细胞培养

woowe97417 要转一个带氯霉素抗性的质粒到DH5α保存，但是发现用的DH5α对氯霉素不敏感，氯霉素是用无水乙醇配的，有做过类似实验的站友帮忙解答一下，谢谢啦！gingivalis 严谨型质粒 25 ug/ml松弛性质粒 170 ug/ml《现代分子生物学实验技术》--P753 (卢圣栋)DH5α应该对氯霉素敏感，如果在上述两个浓度条件下，DH5α能生长，那就是DH5α出问题了，高压灭菌后扔掉，换新的重做。woowe97417 谢谢楼上的， ...

不要太懒哦 请教各位高手，如果在细胞的消化传代过程中，我想以EDTA替代胰酶对细胞进行消化的话，EDTA的配方？？？浓度？？多谢！！佳杰宝贝 EDTA可以代替胰酶吗？黑糊糊2000 EDTA 不能代替trypsin,EDTA是螯合剂结合钙离子的，钙离子可以抑制胰酶的作用，所以采用胰酶和EDTA一起来作用，当然EDTA 因为对螯合细胞结构之间的钙离子的作用，所以对细胞有一定程度的离散作用，一般多用的浓度是0.02% 可以用不含钙镁的平衡盐溶 ...

lifengna 各位战友，最近在做雷帕霉素对mTOR通路的抑制试验，培养的是C2C12细胞，在分化阶段进行干预，其中一组单独添加50 um/L雷帕霉素，奇怪的是不仅没有抑制C2C12的分化，反而比空白组更好，这是怎么回事呢？排除实验操作中的问题。谢谢大侠出手相救！zhm1212 你做雷帕霉素50 um/L，这个浓度难道不高吗？有报道称全血中雷帕霉素安全有效的浓度窗为5．5～16．4 nmol／Lbubu88 你是用的哪个公司的雷帕霉素？ ...

ph1996 请教各位战友：刚买来细胞因子TNF-α，peprotech公司的产品，说明书中未具体说明这个细胞因子是如何来配，以及长期保存的话如何配母液。请各位用过这个细胞因子的战友给解答一下，谢谢，在线等~~~~ph1996 说明书中提到，如果长期保存，可以用含有0.1%的BSA的BUFFER来存，可这个BUFFER是什么啊？freecell 按照蛋白质的保存方法就可以了，DPBS加入终浓度20%的甘油，-80冻存。ph1996 刚 ...

细胞因子 近日在本版QQ群的讨论中，有战友问到EMEM和MEM的区别是什么，实际上这是同一种培养基，E在这里指的是Eagle（人名）。有鉴于此，特查阅相关文献和参考书，将有关培养基发展的简史介绍如下，并附上常用的几种培养基的使用选择点，期望大家一起讨论并介绍实际运用中的经验和体会。最初进行细胞培养使用的是天然培养基，即组织提取物和体液。随着细胞系的不断增加，对质量更加稳定的培养基的需求也不断增加，由此出现了现在广泛 ...

zhuoer9401 我在养一种细胞，分别用低糖培养液和高糖培养液，然后做RT-PCR，我扩增得这种基因在低糖得时候不能扩增出来，但是在高糖得时候能扩增出来。可能就是在低糖的时候不转录，而在高糖得时候转录。我的发现有没有意义啊？zhujoker 你的发现理论上是有意义的。但是不知道你的基因到底是什么基因了，细胞到底是什么细胞了？因为如果你养的是肿瘤细胞，并且你发现的这个基因是原癌基因的话，你的这个发现就更有意义了。因为 ...

licanming 请问大家用sigma公司的PMA时，储存液的浓度是配多少的？保存期多长？我是准备用DMSO配，我看说明书的意思是储存液浓度为20mM，但我工作液的浓度只要100nM，故很难分装和稀释。如果储存液浓度低一点，会不会对保存时间产生影响啊？我在园子里搜过，有用1mg/ml的，但我不知他是否用sigma公司的。licanming 自己顶一下amygdala 对于保存而言当然是浓度越高越好，稀释1万倍也是很正常的 ...

happy_840524 请问一下高手，我的MCF-7细胞老是养养就长出触角，而且长出触角后越长越慢，复苏了再养还是这样，我觉得我的培养液和操作都没有问题，因为另外一个细胞养的挺好，请高手指点。r1990en 我也是这种情况啊，不知道楼主的问题最后是怎么解决的？冬天的落阳 我的细胞也这样本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcomi ...

幽幽水 请问各位：如果所取肿瘤组织只有米粒大小，能同时做免疫组化和细胞培养吗？幽幽水 请各位给些建议，我现在弄开题报告，马上要开题了，很急。谢谢，十分谢谢！Fasta921 先培养细胞吧，不能断了自己的后路。呵呵免疫组化可以放在细胞培养后点做。幽幽水 呵呵，nlyydy 如果是医院取的组织建议先做细胞培养做免疫组化可以试着申请病理科取腊块或者切片，一般医院都有保存wanglinling 免疫组化一般取黄豆大点吧。一粒米要做两种有点不现实 ...

licanming 我的GF109203x（Bisindolylmaleimide I，Gö 6850）是sigma的，看说明书上是用DMSO配制母液，但未有说明稀释母液可以用哪些试剂，还是用DMSO吗？我看过一篇文献是用培养基稀释的。请问各位有无经验？一般都是用什么来配的？如果还用DMSO，那会不会DMSO过多，引起细胞损伤？licanming 可以用PBS稀释吗？licanming 通过这两天阅读文献，发现都是用培养基来配的，所 ...

zhanghaopeng 大家是按照什么浓度稀释、给药的呢？zhanghaopeng 自己顶一下吧！doctormy DAPT在体外的应用浓度从50 nM至50µM 不等，要根据细胞类型，作用时间等因素综合考虑，最重要的是参考文献，要有据可依。通常DAPT用DMSO溶解配置成10 mM的 stock solution ，溶解后保存在−70°C ，并在1个月内用完。zhanghaopeng 好的，谢谢啦！elegance_janet 请问DAPT是否可以通过血 ...

skybjp123 现在我要做一种药物对培养细胞的影响，观察这种药物是通过影响何种转录因子起作用的，如何设计一个实验呢？不知道这样设计行不行？加药组和未加药组进行对比，所反应的指标用PCR测定其含量，发现加药组和未加药组有明显的区别，然后使用Wstern blot 方法测定两组的相关的转录因子表达的区别，来证明是这个药物是通过这些转录因子起了作用，不知道这样的实验是否科学？另外这些转录因子在之前的文章中已经证明可以调控 ...

wingpuppy 刚刚接触这两个药物实验室没有人做过粗粗看了几篇文献发现条件都不是很一致尤其有的条件一个很成功，另一个却反应细胞全都漂了所以让我很头疼请教一下用过的达人刚开始的时候是不是应该摸一下梯度那么范围一般设计在多少呢，尤其是时间怎么来设定急等，谢谢！lrh75 我也想知道，顶一下wingpuppy 怎么没人回呢自己顶一下吧瓷不旧1992 请问你解决了吗。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以 ...

fanyi701019 请问U0126对哪种肿瘤细胞比较敏感，用药的终浓度是多少？用药时间是多少？amygdala U0126对MEK-ERK信号的抑制作用很明显，一般的细胞株都可以使用。终浓度10 μM左右，预处理15-30min。可以根据实际情况作适当调整。feiqi 怎么我看到一篇nature medicine上的一篇论文上是U0126 0.5 μM处理48小时啊？paulin98122 版主您好，请问如何预处理，如果我要长期观察MEK ...

daniao130 最近查文献发现carlsbad公司有提供nf-kb的EMSA检测试剂盒，不知道有没有sp1的。有用过活着熟悉的请告知小弟，非常感谢！之前的细胞加药干预培养后检测转录因子EMSA的效果都很差，这次打算改用试剂盒试试LWP1981 这个sp1，我以前做过，细胞的比较容易出结果！LWP1981 VIAGENE北京公司的，你可以咨询，这两个转录因子我都做过。挺容易出结果的！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的 ...

今天我想跟大家分享关于肝细胞选择的一些技巧，希望大家的研发之路可以走的顺利一些，搞科研不容易啊。1.如果你的实验室之前没有成功分离肝细胞的经验积累，建议大家还是不要尝试了，这个的确不太容易分离而且肝细胞的冷冻复苏里面有很多的技巧，一时半会儿很难掌握（我们有客户花了8个月的时间，最终还是失败了），因此如果自己分只会浪费更多的时间。2. 如果经济条件许可最简单的就是选用贴壁肝细胞。贴壁肝细胞比悬浮肝细胞的质量更高具体表 ...

选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：(1 ）建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。(2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640 。(4) 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比 ...

1.如何选用培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件：细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM, 10% 热灭活马血清3T6 成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清A549 上皮细胞 人 肺癌 F-12K, 10% ...

每天孝敬细胞比孝敬爹妈还用心，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?　　早走早脱身，从此专注黑生物 1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。　　2. 不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。　　3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。　　4. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换 (灭菌水加进去)。　　5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。　　6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在 ...

1、首先说清洗：对于玻璃器皿（如移液管、盖玻片之类）可先用酸液浸泡24h以上，再用清水浸泡24h。之后用清水将移液管冲洗10遍，除去残留酸液，再用双蒸水冲洗3-5遍，彻底洗净后放入不锈钢筒中，双层牛皮纸扎口，高压灭菌20min，烘干待用。我们实验室的酸液一般是次强酸液（重铬酸钾120g 浓硫酸200 mL 蒸馏水1 000 mL）配液时要小心烫伤。装培养基的瓶子则要在每次用完培养基以后就要立即洗净，临用时再次用清水冲洗3-5遍，再用双蒸 ...