蛋白相互作用技术

除了个别在PAGE胶上利用荧光或者酶活性直接做类似Western反应的“前卫”方法，印迹法的常规主流，无论是Southern、Northern还是Western Blot，都需要将电泳结果转印到膜上固定，再进行显色显影反应。对于各种Blot来说，作为承载实验结果的载体，包括各类斑点杂交或者克隆转印，膜的选择就显得很重要。 德国老牌的厂家Schleicher & Schuell是世界第一个生 ...

我用的是罗氏TUNEL试剂盒，有哪位亲爱的师哥师姐知道蛋白酶 K工作液（10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl， pH 7.4-8）配方的操作意思？蛋白酶 K工作液：10-20 μg/ml in 10 mM Tris/HCl， pH 7.4-8，怎么配啊？？？？ 答： ph 7.4： 0.2M 的Tris 25ml，再加42ml的0.1M的HCL即可 ph 7 ...

WB(western blot)实验，为分子生物学经典实验之一。常用来进行蛋白分子量估算，蛋白功能研究等实验。 在该实验中，需要进行一抗、二抗及荧光底物孵育等过程。常规情况下将经过转印的PVDF膜等于玻璃皿中或者杂交袋中与抗体孵育。但是，在玻璃皿中孵育，常常使用抗体的量较大，且抗体回收导致抗体的质量下降；在杂交袋中孵育，虽然使用抗体较少，但是常导致杂交袋和转印膜（PVDF膜等）的表面相互摩擦，导 ...

如何选择凝胶做分离纯化工作的人都知道，选择合适的填料是至关重要的。 1.测定------分子量、PI 当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳PH。 2.选 ...

罗氏公司TUNEL细胞凋亡检测程序（In situ cell death detection kit-POD法）一、原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下， ...

注意：Label 溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴，严禁吸入和食入。 反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中，按有毒废物处理。试剂盒组成：小瓶/盖子 1 蓝色 标签 酶溶液 内容物 大肠杆菌重组牛胸腺末端脱氧核苷酸转移 酶，在 storage buffer 中 10×conc. 5×50ul 在 reaction buffer 中的核苷酸混合物 1×conc. 5×550ul 抗荧光素抗体， ...

积层胶（或称浓缩胶）的作用原理？在缓冲系统中的弱酸，如甘氨酸，在pH6.7时很少解离，其有效泳动速率很低，而氯离子却有很高的泳动速率，蛋白质的泳动速率介于两者之间。加上电 压以后，作为先导离子的氯离子和尾随离子的甘氨酸离子分离开来，并在其后面留下一个导电性较低的区带。由于导电性和电场强度成反比，这一区带便获得较高的 电压梯度，加速甘氨酸离子的泳动，使其赶上氯离子，建立起甘氨酸和氯离子的电压梯度和泳 ...

2.1 浓缩样品1、要浓缩的样品含盐量必须0.3M以上，含盐量低的样品须补加到0.3MNaCl。2、在内管（附有3KD膜）中加入500µl样品，将内管套入外管。3、对称放置离心管，14520rpm(即14000g)离心。（离心5min约浓缩2倍，10min约4倍，15min约6倍，20min约8倍，30min约10倍）。4、离心结束后，将内管倒置套在另一个干净的离心管呢，3880rpm离心min ...

苏木精-伊红染色方法，简称HE染色方法，是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法。在病理学实验室中称为常规染色方法。病理细胞和组织学的诊断，教学和研究都是用HE染色方法观察正常和病变组织的形态结构。因此病理学工作者必需学习和掌握这种染色方法。 （一）HE染色的基本原理 1．细胞核染色的原理 细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸 ...

cOmplete His-Tag Purification Resin 灵活纯化蛋白、保证效能 选择靶蛋白适宜的缓冲条件 cOmplete His-Tag Purification Resin是一种新型的高效能IMAC基质，用于裂解液中His标签蛋白的一步法纯化，操作方便。采用罗氏特殊的镍螯合化学技术，该纯化树脂与常用的还原剂（如DTT ）、金属蛋白酶螯合抑制剂（如E DTA）兼容， ...

泛素－蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasome system UPS）是细胞内蛋白质降解的主要途径，参与细胞内80%以上蛋白质的降解。本视频清楚地解析了泛素-蛋白酶体系统的作用及工作流程。泛素-蛋白酶体系统作用及工作流程 ...

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蛋白质是生命活动的执行者，细胞内的生理变化都是通过蛋白质来实现的。但是生命活动中各项功能和行为不是由单一的蛋白质来完成的，需要蛋白质与蛋白质，蛋白质与核酸之间的相互作用来实现的。蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。于是对于蛋白之间相互作用的研究也变的很重要，关于研究方法也是层出不穷。 在我们实验研究的过程中主要用到以下几种技术： 1.酵母双杂交（Y2H） ...

生物大分子的结构与功能的研究是了解分子水平的先象的基础。没有对生物大分子的结构与功能的认识，就没有分子生物学。正如没有DNA双螺旋结构的发现，就没有遗传传达传递的中心法则，也就没有今天的分子生物学。结构分子以由第一分子进入对复和物乃至多亚基，多分子复和体结构研究。 同时，过去难以研究的分子水平上的生命运动情况也随着研究的深入和技术手段的发展而逐渐由难点变为热点。蛋白质晶体学研究已从生物大分子静 ...

酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。 一、利用酵母双杂交 ...

基因组（genome）包含的遗传信息经转录产生mRNA，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组（transcriptome）。很显然，不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的蛋白质称为蛋白质组（proteome）。同理，不同细胞在不同生理或病理状态下所表达的蛋白质的种类 ...

研究蛋白-蛋白相互作用是理解生命活动的基础。蛋白质—蛋白质互作网络是生物信息调控的主要实现方式，是决定细胞命运的关键因素。检测蛋白质间相互作用的实验方法有哪些？这些检测方法各有什么优缺点？总结如下。 一、生化方法 共纯化、共沉淀，在不同基质上进行色谱层析（需要补充）蛋白质亲和色谱 基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上（如Sepharose），当细胞抽提液经过改基质时， ...

蛋白质-蛋白质相互作用图谱能对细胞功能和蛋白组机制提供有用信息。除了在线预测蛋白相互作用外，通过比较具有相对专一性语义关系的的两基因语义注释（Gene Ontology terms GO）的相似性，可以得到重建酵母蛋白互作网络图谱的新方法。为了验证这种方法的有效性，利用高置信蛋白互作标准数据校正确认。 由此种方法预测重建的蛋白互作网络含40753种互作关系，2259 ...

蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。把原来spaces空间上的一篇蛋白质与蛋白质间相互作用研究方法转来，算是实验技巧分类目录的首篇。 一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因 ...