蛋白组学

Purification of Ncd Motor Domain ProteinMaterials Induced cells (2 - 5 g pellet of pET/Ncd in BL21(DE3)pLysS host cells)HEM buffer = 10 mM HEPES pH 7.21 mM DTT1 mM MgCL21 mM EGTAHEM + 80 mM NaCl HEM + ...

Purification of Ncd Motor Domain ProteinMaterials Induced cells (2 - 5 g pellet of pET/Ncd in BL21(DE3)pLysS host cells)HEM buffer = 10 mM HEPES pH 7.21 mM DTT1 mM MgCL21 mM EGTAHEM + 80 mM NaCl HEM + ...

Protein purification; actin Overview ACTINThe most abundant muscle and non-muscle cytoskeletal protein. MW 42 kDa 374/375 amino acids; various isoforms; structure resolved at 2.8 Angstrom. 208 ...

Purification of CD21) Cells are pelleted (~3 - 4000 g for 10 min.) and resuspended in pre-chilled 50 mM malonate (pH 5.2-5.3) with 1mM EDTA (~40ml of buffer per litre of culture).2) Lyse the cells wit ...

OverviewTROPOMYOSIN An ubiquitous actin binding protein arranged in alpha-helical coiled-coil of 410 Angstrom length. MaterialSource: rabbit skeletal muscle Equipment: • hydroxylapatite column ...

Purification of ICAM-1by Mazen Ferzly 06/22/2000 PurposeThe purification of ICAM-1 on R6.5 anti-ICAM-1 column.Materials Triethylamine NaCl Octyl Glucoside ( n-octyl-b-D-glucopyranoside Sigma Cat. No. ...

OverviewSKELETAL MUSCLE MYOSINA two-headed hexomeric actin-activated ATPase consisting of two heavy chains of ~200 kDa and four light chains of ~20kDa. The tail portion consists of an alpha-helical c ...

Overview TROPONINS The calcium-dependent regulatory protein complex located on the thin actin filaments of muscle comprises of TnC (17.8 kDa) TnI (20.8 kDa) and TnT (30.5 kDa). These proteins are i ...

Home-made Taq Polymerase PurificationI also have the bacteria containing the clone. It appears to produce lots of Taq and is quite stable.The proceedure takes 4 days start to (15 000 units of Taq) fin ...

. Overview This protocol provides considerations and generalized procedures for the use of dialysis to alter the composition of a protein solution. It is a useful step in adjusting a protein samp ...

Grow a 2 ml culture 24 hr. at 30oC in selective media When culture is ready use it to inoculate about 55 ml (50 ml plus 5 for O.D.600 readings) of selective media. Grow to mid-logarithmicphase (O.D.60 ...

蛋白浓缩方法基本有： 丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法…… 1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。 2，免疫沉淀法：得有特异性抗体！ 3，硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析） 选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济！ 4 ...

蛋白浓缩方法基本有： 丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法…… 1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。 2，免疫沉淀法：得有特异性抗体！ 3，硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析） 选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济！ 4 ...

个人经验仅供参考:1.用脱脂奶粉封闭的效果不一定比用BSA差不过我们试过几种奶粉有一些奶粉不太适合.推荐使用的奶粉:雀巢高钙奶粉多力精低脂奶粉.一般国产的奶粉的颗粒比较大不太容易溶解.2.关于三名治:本人以前做时花很多时间在防止短路上现在我做的时候根本没有剪齐最主要的是赶气泡这是关键的关键其实转膜的原理是电流的单向流动现在的好多公司的转膜装置的电极是一个平面所以不用担心短路的.(不信的可以试试!! ...

个人经验仅供参考:1.用脱脂奶粉封闭的效果不一定比用BSA差不过我们试过几种奶粉有一些奶粉不太适合.推荐使用的奶粉:雀巢高钙奶粉多力精低脂奶粉.一般国产的奶粉的颗粒比较大不太容易溶解.2.关于三名治:本人以前做时花很多时间在防止短路上现在我做的时候根本没有剪齐最主要的是赶气泡这是关键的关键其实转膜的原理是电流的单向流动现在的好多公司的转膜装置的电极是一个平面所以不用担心短路的.(不信的可以试试!! ...

大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。（一）水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升 ...

多肽合成概述：　1963年，R.B.Merrifield［1］创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖.　　今天，固相法得到了很大发展.除了Mer ...

1 分离方法 　　采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。 　　1.1 高效液相色谱（HPLC） 　　HPLC的出现为肽类 ...

纯化相关材料：琼脂糖凝胶介质及柱子选择指南： http://bbs.bioon.net/dispbbs.asp?BoardID=92&ID=56965gst融合蛋白纯化指南：http://bbs.bioon.net/dispbbs.asp?BoardID=92&ID=56974染料亲和纯化：http://bbs.bioon.net/dispbbs.asp?BoardID=92&ID=56972亲和 ...

胶体金标记蛋白A技术（Protein A-gold technique PAg法）　　 PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A的活性，又能保持高度的稳定性，PAg复合物分子最小易于穿透组织。PAg复合物的原液在4℃可保存达一年之 ...