酵母双杂交技术

我上个月做了 mating （酵母双杂交的一种办法）。现在已经做到了，X-gal assay。从230多个克隆里 第一次选出了68个蓝色克隆。第二次 挑选出了74个蓝色克隆。可是，对比发现重复变蓝的只有 11个。What can I do for it NEXT~我的具体步骤是。一 ：文库建立1. mammalian cell total RNA -- Poly A RNA -- dsRNA -- 提纯 dsRNA。2. 将提纯的dsRNA 转染到AH109细胞株,涂在 150ㅠ待 3~5天克隆出现 并长势饱满.3. 每个150ㅠ， 放入5ml fre ...

我要做酵母双杂交，有战友在做吗，交流一下，我的QQ446357706，现在我先把我的资料给大家看看吧，我自己写的程序酵母培养：YPD: 蛋白胨20g ,酵母提取物10g ,琼脂20g葡萄糖20g或灭菌后加入葡萄糖（40% 50ml；过滤除菌/121℃,15min）,使终浓度为2%.YPDA: YPD+adenin hemisulfate(0.2% 15ml;对热不稳定，不能高温高压灭菌)，使终浓度为0.003%.SD /:（SD /完全，SD /-./././.）无氨基酸酵母 ...

（一）酵母双杂交系统的基本原理酵母双杂交系统的建立与发展是基于对真核生物转录调控起始过程的认识。真核生物中存在一种上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)，其作用是和激活蛋白结合并大大增加启动子的转录速度，从而在转录水平对靶基因表达进行调控。真核细胞转录起始需要反式转录激活因子的参与。很多真核生物的位点特异性转录激活因子是组件式的，通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异性结 ...

小弟弟一次做电转，完全按照毕氏酵母说明书来，居然没长出来。第二次，按老板出国前留下的做，效果甚好！现贡献出来，望对大家有所帮助！小弟刚做酵母表达，在DXY受益匪浅！看到不少关于酵母电转的PROTOCOL,但基本上是按INVITROGEN上的步骤来的。小弟第一次也是照本宣科，可是没出来，后来又按导师留给小弟的PROTOCOL做了一次，转化效果特好。先将其贡献给大家，希望对大家有所帮助：Yeast Transformati ...

1. 学习血红蛋白电泳分离方法； 2. 能辨认正常人和异常血红蛋白的电泳图谱； 血红蛋白是一种结合蛋白质，由血红素和珠蛋白组成。正常人所含珠蛋白的多肽链有a、b、d 、e、g和z六种。这六种肽链的基因在人体发育的不同阶段表达状况不一。正常成人红细胞中有三种血红蛋白即HbA、 HbA2 和 HbF。HbA（a2b2）是正常成人红细胞中的最主要的血红蛋白，占红细胞内血红蛋白总量的96 ...

双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。80 年代的工作表明，转录激活因子在结构上是组件式的（modula r），即这些因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成，其中有DNA 结合结构域（DNA binding domain，简称为DB）和转录激活结构域（activation domain，简称为AD），它们是转录激活因子发挥功能所 ...

1.Introduction and Background There is a great need for general methods to characterize the proteins that contemporary biology makes available.The list of such proteins needing further characterizatio ...

随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成，基因工程领域又迎来了一个新的时代---功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识。生物体系的运作与蛋白质之间的互作密不可分，例如：DNA合成、基因转录激活、蛋白质翻译、修饰和定位以及信息传导等重要的生物过程均涉及到蛋白质复合体的作用。能够发现和验证在生物体中相互作用的蛋白质与核酸、蛋白质与蛋白质是认识它们生物学功能的第一步。 ...

1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？ 在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。 ...