细胞培养

我正在培养MCF-7细胞，在此介绍一下我给细胞传代的经验： 细胞放在显微镜下观察，细胞无污染、退缩，等其长满培养瓶约70%-80%时即可进行传代操作，具体步骤如下： 1、 打开瓶盖，弃上清2.D-HANK‘S夜（以50ml培养瓶为例，下同） 2、吸管清洗后弃之； 3、加0.25%胰酶2吸管； 4、轻摇晃后置入37度温箱； 5、3-5分钟后置显微镜下观察，见细胞胞质退缩，变圆； 6、吸去 ...

Jurkat细胞（人外周血白血病T细胞），是一种悬浮细胞。我的经验如下： 1、培养液：RPMI1640，15％小牛血清，2％Na2CO3，1％HEPES，青霉素100IU／1ml，庆大霉素100IU／ml； 2、培养条件：5％CO2，37度，30％湿度； 3、细胞复苏：要快速将冻存管放入37度水中，不断轻轻摇晃，直到细胞完全溶解，加入10ml左右的培养液，800～1000rpm，10分钟离心，之后 ...

vero（非洲绿猴肾cell):贴壁细胞，以25ml小方瓶为例，培养液用的是MEM。 MEM的配制：10%小牛血清，1%双抗，3%谷氨酰胺，1~1.5%NaHCO3. 传代方法： 1、倒掉培养液，如果细胞脏的话可用PBS洗两次，否则不用。 2.、胰酶0.25%2ml消化1~3分钟，容易消化. 3、倒掉胰酶，加MEM9~12ml将贴壁细胞摇至悬浮，并用吸管吹匀，一传三或一传四。 4、置37度，5%C ...

SP 2/0是小鼠骨髓瘤细胞株，贴壁生长，科室给学生开实验就用此细胞，所用培养基为1640，用小牛血清，浓度15%生长较好。培养孵箱为37度，5%的CO2。 开始将复苏的细胞传到小培养瓶（如25ml)，由于细胞分泌各种因子及细胞间的相互作用，因此生长较快，1-2天就可进行传代（当然要达到80-90%的融合）。 消化采用0.25%的胰酶，在显微镜下观察，看细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少 ...

首先要把0.25%的胰酶和培养液在37度水浴20~30分钟(预热)。从培养箱中拿出培养的细胞瓶(一般我是让它长到90%几再传代的)，吸去培养液，可用PBS洗两遍。也可不洗。加入适量0.25%胰酶消化(试瓶子的大小而定，如250毫升的瓶子加1毫升就行了)，让它都浸湿细胞就可以吸去了。等个三十秒就在手上拍打，不要太用劲。就可以看到细胞脱落了，再加入3毫升左右的培养液吹打(这时加的培养液不要太多，否则难 ...

我养的细胞都是乳腺癌细胞，以下几种： 1、MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可， 10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液 ...

吸出培养基，吸得越干净越好，直接加入1ml胰酶（T－25瓶），放到37度培养箱消化。 是否需要用hanks 或 pbs之类得缓冲洗细胞并不绝对必要，我都没有洗，感觉应该洗一下更好，但也更麻烦并增加了污染得可能性。如果细胞长得太老，可以先加入1ml胰酶在细胞表面浸润一下就吸出来，然后再加入1ml胰酶消化。胰酶在使用前最好预热到37度。由于胰酶平时保存在4度，反复预热对胰酶的活性不好，我的经验是将胰酶 ...

我养过皮肤成纤维细胞和THP-1细胞。皮肤成纤维细胞是贴壁生长的。THP-1细胞是悬浮的。 由于我们实验室养细胞的时间也不是很长，所以也只能说说自己平时的操作了。 先说皮肤成纤维细胞。当细胞铺满瓶底，也就是细胞与细胞之间没有间隙时，就可以传代了。一般十天左右传一代。先吸弃旧培养液，用D-Hanks液洗两遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆盖瓶底为准。加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底，然后静 ...

我培养过不少肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如： （１）　Ａ５４９（肺腺癌） （２）　ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌） （３）　８０１（非小肺细胞癌） （４）　ＮＣＩＨ４６０　（大细胞肺癌） 在消化传代过程中，步骤基本一致： 吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化液（Ｔｒｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ）－＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞吸去消化液 ...

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。 细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶 ...

B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的，不过中科院说不清，我也就说不清了。总之是B16。 细胞总的来说比较好养，操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养，一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了，细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青，感觉不灭活比灭活要好养一些。 传代操作，主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养，但是及时换液，否则也很容易死亡、 ...

材料 相差显微镜，荧光显微镜，手术器械，雄性SD大鼠，体重250-450 g，戊巴比妥钠，200目尼龙网，小牛血清（或胎牛血清，则更好），DMEM，胰酶消化液（以HBSS配），Nycodenz（以GBSS配），D-Hanks'（KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 ...

对于普通使用的缓冲液，PH值随温度变化而变化。 下表列出温度改变10℃时，PH值的变化情况： 例如 20℃下配制PH7.4 Tris缓冲液40℃时PH值为 7.4-(2x0.310)＝6.78 缓冲系统 pKa/20℃ pKa/10℃ Mes 6.15 -0.110 Ada 6.60 -0.110 Pipes 6.80 -0.085 Aces 6.90 -0.200 Bes 7.15 -0 ...

初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20% ...

器材与试剂 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等 具体步骤 1. 水： 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水. 2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)： 主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗 溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HP ...

体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。 营养成分 1. 氨基酸：所有细胞都需要12种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。 2. 单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。 体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖 ...

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM 10% 热灭活马血清 3T6 成纤维细 ...

1. 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2. 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含 ...

This protocol describes a method for the transformation of lymphoblasts by Epstein-Barr Virus (EBV). Cells may be isolated from whole blood or taken from cryopreserved non-immortalized stocks (please ...

本人具有数年的细胞培养经验，期间经历了无数次的失败和成功，回想起来有苦也有甜，现在把中国疾病预防控制中心和我自己的经验结合起来，制作成MDCK细胞培养SOP，欢迎大家参阅： 一、目的 MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。 二、适用范围 适用于疾控中心所有技术人员 。 三、程序 （一）生物安全要求 实验室生物安全级别： ...