1. Fen细胞培养于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中,在25cm2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05%胰蛋白酶,0.02% EDTA的PBS消化细胞5分钟,洗涤后,用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。 2. 取96孔细胞培养板,每孔加0.1ml细胞悬液,在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培 养箱中培养24小时,让细胞帖壁。每孔加0.1ml效应细胞悬液,效靶比10:1到50 ...
一、用51Cr铬酸钠标记靶细胞 短期标记法 1.用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞,去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi(3.7MBq)51Cr铬酸钠,37℃水浴中标记1小时,每5~10分钟摇晃一次,混匀细胞。 2.如上用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次,每次400×g 10分钟。用50ml RPMI-1640培养液悬浮细胞,置37℃水浴30分钟,以 ...
植物原生质体融合和培养在理论和实践上都有很大的意义,在植物遗传工程和育种研究上具有广阔的应用前景。它是植物同源、异源多倍体获得的途径之一,它不仅能克服远缘杂交有性不亲和障碍,也可克眼传统的通过有性杂交诱导多倍体植株的麻烦,最终将野生种的远缘基因导入栽培种中,原生质体融合技术可望成为作物改良的有力工具之一。植物原生质体培养方法起源于植物单细胞的培养方法。1954年,植物单细胞培养才获得成功。Mlli ...
1.ATP反应液(Bio-Orbit)是粉末状混合物,含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol醋酸镁、50mg BSA和0.1μmol无机焦磷酸。在4℃可以保存1个月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在-20℃长期保存。 2.在已经完成促增殖或抑生长试验后的96孔细胞培养板中(每孔含100μl细胞培养液),每孔加0.1m ...
肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。一、组织培养肿瘤细胞生物学特性肿瘤细胞与体内正常细胞相比,不论在体内或在体外,在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿瘤细胞 ...
1. 收到细胞株包裹时, 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形, 若有请立即通知。细胞 株请尽速开始培养, 或立即冷冻保存(置于–70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)。 2. 冷冻细胞解冻程序: 2.1. 依据细胞株数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比例, 制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之血清种类, 若因实验需要, 必须有所不同时, 务必以缓慢 ...
氨基酸 氨基酸是组成蛋白质的基本单位.不同种类的细胞对氨基酸的要求各异但有几种氨基酸细胞自身不能合成必须依靠培养液提供这几种氨基酸称为必需氨基酸.其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸在缺少谷氨酰胺时细胞生长不良而死亡.因此各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺.但是由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定应置于-20℃冰箱中保存在使用前加入培养液内.已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时还应重新加 ...
目的要求 1.掌握一般培养基制备的原则和要求。 2.熟悉一般培养基制备的过程。 操作步骤 一、培养基的制备原则和要求 培养基是根据各类微生物生长繁殖的需要,用人工方法把多种物质混合而成的营养物。一般用来分离、培养菌类。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养基。在制备培养基时,应掌握如下原则和要求: (一)培养基必须含有细菌生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须 ...
采用这种方法的主要是Sysmex生产NE和SE系列血液分析仪,如SE-9000。此类仪器白细胞分类通过四个不同检测系统完成。 1.嗜酸性细胞检测系统 血液进入仪器后,经旋转阀准确分血2·4μl 加入0·6ml嗜酸性细胞计数的溶血剂,混合,由于试剂特殊的PH,使得除嗜酸性细胞以外的所有细胞溶解或萎缩,含有完整的嗜酸性粒细胞250μl液体通过小孔时,使计数电路产生脉冲而被计数。 2.嗜碱性细胞 ...
一、 常规操作1. 穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套,可脱在门外的衣帽架上。2. 穿着专用拖鞋。在缓冲间换下自己的鞋子,尽量避免在缓冲间走动、停留。3. 细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。二、 培养箱使用规则1. 从培养箱取放物品前,用酒精清洁双手(或手套),尽量缩短开门时间和减少开门次数。__培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱 ...
细胞株(系)的使用,为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的,长期连续传代的细胞,不仅消耗大量的人力和物力,而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化,因而细胞失去原有的遗传特性,有时还会由于细胞污染而造成传代中断,种子丢失。因此,在实际工作中常需冻存一定数量的细胞,以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养室的常规工作和通用技术。第一节 细胞的冻存一、概述目前,细胞冻存最常用的技 ...
细胞是一切生物体最基本的结构单位和功能单位。细胞学研究在医学科学乃至生命科学中占有十分重要的地位。近代细胞生物学发展十分迅速,其研究方法逐步从传统的定性描述发展到定量的、细胞群体的研究,以获得更为客观的、具有统计学意义的测量数据,供进一步深入的研究。由此形成了一个新的领域,新的学科,即分析细胞学。流式细胞分析术(FCM)是分析细胞学最重要的组成部分。分析细胞学也称为定量细胞学。它既是细胞生物学发展 ...
人们曾以极大的努力来开展细胞移植以修复心脏和血管组织,但仍有许多问题尚待解答。还需要实验研究方面的进一步实验,需要仔细评估临床工作。本单元交流了这两方面的探讨。 (一)K Pinkornell报告从切下的皮下脂肪选择干细胞。细胞通过培养方法选择,可以在标准条件下生长。比较直接分离出来后的基线状态和培养30天之后的基因表达。基因表达分析集中于肌节(Sarcomeric)基因和与心脏有关的转录因子。分 ...
一、组织培养基本概念组织培养(Tissue Culture)指的是从体内取出组织摹拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下,使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。细胞培养( Cell Culture)用的也是同样方法,培养物是单个细胞或细胞群。在培养组织过程中,现代的培养技术尚不能在体外长期维持组织的结构和机能长期不变,因此在进行培养时,不论培养物是组织或细胞都要生活在人工环境中。生存环 ...
这里是一份GIBCO的低糖DMEM粉剂配制说明(普通高糖的DMEM培养基配法是一样的): TO PREPARE undefinedLIQUID 1. Measrue out 5% less distilled water than desired total volume of medium using a mixing container that is as close to the final vol ...
关键词:细胞因子 目前,细胞因子已广泛应用于临床的已有EPO、IFN-α、G-CSF、GM-CSF以及试用于临床的白细胞介素等。为了研究细胞因子在生理系统的作用以及了解细胞因子产品用于临床治疗的效果,进行细胞因子的检测就必不可少,而且用于临床诊断的细胞因子分析方法必须适用于常规操作。细胞因子的检测尚未在临床诊断上广泛开展,已知目前采用的细胞因子检测方法均不完善,且不同的检测方法所得的结果差异较 ...
细胞在体外培养后,如一切条件适宜,便可生存和进行生命活动,如移动等,但最主要的是生长和增殖。生长和增殖并非同一概念,细胞生长指的是:细胞体积增大,而细胞增殖是细胞数量增多。体外培养细胞来源于体内,其基本细胞生物学规律和体内相同。但随生活环境的改变,很多方面如形态结构和增殖规律等,与体内时又有所别。这里所叙述的是“体外培养细胞生物学”,即有关细胞在体外培养条件下的细胞生物学行为。它具有着本身的特点和 ...
金鹰 邢达(华南师范大学激光生命科学广东省重点实验室 广州510631)摘要 以绿色荧光蛋白( GFP) 作为标记基因转入人类肺癌细胞系(ASTC2a21) 经800 mg/ L G418 筛选 获得5 株高表达细胞系. 利用流式细胞仪对GFP 表达的稳定性进行了初步研究 结果表明本实验中有些细胞株间GFP 表达稳定性有显著差异( P 成瘤后用氩离子激光器产生的488 nm 蓝光经扩束后直接激 ...
一、纺锤体阻断剂(Spindle inhibitor) 在有丝分裂过程中,随着纺锤丝的形成,染色体被牵引到一起难以观察其形态。纺锤体的形成在于细胞质和纺锤体成分的粘度之间的平衡,因此,改变细胞质的粘度,即可破坏纺锤体形成,从而使得染色体均匀散开,且染色体缢痕区更为清楚。 在培养中使用的纺锤体阻断剂为秋水仙素,在终止培养前加入适量秋水仙素,使正在分裂的细胞停留在中期,以获得大量分裂相 ...
(1.山西农业大学食品科学与工程学院,山西太谷 030801;2.山西农业大学太原畜牧兽医学院,山西太原 030001) 摘 要: 细胞融合技术已在农业、工业、医药等领域取得了开创性的研究成果,应用领域不断扩大。该技术不仅为核质关系、基因定位、基因调控、遗传互补、细胞免疫、疾病发生、膜蛋白动力学等理论领域的研究提供了有力的手段,而且被广泛应用于免疫学、遗传学、发育生物学,在实际应用中特别是在单 ...