蛋白质活性测定

相关专题 Bradford法测蛋白质浓度 一、实验目的 配制一组浓度分别为0.10mg/ml ，0.08mg/ml，0.06mg/ml ，0.04mg/ml ，0.02mg/ml，0 mg/ml的牛血清蛋白(BSA)溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度 ...

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 一、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 (一)、试剂： 1、考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G—2504.7%(W/V)乙醇，8.5% ...

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 一、药品的配制步骤 (一)、实验准备： 1、 准备所需的药品和玻璃仪器。 2、 洗涤。(怎样洗涤算干净?) (二)、计算： 1、百分比浓度计算： 1)、G/V比 例如配1% NaCl，称1g NaCl溶于100ml 水。 2)、V/V比： 例如配75%乙醇100ml，75%×100%=100%×X ...

相关专题 Bradford法检测蛋白浓度专题 考马斯亮蓝法也称考马斯蓝染色法(coomassie blue staining)又称Bradford法。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸 ...

相关专题 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每一种酶的作用时，常以比活(酶活力单位/mg蛋白)表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。常用测定方法有Lowry法和考马斯亮蓝G-250染料结合法。本实验将分别介绍这两种方法。 一、考马斯 ...

相关专题 LOWRY法蛋白定量专题 对许多实验来说，确定蛋白样品浓度是至关重要的。如果在2D电泳中，蛋白过多或过少，产生的后果都将是相当严重的。大多数蛋白样品可通过比色测定法定量。在典型的蛋白测定中，化学试剂加入到蛋白样品溶液里产生颜色变化，这一变化可由分光光度计或酶标仪检测，并与已知浓度的蛋白标准曲线作比较。Bio–Rad 提供了4种蛋白测 ...

相关专题 酵母双杂交技术专题 LexA酵母双杂交系统简介 一、LexA酵母双杂交系统的设计原理 报告质粒p8op-LacZ的GAL4 UAS编码序列被完全去除，因此在缺乏LexA融合激活剂的情况下，报告基因LacZ的转录活性为零，该基因的筛选标志为URA3，可以作为有自主复制能力的质粒存在于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因组 ...

相关专题 酵母双杂交技术专题 1.构建CaM诱饵质粒 ① PCR 扩增CaM基因的开放阅读框，正向和反向引物分别加接酶切位点。 ② 扩增得到的CaM插入T载体( T–CaM) 。 ③ T–CaM和pGBKT7 质粒分别双酶切。 ④ 胶回收目的DNA。 ⑤ 将CaM连入pGBKT7，构建成表达载体pGBKT-CaM，转化大肠杆菌DH5&alp ...

相关专题 酵母双杂交技术专题 1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办? 在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收 ...

相关专题 蛋白激酶将磷酸基团从ATP转移到蛋白多肽底物上的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基，直接影响目标的活性和功能。放射性研究表明，真核细胞中大约30%的蛋白经过磷酸化修饰。这一关键的翻译后修饰调控了广泛的细胞活性，包括细胞周期、分化、代谢和神经元通讯。此外，异常的磷酸化事件与许多疾病状态相关。在评估磷酸化时，选择的方法可能会有所不同，这取决于 ...

相关专题 不同的蛋白质分离纯化的方法不同，但蛋白质分离纯化的操作步骤基本类似，那么如何进行细菌蛋白的提取呢？这里总结细菌蛋白的提取的实验试剂、操作步骤以及一些注意事项。 实验试剂 采用T7• Tag Affinity Purification Kit T7•Tag抗体琼脂。B/W缓冲液：4.29mM Na2HPO4，1. ...

相关专题 Folin—酚法蛋白质含量测定法是最为灵敏的方法，但其试剂也不容易配制。本实验的主要目的是掌握分光光度计的使用方法，学习Folin—酚法测定血清蛋白的含量。 一、目的 1、学习分光光度计的原理和使用方法。 2、学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理和方法。 3、进一步掌握比色法或分光光度法，准确测定未知样品。 二、原理 蛋白质浓 ...

相关专题 蛋白marker产品选择指南 条带模糊： 电压过高或电泳时间过长，产热过多导致电泳缓冲液温度升高。建议参照Trans产品使用说明书。 电泳缓冲液陈旧，建议使用新鲜的电泳缓冲液，为了获得理想的结果建议在使用前将缓冲液预冷。 分离胶的浓度偏低，建议使用合适的胶浓度。 SDS-PAGE凝胶放置时间过长，建议使用新配制的凝胶电泳。 带型不整 ...

相关专题 限制性核酸内切酶产品选择专题 一、限制性内切酶对DNA消化的方案 1.限制性内切酶反应在灭菌的0.5ml离心管中进行。 2. 20μl体积反应体系如下： DNA 0.2-1 μg 10×酶切buffer 2.0 μl 限制性内切酶 1-2 u(单位) 加ddH2O 至 20 μl 限制性内切酶最后加入，轻轻混 ...

相关专题 纸层析法是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。本文主要介绍了纸层析法分离鉴定氨基酸的实验原理、器材和具体操作步骤。 纸层析法 一、目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 层析溶剂由有机溶剂和水组成 ...

相关专题 蛋白质在PH等于等电点时，溶解度最小。本文主要介绍了利用沉淀实验测定蛋白质等电点的实验原理、器材、试剂和具体操作步骤。 蛋白质PH位于等电点时溶解度最低 一、蛋白质等电点的测定 1、目的 (1)了解蛋白质的两性解离性质。 (2)学习测定蛋白质等电点的一种方法。 2、原理 蛋白质是两性电解质。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶 ...

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拉曼光谱技术是一种非接触，无损的快速检测技术，能方便地给出物质的结构、组分等指纹信息，并且能从分子层面上识别各类物质及晶型结构，非常适合用于制药过程及药品检测。 虽然红外吸收光谱技术已经广泛地应用于制药行业，但其具有一定的局限性。与红外吸收光谱相比，拉曼光谱具有如下明显的技术优势： 光谱分辨率更高，能给出更多的光谱细节，信息更加丰富； 拉曼测试简单，不需要制样。红外需要制样，对于某 ...

材料与试剂 1. 99.5%乙醇 2. 100%乙酸 3. 亚硫酸氢钠 4. 硝酸银 5. 甲醛溶液（37%） 6. 碳酸钠 7. 硫代硫酸钠 ...

原理 BCR蛋白分析是一种对样品中总蛋白进行量化的分析方法，原理是在碱性溶液中蛋白质可以将Cu2+还原成Cu1+（双缩脲反应），从而出现明显的紫色，铜离子被还原主要是蛋白质分子中半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸，色氨酸四种氨基酸的作用，然而，与Coomassie燃料结合反应不同的是，一般的多肽键都能形成颜色，从而减少了由于蛋白质不同的变异性。 与Bradford分析实验相比较，BCA实验分析更加客观 ...