2D电泳技术

I. 2D电泳操作手册BIORAD英文版BIORAD中文版Amersham英文版Amersham中文版Amersham的DIGE工作手册Dr. Gorg英文版双向电泳手册中文版（感谢国家生物医学分析中心于景华老师提供）Trouble shooting部分Dr.Gorg's trouble shootingAmersham Biosciences公司的关于“2D workshop troubleshooting”的Powerpoint材料 ...

由于大型串联质谱的飞速发展， 双向电泳目前已经逐渐让位给其他的各种非胶系统分析手段，但是双向电泳在很长一段时间内仍然会是我们在蛋白质组学领域中不可缺少的一种分析手段。 这个专题希望能够给大家在2D中遇到的一些问题提供一个快速索引，并且共同讨论您在2D中遇到的问题及解决方案！个人进入蛋白质组学领域也有6-7年的时间了， 对于双向电泳技术，从最开始的花篮式电泳到2D-IPG-PAGE， 再到现在的2D-DIGE技术都比较熟悉。 使用 ...

喷血推荐blue sliver胶体考染法！我做了2D的三块平行胶，一个一般考染，一个blue sliver，一个银染（如图从左到右），我想不用我多解释什么了吧？！！愿意喷血向大家汇报这种染色方法的初步尝试结果和经验！！一、先讲讲本版对这种染色方法的提出和进一步讨论过程：1、siashq大侠在“请教：2DE考染的困惑”http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1253068&sty=1&tpg=2& ...

版子上最近有好几位朋友提供了不错的双向电泳的凝胶分析软件手册等内容(感谢merlynhuang兄以及czlong2008兄)，我把他们归纳一下，欢迎各位补充使用感受:)I. 软件与使用手册下载1. BIORAD公司出品PDQuest V7.3.1 下载PDQuest V7.3.1英文使用手册PDQuest中文讲义（感谢merlynhuang兄提供）2. Amersham公司出品ImageMaster V5.0版下载ImageMaster V5. ...

大家好，我有2D分析软件PDquest8.0版 找了好多个网络硬盘，都没找到个免费的够大的空间让我上传，文件35M，下面是软件介绍，不知道大家能不能提供空间让我上传，好东西大家分享嘛！另外我还把2D实验手册上传到miss709@56.com密码123456，请大家去下吧。探索者系列之PDQuest“The Discovery Series”特点“The Discovery Series”系列软件具有如下共同的特点：PDQuest是B ...

2-D结果分析和解决方法一没有可以看到的清楚的点可能原因1 上样量不够2 由于样品的溶解性太差，使得进入IPG胶条的的样品量不足3 样品含有的杂质阻止聚焦的进行4 IPG胶条的方向放反5 IPG胶条在第二向（水平SDS电泳）中的面放反了6 检测的方法不够灵敏7 检测试剂失效解决的方法1 增加样品的上样量2 增加样品的溶解性3 增加样品的聚焦时间或改变样品的处理方法4 IPG胶条的尖锐端为酸性末端，应该朝阳极5 确保IPG胶条有凝胶的一面放置在第二相 ...

前几天在网上查些水稻蛋白质组学的资料，在日本的一家研究机构（http://gene64.dna.affrc.go.jp/RPD/data/LBY/LBY_extra.html http://gene64.dna.affrc.go.jp/RPD/data/RL01/RL01_list.html?）公布的数据中发现：同一种蛋白质亚基居然可以出现在同一块凝胶的几个位置，pI和Mw相差甚远，但它们的数据库登陆号又一样！跑双向只是让蛋白质变性， ...

博苑双向电泳、DIGE、质谱、色谱、Mascot培训讲座(第二轮通知)自从1977年，人类完成第一个物种-噬菌体的全基因组测序以来，目前已经顺利完成了成千上万个物种的全基因组测序。虽然基因组测序获得了巨大进展，但人类对基因组的深入解读才刚刚开始。蛋白质是基因功能的执行者，蛋白质组学是功能基因组学的重要组成部分、是解读基因组的必经之路。以双向电泳、色谱和质谱为代表的经典实验技术在蛋白质组学研究中扮演着重要角色。博苑 ...

2D proteomics has become a method of choice for comparing the complete protein profile of any two cells (be it from the same or different organisms). Isoelectric point (pI) and molecular weight are used to separate these biomolecules in two dimensions (hence the term “2D”), thereby aiding analysi ...

博苑蛋白双向电泳、DIGE、色谱、质谱、Mascot培训讲座（第三轮通知）自从1977年，人类完成第一个物种-噬菌体的全基因组测序以来，目前已经顺利完成了成千上万个物种的全基因组测序。虽然基因组测序获得了巨大进展，但人类对基因组的深入解读才刚刚开始。蛋白质是基因功能的执行者，蛋白质组学是功能基因组学的重要组成部分、是解读基因组的必经之路。以双向电泳、色谱和质谱为代表的经典实验技术在蛋白质组学研究中扮演着重要角色。 ...

2D Gel Electrophoresis ProtocolLysis Buffer7M Urea2M Thiourea4% CHAPSAdd fresh: 20mM Spermine20mM DTT1mM PMSFRehydration Buffer8M Urea 2% CHAPSAdd fresh:20mM DTT0.5% IPG Buffertrace amount of bromophenol blueEquilibration Buffer6M Urea 30% Glycerol 2% SDS 50mM Tris-HCl ...

一、样品提取：三氯醋酸—丙酮沉淀法（1） 在液氮中研磨叶片（2） 加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1 小时）弃上清。（3） 加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。（4） 上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。（5） 用Br ...

“蛋白质双向电泳技术应用高级研讨班”通知随着分子生物学的发展和蛋白质组学研究的开展和深入，蛋白质这个生命活动的主要承担载体的表达和功能研究已成为21世纪生命科学的重要研究课题。蛋白质是基因功能的实施的载体，对蛋白质结构、定位和蛋白质-蛋白质相互作用的研究将为阐明生命现象的本质提供直接的基础。要对蛋白质进行上述研究，首先需要将蛋白质从其复杂的体系中分离纯化出来。在众多蛋白质研究的技术中，双向电泳技术为科学家了 ...

原理和应用：Ettan DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上，结合了多重荧光分析的方法，在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品，并第一次引入了内标的概念，极大地提高了结果的准确性，可靠性和重复性。在DIGE技术中，每个蛋白点都有它自己的内标，并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准，保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间小于10%的蛋白表达差异， ...

“从基因到蛋白”实验技术学习班南方医科大学中医药学院实验室近期推出“从基因到蛋白”实验技术学习班，为您带来系统的基因及蛋白基本技术和一些前沿技术及其理论的学习和实践机会，为您搭建走向创新的桥梁。本学习班着眼于应用，突出理论与实践相结合，基础与前沿相结合。学习班将使每个参加人员得到学习和锻炼的机会，从而在研究工作中更加得心应手。参加本学习班的学员，可长期获得本学习班相关技术咨询服务。学习班的实验培训基地面积超过 ...

可能您刚刚接触蛋白质组，希望了解蛋白质组学的经典技术和研究方法；可能您正考虑购买双向电泳仪，希望更深入了解双向电泳技术；可能您刚刚购买了双向电泳仪，在使用过程中遇到了很多问题；可能您已经能熟练掌握双向电泳技术，但苦于从2D-PAGE斑点到质谱鉴定的困难重重。。。。。请不用担心气馁，这些过程在我们从事蛋白质组学多年的研究过程中，我们都一一经历。我们非常愿意将这些心得与同行们分享！！！为此，我中心（西安交通大学生命科学与 ...

蛋白质的双向电泳实验方法第一向（等电点聚焦，IEF）1）凝胶条的准备1．以帽凝胶端（2个校准环：4mm和10mm）朝下，将4根玻璃管插入两个凝胶灌注装置的每个托架中，这样玻璃管恰好站在两个分隔室之一的“充填船”上。从玻璃管顶端到玻璃管底端拉入PP线（小心，线不易移动），否则以后将不能用它们将胶溶液拉上来。2．溶解分离胶溶液和过硫酸铵溶液。必须监控凝胶溶液的温度，因为高温下（大于25℃）聚合作用太快。3．分离胶溶液除气4分钟 ...

1、 水化上样缓冲液（ I ） :尿素 8M 4.805gCHAPS 4% 0.4gDTT 65mM 0.098g （现加）Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50 m l （ 40% ）（现加）溴酚蓝 0.001% 10 m l （ 1% 溴酚蓝）MilliQ 水 定容至 10ml分装成 10 小管，每小管 1ml ， -20 ℃冰箱保存。2、水化上样缓冲液（ II ）:尿素 7M 4.2g硫脲 2M 1.52gCHAPS 4% 0.4gDTT 65mM 0.098g （现加）Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50 m l （ 40% ）（现加）溴酚蓝 0.001% 10 m l （ 1% 溴酚蓝）MilliQ 水 定容至 10ml分装成 10 小管，每小管 1ml ， -20 ℃冰箱保存。3、水化上 ...

PFGE技术简介：1984年Schwartz和Cantor发明了交变PFGE技术，解决了大片段DNA （＞40 kb）差异的问题，同时提高了DNA的分辨力。此后,随着PFGE技术的不断改进,现已具有分辨出高达10Mb级DNA的能力。这一独具的高分辨力使PFGE的应用范围已涉及到几乎所有生物基因组结构的研究。工作原理：大小不同的DNA 分子在交替变换方向的电场中做出反应所需的时间不同，一般较小的分子重新定向较快，在凝胶中移 ...

1. 用 PDQuest软件或肉眼比对，找出感兴趣的蛋白点，并做好标记和记录。 2. 用 MilliQ水冲洗胶 2 次。 3. 用色谱纯甲醇和 MilliQ水冲洗 Ep 管 4. 将枪头(200μl)下端剪去，使其内径略小于蛋白斑点的直径，用色谱纯甲醇和MilliQ水冲洗枪头。 5. 对准斑点中央小心将蛋白切割下来，放入Ep 管，MilliQ水漂洗 2 次，如胶块 太大，将其切成 1 x ...