western-blot

一、注意事项： 1. 清洗厚薄两块玻片：初次使用需要用酒精棉球擦拭干净。经常使用用自来水冲洗干净后，再用单蒸水冲洗，晾干。也可用酒精擦拭。 2. 取合适大小，容器将各液体依次加入，在加AP和TEMED前将玻璃片放入casting frame 做成glass plate sandwich，放在水平桌面上锁定后，固定在casting stand上，注意垂直放置，压紧底面的胶条 ...

1. 安装：（1）先找到图一所示的图标，双击安装。 图一 （2）系统重启后桌面出现图二所示的图标 图二 2. 激活：在文件夹找到图三 图三 （1）双击后出现图四所示的对话框 图四 （2）点击Apply patch后，打开桌面Quantity One图标，激活完成。 3. 应用： （1）首先，随便打开一个Western blot结果图片（注意：图片格式为T ...

1. 一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使band压出来也会很浅，结果也不可信。 2. 加一抗后最好4℃过夜，保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。4℃也可使一抗重复使用多次。毕竟磷酸化的抗体都挺贵的。二抗则室温1小时即可。 3. 磷酸化抗体的好坏是一个关键因素，所以要选择好的 ...

Western blot之歌 Western blot之歌 本视频来自 ...

主要包括以下 4 个基本步骤：样品制备；电泳分离；蛋白的膜转移；免疫杂交与显色――蛋白检测。 溶液和试剂 1. 1X 磷酸盐缓冲液(PBS) 2. ModifiedRIPAbuffer：Tris-HCl:50 mM pH 7.4 ; NP-40: 1% ;Na-deoxycholate: 0.25% ;NaCl: 150 mM ;EDTA:1 mM ;PMSF: 1 mM;Aprotininle ...

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记 ...

蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southern blot，后来出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为Northern和Western，与这两个技术的发明人没有关系了。

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Western杂交时，为确认蛋白是否转至PVDF膜上，可用下列方法对膜上蛋白进行可逆性染色。 1. 氨基黑染色 染液：0.5% Amido Black (w/v) 25% isopropanol (v/v) and 10% acetic acid. 染色：将PVDF膜置于染液中染色数钟，ddH2O 脱色。 2. 考马氏亮蓝染色 染液：0.1% Coomassie Brilliant ...

试剂耗材：SDS、甘油、Tris、溴酚蓝、丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED，APS、甘氨酸、甲醇、PVDF膜、Brandford蛋白定量试剂盒、BSA、脱脂奶粉、考麻斯亮蓝、丽春红、氯化钠、氯化钾、DTT、ECL、显影液、定影液等、显影胶片。 仪器设备：超声仪、核酸蛋白定量仪、Western-blot电泳转膜系统、摇床、曝光合、红灯等。 样本准备：收集106细胞，加入150μl SDS裂 ...

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，在同一个抗体公司，可能会有好几种，甚至好几十种；在不同的抗体公司，那就更多了。那怎样在琳琅满目的抗体中，选择自己实验需要的抗体呢？主要考虑如下几种因素：分析自己实验应用的实验方法是哪种？分析自己实验中标本的种属是哪种动物或人的？分析样本中的蛋白质的结构性质，分析抗体的标记和检测，分析抗体的宿主来源种属等等。 1.分析自己实验应用的实验方法是哪种？ 一般 ...

来源自：http://protein.dxy.cn/bbs/topic/17898080 在早期，鄙人亦依据分子克隆的介绍，采用立春红染膜。只是后来发现此操作不仅增加额外的操作时间，而且不能说明任何问题，于是抛弃之。首先，立春红（也包括考染胶）的灵敏 度和HRP-ECL体系的灵敏度相差太远，即使立春红染膜无颜色，也无法提示WB结果会不会失败（考染胶无颜色也不能说明转膜充分了，除非你银染），你仍然 ...

1. 硝酸纤维素膜 硝酸纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质，对蛋白有很强的结合能力，而且适用于各种显色方法，包括同位素，化学发光（Luminol类）、常规显色、染色和荧光显色；背景低，信噪比高。NC膜的使用也很简便，比如不需要甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了；比如NC膜很容易封闭，也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可 ...

在电流的作用下，使蛋白质从胶转移至固相载体（膜）上。 膜的选择：印迹中常用的固相材料有NC膜、DBM、DDT、尼龙膜、PVDF等。我们选用PVDF（聚偏二氟乙烯），其具有更好的蛋白吸附、物理强度，以及具有更好的化学兼容性。 有两种规格：Immobilon-P（0.45um）和Immobilon-PSQ(0.2um for MW<20kDa)。 A 半干法 即将凝胶夹层组合放在吸有转印缓冲液 ...

印迹技术 1975，Edwen Southern提出分子印迹概念。 概念：将存在于凝胶中的生物大分子转移（印迹）于固定化介质上并加以检测分析的技术。目前主要应用于DNARNA，蛋白质的检测。 蛋白质免疫印迹法 Western blotting: 免疫印迹法是检测蛋白质混合溶液中某种特定目的蛋白质的定性方法，也可以作为确定同一蛋白质在不同细胞或者同一种细胞不同条件下的相对含量的半定量方法。由于其检 ...

要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是 Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化 ...

以PVDF膜为固相载体的半干转印法

Bcl-2原癌基因的检测 Bcl-2原癌基因被认为是哺乳动物细胞凋亡过程中的负调控剂。本法采用鼠抗Bcl-2单克隆抗体，可通过免疫组化或免疫细胞化学的方法用于检测组织或细胞中的Bcl-2，或者通过Western blots检测细胞粗提物。【样本来源】（1） 离心细胞；（2） 细胞涂片、冰冻或石蜡包埋组织切片；（3） 细胞粗提物。【材料与试剂】（1） 鼠抗 ...

从2005年第一次见到抗体到现在，我已经做western blot实验整整五年了。五年里，太多的磨难，太多的惊喜，太多的感触，太多的代价。现在我做博士后，我指导的学生也能一次就上手，虽然他们也会出错，但我很少责备他们，因为我知道自己的路途也并不顺利，如果过度的责难他们，会让他们失去信心，而且更严重的是会导致他们遮遮掩掩，我从来不怕实验做不出来结果，就怕查不出失败的原因。

WB是生物实验室的一项通用技术。也许您是一位初学者，也许您是一位WB技术达人。不妨都来听听丹丹博士经过上千次实验总结的WB优化方案。小窍门，大玄机，助您完胜蛋白质免疫印迹全过程！