进行细胞转染之实验前期准备工作。用慢病毒腺病毒进行细胞转染之实验前期准备工作（真人示范）

一、方法根据1999年lutz的方法，做了一些改进，培养DC很多人用的是高浓度的细胞，高浓度的因子，但是这样产量不高，我每一次分离一只小鼠的骨髓，大约可以得到107个细胞，分成10盘，每盘10 ml培养基，用低浓度的细胞因子，这样可以大大提高产量，每次能培养得到undefined107个DC左右，流式细胞术检测：细胞纯度应该大于90%，这个方法还是很好用的。二、具体步骤1. C57Bl/6小鼠2. 处死小鼠，75%酒精浸泡10 min。3. 解剖取出小鼠股 ...

细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题，在细胞培养中支原体感染发生率达到63%,只要有一个具有增殖能力的支原体就能引起培养体系的污染,支原体则像慢性毒药一般，杀细胞于无形中，据统计，超过25%的细胞系中感染了支原体，研究者又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，也不易引起注意，所以研究者并不知晓。支原体污染发生后危害巨大，能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，改变细胞、篡改数据，造成 ...

一、实验准备1. 配液：Hanks液、低糖DMEM液、高糖DMEM液、胰酶消化液、双抗液、碳酸氢钠液、盐酸液。2. 取鼠：鼠盆用棉铺好，取鼠。3. 准备：事先检查显微镜、磁力搅拌器及离心机是否好用，提前三小时把小牛血清、胰酶、抗生素拿出来化开。其余未冻药品也提前20分钟拿出来缓和一下。新洁尔灭（0.1％）泡纱布（用10ml5％的新洁尔灭加水至500ml即得），消毒地面（1：500的84液）。用酒精棉球擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分 ...

养了很久的细胞，有一些经验和体会总结一下，和大家分享一下。关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。1.不同的细胞，喜欢的环境是不一样的。这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以 ...

转自丁香园铁杆站友hjdd原创。养了很久的细胞，有一些经验和体会总结一下，和大家分享一下。关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。1. 不同的细胞，喜欢的环境是不一样的。这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长 ...