细胞培养

1 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞 ...

1．基本营养物质 （1）糖：六碳糖主要能源、维持渗透压，含葡萄糖1-5%。 （2）氨基酸：维持生存需12种氨基酸（精、胱、亮、异亮、赖、蛋、苯丙、苏、色、组、酪、缬）。谷氨酰胺需量最大缺乏时细胞生长不良。 单 细胞培养 或细胞量少时所需氨基酸的种类和量增多，细胞主要利用左旋氨基酸异构体。 （3）维生素：细胞大部分需水溶性B族维生素，Vitc不可少，1-10mg/100ml可促进正常细胞生长繁殖。 ...

细胞培养基的基本要求 1．营养成分：氨基酸、单糖、维生素、无机离子与微量元素。 2．促生长因子及激素 3．渗透压 4．pH 5．无毒、无污染 细胞培养基组成及作用 1．氨基酸 组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而 ...

1．科学研究 （1）药物研究开发，如新药筛选，疫苗、基因工程药物、细胞工程、药物研究与开发、单克隆抗体制备等。 （2）基础研究，如药物作用机理、基因功能、疾病发生机理等研究。 2．生物制药 （1）疫苗生产：如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)，多肽疫苗（肿瘤疫苗)等。 （2）基因工程药物生产：如EPO等。 （3）抗体药物、基因治疗药物生产。 （4）细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物 ...

细胞培养基发展趋势 1．无血清培养基：是设计用来在无血清条件下促使特殊类型的细胞生长或进行专门应用的培养基。需要添加生长因子和/或细胞因子，含有个别蛋白或大量蛋白组分。其主要优点：增加确定性；性能更一致；容易进行纯化和下游加工；提高制品安全性和/或产量。 2．无蛋白培养基：培养基中没有添加蛋白，但仍然可能包含一些动物或植物来源的成分（如低分子量肽的各种水解物）。&nbs ...

一、细胞培养基本概念 细胞培养 是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。 细胞培养 的培养物为单个细胞或细胞群。 在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。外周血淋巴 细胞培养 具有时间短、技术简便、可重复取材等优点，它在临床染色体分析中使用最广泛。体外 ...

培养细胞形态 体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征，可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。如羊水细胞为贴附型细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。 　　1.成纤维型细胞 　　在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名，细胞在支持物表面呈梭 ...

经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。 无血清培养基(serum free mediumSFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但 ...

一、无蛋白培养基（protein free midiumPFM）:即不含有动物蛋白的培养基。无血清培养基仍含有较多的动物蛋白，如胰岛素，转铁蛋白、牛血清白蛋白等。从生物技术发展的趋势来看，不含动物蛋白的培养基又广泛的应用前景，许多利用基因工程技术重组的蛋白质最终要应用于人体，如果再生长过程中使用了含有动物蛋白质的培养基，纯化过程就比较复杂，最终要达到一定的质量标准也有一定的难度。无蛋白培养基就是为 ...

合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。它有一定的配方，是一种理想的培养基。目前合成培养基多达10多余种，有的培养基仍在不断进行改良。早期组织培养是利用天然培养基，目前合成培养基已经成为一种标准化的商品，从最初的基本培养基发展到无血清培养基、无蛋白培养基，并且还在不断发展。合成培养基的出现极大的促进了组织培养技术的普及发展。 一、基本组分 基本培 ...

天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期，体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，因此逐渐为合成培养基所替代。目前广泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。 一、血清(serum) 细胞培养 的发展，培养基的质量又是关键，而培 ...

1.培养用水:体外培养的细胞对水质特别敏感，对水的纯度要求较高。培养用水中如果含有一些杂质，即使含量极微，有时也会影响细胞的存活和生长，甚至导致细胞死亡。用金属蒸馏器制备的蒸馏水，可能会含有某些金属离子，一般不作为培养用水。配制培养用液应使用经石英玻璃蒸馏器三次蒸馏的三蒸水或超纯水净化装置制备的超纯水。最好用龙头瓶贮存，存放时间一般不应超过2周。 2.缓冲溶液、生理盐水、平衡盐溶液 ...

现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与 细胞培养 有密切关系，特别是在医药领域的发展， 细胞培养 更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过 细胞培养 来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不 细胞培养 ，杂交瘤单 克隆 抗体，完全是通过 细胞培养 来实现的，既使是现在飞速 ...

体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。 一、营养成分 维持细胞生长的营养条件一般包括以下几个方面： 1.氨基酸：是细胞合成蛋白质的原料。所有细胞都需要12种必须氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸。此外还需要谷氨酰胺，它在细胞代谢过程中有重要作用，所含的氮是核 ...

原代培养:即第一次培养，是指将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。有几方面含义： 培养物一经接种到培养器皿（瓶）中就不在分割，任其生长繁殖； 原代培养中的“代”并非细胞的“代”数，因为培养过程中细胞经多次分裂已经产生多代子细胞； &nb ...

动物细胞培养技术能否大规模工业化、商业化，关键在于能否设计出合适的生物反应器（bioreactor）。由于动物细胞与微生物细胞有很大差异，传统的微生物反应器显然不适用于动物细胞的大规模培养。首先必须满足在低剪切力及良好的混合状态下，能够提供充足的氧以供细胞生长及细胞进行产物的合成。 一、生物反应器分类 目前，动物 细胞培养 用生物反应器主要包括：转瓶培养器、塑料袋增殖器 ...

一、微载体培养应用 此技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术目前已渐日趋完善和成熟，并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，放大容易。目前微载体培养广泛用于培养各种类型细胞，生产疫苗、蛋白质产品，如293细胞、成肌细胞、Vero细胞、CHO细胞。 使用较多的反应 ...

根据动物细胞的类型，可采用贴壁培养、悬浮培养和固定化培养等三种培养方法进行大规模培养。 一、动物细胞生长特性及培养温度 1.细胞生长缓慢，易污染，培养需用抗生素 2.细胞大，无细胞壁，机械强度低，环境适应性差 &n ...

1、准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75% 酒精擦拭手至肘部。 2、布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3、处理组织：把组织块置于烧杯中，用 Hanks 液漂洗 2~3 次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中 30~60 分钟。 4、剪切：用眼科剪把组织切成 2~3 毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多 30~50 ...

1.打开无菌工作台及净化室的紫外灯，消毒半小时以上。 2.进入净化室前先关闭紫外灯，打开超净台风机，等待30min以上，以排尽臭氧。 3.穿好隔离衣，戴好口罩，帽子。 4.风淋2分钟。 5.0.1%过氧乙酸水泡手，擦干。 6.点燃酒精灯；超净台内应避免放入过多的物品；使用的吸管，滴管，试管，培养瓶等均事先灭菌。 7.打开各类瓶盖前先过火，以固定灰尘；打开的瓶口、试管口过火焰，镊子使用前应经 ...