细胞培养

支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。 支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央无颗粒群或中央束。 支原体 ...

PBS的配制： 在800ml蒸馏水中溶解8g NaCL，0.2g KCL，1.44g 磷酸氢二钠和0.24克磷酸二氢钾，用HCL调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1升，在1.034x10（5），高压蒸汽灭菌20分钟。室温保存。一般用于实验室中的PBS缓冲液都是这样配制，而不用摩尔分数表示。 PBS(Phosphate-buffered Saline) 分子克隆上的配方 NaCl: 8g KCl: ...

丁香园网友yuanjianmei的问题为： 胶原酶2一定要用D-hank's液配制吗？ 消化血管细胞一次要用多少啊？ 丁香园网友张艳红的观点为： 用D-hank's液配制也可，但不一定。我做的是软骨细胞的原代培养，用的是1640完全培养基配制的。你消化血管细胞如果是做原代培养，我估计用6-8ml就可。我用时每次用8-10ml。当然，这也得视取用的组织特性和组织的量而定。仅供参考。 丁香园网友ww ...

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...

丁香园网友yflfen的问题为： 1. 配制培养基时碳酸氢钠和hepes添加量之间有没有什么必然的联系？我已经的做法对培养基的质量有没有影响，影响有多大？我可否按DMEM的说明书添加3.7g/L的碳酸氢钠，此外再自己再另行添加20mM的hepes。 我参考其他文献上的做法时，就有疑问，但后来还是“根据文献介绍（但文献中用的是Hyclone的DMEM）只添加了1.97g/L的碳酸氢钠，同 ...

PC12是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系属神经嵴源性具有神经细胞特性. 由于具有分化型和未分化型两种形式因此很多朋友包括我本人在内都困惑过做实验时应该选择哪种类型? 根据最近查到的资料发现无论分化型还是未分化型都可以作为神经细胞来使用分化型的PC12可以看待为成熟的神经元因为无论形态还是生化特征都与神经细胞类似.而未分化型PC12可以看待为未成熟的神经元. 值得注意的一个问题是关于PC12培养液的使用 ...

1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。 2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。 3、注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650 ...

一、常规的试剂配制： 1、培养基：选用高糖型DMEM/F12 (1:1)培养基干粉（含15 mmol Hepes），每升培养液中加入碳酸氢钠1.8 g，调节pH值7.0，0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌后，加入谷氨酰胺、无菌的青霉素和链霉素液，使其终浓度分别为0.5 mmol/L 、100 U/ml和100 μg /ml，分装后置于4℃保存，临用前加入2%的B27。神经细胞代谢旺盛，选 ...

细胞培养基 培养基是既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。培养基的种类很多，按其物质状态分为半固体培养基和液体培养基两类；按其来源分为合成培养基和天然培养基。 （1）合成培养基：合成培养基是根据细胞所需物质的种类和数量严格配制而成的。内含碳水化合物、氨基酸、脂类、无机盐、维生素、微量无素和细胞生长因子等。单独使用细胞虽有生存但不能很好的生长增殖。 ...

污染是细胞培养技术中面临的主要问题。由每一种细胞有其独特的培养体系，因此污染造成后果也不尽相同。某些污染的发生往往难以察觉检测，而且污染源能长期共存于培养体系中，这类染事实上大部分被人们忽视了。培养的细胞作为个生物体，会对培养环境以及环境中的污染物作相应的反应，造成培养细胞生物学特性的改变，而实验结果造成潜在的威胁，而且随着污染时间的长而增加。培养环境中的物理、化学及生物因素都可能入培养环境造成污 ...

大规模培养哺乳类细胞是生产许多临床和医学上重要生物制品的一种有效的方法，这些生物制品包括疫苗、干扰素、激素、生长因子和单克隆抗体等，推动了生物学和医学的发展，给医学卫生事业带来了巨大的社会效益和经济效益。基因工程技术、细胞工程技术，以及新的细胞大规模繁殖培养系统的发展，是构成上述成就的主要原因。然而，体外大规模繁殖真核细胞要比原核细胞困难得多，如细菌、酵母菌和霉菌的细胞壁厚，能耐受搅拌，不易破碎， ...

一、培养基的历史 体外培养（in vitro culture）包括：组织培养（tissue culture）、细胞培养（cell culture）、器官培养（organ culture）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百年的发展历史， ...

常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在 ...

无菌操作基本技术 1、实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70%ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作 ...

培养基 1、关于培养基，如果不是买液体的，那么其ph问题一定要给予充分重视！配置过程中的调解我就不说了，能用ph计最好！ 2、关于培养基的保存，如果你有输液瓶，那么我建议你每一次打开以后，最好还是换一个胶塞。如果象我一样就是普通培养瓶，那么记得一定要用封口膜封口，不要担心封口膜会带来更多的污染！你可以先将封口膜在使用前开紫外时略微照一下！但是保存封口膜最好找一个密封的瓶子等，比如吃完糖的罐子。 3 ...

问：我手上现有冻存的小鼠c26结肠癌和lewis肺癌组织块，请问怎样把癌细胞分离出来培养，然后接种到小鼠身上？ 答：方法： 1、组织块——酒精浸泡——剪碎——Hank's冲洗——胰酶消化——离心——Hank's冲洗——离心&mdas ...

初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃ ...

1.建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。 2.其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。 3.根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640 。 4.用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁 ...

1.干粉，买了后一定要保存在4度。有人保存在－20度我认为没有必要。但4度是非常必要的。保证期是有提示的。 2.配好的无血清培养基一定保存在4度，保存不要超过3个月。用时根据提示要加入谷胺酰胺。 3.加入血清的培养基，最好保存在4度不要超过1个月，从时间太长，活性下降。当然稍微长点也不一定出问题。但是根据细胞而定；如果原代培养，最好新鲜，如果是肿瘤细胞，或仅维持传代就不太要紧。但是原则是越新越好。 ...

注意事项 1.认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 2.配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。 3.配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 4.所用器皿应严格消毒。 5.配制好的培养基应马上过滤，无菌保存 ...