细胞分析

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荧光辅助糖电泳的优化 点击下载： ...

琼脂糖凝胶电泳检测调亡细胞 1．用不同方法诱导细胞调亡后，取106调亡细胞，置1.5ml离心管中，用PBS洗涤一次。在微量离心机上全速离心5秒钟，去上清液。加入100μl含5mol/L异硫氰酸胍，100mmol/L 2-巯基乙醇的25mmol/L枸橼酸钠缓冲液pH7.0，在旋涡混悬器上混悬20秒钟，破坏细胞，变性蛋白质。 2．加入50μl含7.5mol/L醋酸氨和0.8mg/ml糖原 ...

在细胞核中，DNA是环状附着在核基质上，细胞裂解过程中，核基质被溶解、抽提，DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口，则使DNA超螺旋变的松弛，DNA环向外展，同时由于暴露了阴电荷，在电场力的作用下，松动的DNA环向阳极迁移，但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA，其迁移距离受到限制，因此尾长并不总是真实反映链缺口的多少。实际应当依靠尾长与尾部的荧光强度同时来进行分析。 操作步骤： ...

双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。近年来经过多方面改进已成为研究蛋白质组的最有使用价值的核心方法。 分离蛋白质组所有蛋白的两个关键参数是其分辨率和可重复性。在目前情况下，双向凝胶电泳的一块胶板（16cm×20cm）可分出3～4千个，甚至1万个可检测的蛋白斑点，这与10 ...

先将混合物在一个直径1mm的玻管凝胶中进行等电聚焦凝胶。聚焦后将凝胶条小心的从毛细管中取出，然后放到另一平板凝胶的顶部（垂直板）或一端（水平板），再让胶条中已经分离的组分在平板胶中走SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。由于蛋白质的等电点和分子质量之间没有什么必然的联系，因此，经过双向电泳可将数千种蛋白质分开，显示出极高的分辨力。

治愈癌症是一个难题长期以来科学家们一直在苦苦探索.我们目前知道致癌的过程与许多因素有关，但如果我们能阻止其中的任何一个步骤，癌细胞便无法形成。因此探测致癌物质的技术与癌细胞的及时发现就显得尤其重要！然而截至目前为止，科学家们仍无法研究出一种简易基因测试法或综合的方法来检测出可能的致癌物。因此，致癌物对ＤＮＡ的作用仍是癌症研究的一个重要课题。 遗传毒物学为一专门研究化学及各类物质对人体遗传基因影响的 ...

Analysis Kits (Chips and Reagents) Experion Automated Electrophoresis — Sample Types What types of samples can the Experion separate and analyze? The Experion automated electrophoresis system s ...

TBE浓溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。 以往都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮存液）进行琼脂糖凝胶电泳。 但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。 碱性电泳缓冲液应现用现配。 Tris-甘氨酸缓冲液用于SDS-聚丙烯 ...

电泳切胶注意事项: 1、电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。 2、切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3、关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果你戴树脂眼镜就可以了。要是非常害怕紫外照射 ...

1. 缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。 2. 琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。 3. 凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶 ...

目的： 学习水平式琼脂糖凝胶电泳，检测质粒DNA的构型、分子量的大小。 原理： 琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物，可作为电泳支持物，适用于分离大小范围在0.2-50kb的DNA片段。DNA分子的迁移率与分子量的对数值成反比关系。观察其迁移距离，与标准DNA片段进行对照，就可获知该样品分子量大小。在质粒抽提过程中，由于各种因素的影响，使质粒DNA呈现超螺旋的共价闭合环状、开环状分子、线状分 ...

一、原理 DNA在碱性的溶液中带有负电荷，因此，在电场作用下朝正极移动。在琼脂糖凝胶中电泳时，由于琼脂糖凝胶具有一定孔径，长度不同的DNA分子由于所受凝胶的阻遏作用大小不一，迁移的速度不同，从而可以按照分子量大小得到有效分离。溴化乙锭可插入到DNA分子的双链中。在紫外光的照射下，插入溴化乙锭的DNA呈橙红色荧光，所以溴化乙锭可以作荧光指示剂指示DNA含量和位置。 二、材料、仪器设备及试剂 （一 ...

1．用不同方法诱导细胞调亡后，取106调亡细胞，置1.5ml离心管中，用PBS洗涤一次。在微量离心机上全速离心5秒钟，去上清液。加入100μl含5mol/L异硫氰酸胍，100mmol/L 2-巯基乙醇的25mmol/L枸橼酸钠缓冲液pH7.0，在旋涡混悬器上混悬20秒钟，破坏细胞，变性蛋白质。 2．加入50μl含7.5mol/L醋酸氨和0.8mg/ml糖原的水溶液，混匀；加入300& ...

制备电泳与普通的分析电泳在原理上没有什么不同，只是用的凝胶厚些、加的样品量大些罢了。因为制备电泳的胶厚，电泳时有个散热问题，电泳后还有把所要分离的蛋白从胶中洗脱下来的问题。为了提高制备电泳的效率，有些公司（如BIO-RAD）生产了专为制备电泳设计的电泳槽。我们的实验用非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳制备GFP，在整个的电泳过程中GFP始终维持其天然活性。电泳结束后，不用染色处理，在紫光照射下可以 ...

一、目的 1、了解聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 2、了解聚丙烯酰胺凝胶的制作过程 3、了解过氧化物酶同工酶电泳过程 二、实验原理 1、电泳原理及影响电泳的主要因素 带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动，这种现象称为电泳。用电泳技术分离、分析蛋白质、酶、核酸等生物大分子，有较高的分辨率，目前已成为生物科学研究中必不可少的手段之一。 带电离子在电场中的泳动速度（1）和迁移率（泳动度）（ ...

一、目的要求 1.学习电泳原理和技术　　2.学习和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质技术 二、原理 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂NN-甲叉双丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，简称Bis)在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(N，N，N，N—tetram ...

一、原理 细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。 二、试剂准备 1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29. ...