细胞培养

（一）仪器的清洗总的分为两大类：可泡酸的和不可泡酸消毒的。 酸指消毒的清洁液（由浓硫酸、重铬酸钾和蒸馏水配置的次强酸液）可泡酸的主要是玻璃仪器培养细胞的板子，离心管等塑料器皿。消毒过程：自来水冲洗3-5遍----→超声波清洗30′----→烘干----→濅入清洁液过夜（不少于6h）----→自来水冲洗15－20遍----→蒸馏水洗3-5遍，烘干备用。不可泡酸的主要是胶塞和盖子，虑器等，先在清水中濅泡后冲洗烘干----→2%NaOH濅泡过夜，自来水冲洗， ...

1、实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养工作包括：工作液配制、无菌操作（采样）、温育、无菌处理，细胞和用品贮存等。细胞培养室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。2、常用设施及设备（1）超净 ...

（1）高糖DMEM溶液用新配制的三蒸水配制，高糖DMEM干粉（规格10×1L），溶入约总量的1/3的三蒸水，并用水洗净包装袋，在磁力搅拌器上搅拌30分钟，加入NaHCO2 3.75克，补加水至最终量。用1N HCL调整PH为7.2，0.22μm滤膜抽滤除菌，分装-20℃保存，使用时加10%的胎牛血清及双抗溶液（最终浓度：青霉素100U/ml，链霉素 100μg/ml）（2） 胎牛血清使用前56℃水浴30分钟灭活，无菌条件下分装成10ml包装，- ...

在细胞和组织培养领域，从上世纪70年代起二维（2D）培养科学家已经看到其局限性，并且更多地关注三维（3D）培养的优点，目前越来越多的研究从细胞培养的平面环境中转变到三维培养。当前，虽然对基于细胞的效应研究和毒性测试中，制药工业如今最常用的依旧是2D方式，3D培养技术已在学术研究中被广泛应用。细胞增殖，分化和代谢等生理活动都严重受到微环境的影响。当前细胞生物学研究大多还是在二维平面培养进行，这种平面培养、生长方式与 ...

很多实验者都不bother自己洗手，酒精一喷就去实验了。我告诉大家，这是极端错误。个人经验是，你仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手，一直到手腕，指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。然后手上喷酒精。有人穿半截袖的白大褂去做实验，每次我看到都想骂。白大褂袖口要长，最好是袖口扎紧的那种，如果不能的话，把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。戴上手套后手请避免接触工作台外面，如果不得已接触，那 ...

在细胞和组织培养领域，从上世纪70年代起二维（2D）培养科学家已经看到其局限性，并且更多地关注三维（3D）培养的优点，目前越来越多的研究从细胞培养的平面环境中转变到三维培养。当前，虽然对基于细胞的效应研究和毒性测试中，制药工业如今最常用的依旧是2D方式，3D培养技术已在学术研究中被广泛应用。细胞增殖，分化和代谢等生理活动都严重受到微环境的影响。当前细胞生物学研究大多还是在二维平面培养进行，这种平面培养、生长方式与 ...

养了很久的细胞，有一些经验和体会总结一下，和大家分享一下。关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。

1.不同的细胞，喜欢的环境是不一样的。

这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。

有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时 ...

1，天然培养基血清、组织提取液等血清：主要是小牛血清、胎牛血清营养成分--白蛋白、纤连蛋白、球蛋白、转铁蛋白、蛋白酶抑制剂、生长因子等蛋白质和多肽；40-80mg/ml氨基酸；0.01-1.0vmol/L 尿素； 170-300ug/ml胆固醇、脂肪酸、磷脂等类脂；2-10mg/ml葡萄糖、乳酸、丙酮酸等碳水化合物；1-2mg/ml钙、氯、铁、钾、钠、锌等无机物；014-0.16mol/L胰岛素、甲状腺素等激素；0.1-200nmol/L维生素A、叶 ...

树突状细胞培养操作步骤准备补充剂将补充剂混合物在 15~25℃ 解冻。在无菌条件下用移液枪小心地将补充剂混合物混匀。然后，把补充剂混合物全部加到基础培养基中。盖上瓶子，轻轻混匀直到形成均一的混合物。DC生成培养基所附带的相应的细胞因子组合包含有成分A和B，它们都是以100X 的原液状态运输的。注意：此时不要将化合物B加入培养基中。DC基础培养基不带细胞因子，因此使用时必须另外自行添加。新鲜分离的单核 DC 细胞的传代对于新鲜分离自 ...

PromoCell MSCDXF培养墓的主要特点：1、适用于骨髓/脐带/脂肪来源的MSC；2、在更短的培养时间内细胞扩增更多；3、细胞倍增速度更快；4、操作简便，基础培养基和补充剂一次性混合后，即可实现培养；5、更低的接种密度， 4000个细胞/cm2；6、在细胞传代的整个过程中，都可维持免疫表型、多能性及对T细胞的抑制能力；7、无血清、无动物源性，成分已知。优点：1、精确控制MSC的类型，自我增值或定向分化2、更低的使用成本3、降低 ...

PromoCell的人类心肌细胞（HCM）分@自成人心B的心室。该组织来源于正在进行心脏移植的患者的外植心脏。a）当一T大V本的心肌进行了灌注和4完全消化-，会分@bcdf的心肌 细胞。gh一i细胞会自发进行常n的p缩，sgt一iu只w受cy激-才会p缩。由于gp缩功能，它们通常能用于生理研究。然s，wn律的肌节排布，会阻止大多数的细胞附着cTC培,皿上，因此，t们在体外是无法生长的。b）s另外一9情况下，当成人心肌进行的 ...

胎牛血清是细胞培养常用的添加物， 目前享有盛誉的Life等国际品牌的最好胎牛血清价格飞涨，500ML从原来的3000-4000元涨到现在7000-8000元，给很多科研单位或机构造成了巨大的压力，不管是科研单位还是经销商都费劲心机储备高质量的国际进口血清。然而前期储备的较低价格的进口血清总有用完的一天， 因此国内相关单位非常关注寻求新型的细胞培养基。 但并不是所有的细胞培养需要最高质量的胎牛血清， 而且市场上有些培养基完全 ...

第一就是要稀释。我们要留血浆（肝素钠抗凝的采血管采的血，5～6ml），所以分离、取出血浆后加入和红细胞等体积的生理盐水，一般3ml左右，混匀。第二，分离液不在乎体积有多少，主要是高度，如果离心管很粗的话（呵呵，挺吃亏的），就要多加一些，细一点的离心管就可以少加一些，一般高度要超过3cm。第三，看你要分离的血是什么来源的，成人外周血比较好分，脐血和胎盘血不好分。当然，发生溶血和凝血的话就更难分了。第四，血的保存很重要，采血后不 ...

一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或DMSO作保护剂，这两种物质能提高细 ...

从二维到三维体内细胞生活在三维环境中。细胞在三维环境中与周围的细胞外基质、其它细胞相互作用，接受各种信号，指导其增殖、分化或迁移等行为。由于生物体的复杂性及技术的限制，多年来人们对细胞行为的研究通常是把细胞从整体中分离，研究其在二维环境中的行为和功能，从而得到对细胞的基本认识。但在二维培养体系下，细胞的形态、分化、细胞与基质间的相互作用以及细胞与细胞间的相互作用与体内生理条件下细胞的行为存在明显差异。近年越来越 ...

细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具，形状、规格、用途多样，你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫？你是否正为如何方便、正确的使用培养板而苦恼？你对如何处理培养板是否也有困惑？对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会？请看丁香园资深站友总结的「细胞培养板的选择」。细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U 型和V 型）；培养孔的孔数有 6、12、24、48、96、384、1536 孔等；根据材质的不同有 Terasaki 板和普通细胞 ...

版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很 ...

一、原代培养及其操作步骤 原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。其操作步骤如下。 1. 剪切组织　先将所取得的组织，用D-Hanks ...

细胞接种或传代以后，实验者每天或至多间隔1～2d，要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化，做换液或传代处理，如发现异常情况应及时采取措施。 1. 细胞形态　生长状态良好的细胞，在一般显微镜下观察时可见，细胞透明度大、折光性强、轮廓不清。细胞生长不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则甚至失去原有特点，如上皮细胞变成类上皮细 ...

一、清洗 新采用和重新使用的培养器皿，都要严格清洗，以防各种有害物质对培养细胞损害。培养用的塑料器皿目前主要依靠进口，均已无菌密封包装，可直接使用。对于塑料瓶盖或胶塞等，可水中浸泡后用2％NaOH煮沸10～20min，自来水中浸泡和蒸馏水漂洗2～3次，晾干备用。细胞培养中的绝大部分器皿系玻璃制品，清洗过程为以下步骤。 1. 浸泡　新使用或重复使用的玻璃器皿须经5％盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30min，水洗。以去除新购进玻璃器皿所 ...