SDS-PAGE

师兄发现，最近做 WB 的小伙伴真的不少，为了解决一些小伙伴在WB上遇到困难，师兄专门跑去坛子里，把一些有关 WB 的好贴扒拉出来，供你们不时之需，同时也要感谢下我们无私的战友 lee800265。那么今天我们就从SDS-GAGE失败案例开始吧。想了解更多实验方法和技巧的同学，可以向我申请微信好友哦，我的微信号：shixiongcoming 。向我申请的时候一定要记得备注你的目的，要不然我可会拒绝你哦。SDS-PAGE “hall of shame ...

接上一期 SDS-PAGE失败实例及分析第四期—— 条带仅在凝胶顶部，本期就来讲讲由于条带仅在凝胶顶部，而在产生的问题扭曲的条带有这个问题的凝胶在整个“失误大全”中到处可见。这是由于分离胶的表面不平所造成的，因此当样品浓缩之后所有的条带都变扭曲的形状。扭曲的条带也可以见于电场的不均一，但是这种条带的扭曲应该是对称的。加样孔不成形当样品溢出至邻近加样孔，你就会观察到横贯几个孔的连续的蛋白条带（箭头所示）。事实上，这种情况通 ...

接上一期 SDS-PAGE失败实例及分析 前端指示剂缺失，本期就来讲讲由于条带仅在凝胶顶部，而在产生的问题过早终止电泳——例1很明显这块胶的指示剂前端位于什么位置。仍有继续电泳的空间可以把条带分得更开以增加分辨率。相对迁移率是为了分析凝胶相同位置上相同大小的蛋白。随着蛋白迁移距离的增加分辨率逐渐增高直到弥散限制了分辨率的继续提高。过早终止电泳——例2这两块胶一个是7%的一个是14%的，看起来都还不错。有些人做实验室很不 ...

接上一期 SDS-PAGE失败实例及分析 之 条带过浅，本期就来讲讲由于前端指示剂缺失，而在产生的问题部分前端指示剂——例1为了装置凝胶花了不少功夫，如果停止电泳太晚就太可惜了。因为如果部分前端的指示剂已经跑出凝胶的话就不能确定各个条带相对应的迁移率了。这块胶有一个内部的刻度——也就是跑胶时带上了分子量标准（Marker）。由于条带较平直，任意条带都可以作为参考来确定跑胶的迁移率。前端指示剂缺失——例2这块胶跑胶时间过长以至 ...

接上一期：一、症状——条纹拖尾条纹拖尾——例1这块胶就非常难看了。原因在于分离胶倒完之后没有用水或者异丙醇压胶，导致分离叫上缘非常粗燥，就像你看到的一样。当样品堆积在凹凸不平的分界线时，位于凹陷部位的蛋白由于不能适当的浓缩就析出来了。然后再跑胶过程中逐渐溶解造成了条纹拖尾症状。二、症状——条带过浅条带过浅——例1这个问题可能是由于加样孔成形不佳和/或凝胶加样不认真所致。背景较深而且不均一说明蛋白可能存在于电泳缓冲液中 ...

SDS-PAGE “hall of shame”如果你能够非常熟练的制备一块完美的凝胶，甚至对它进行改进都十分困难，那么你真的应该值得庆幸！但是如果你不能达到这个水平也不要灰心。所有的优秀的科学家都是从失败中成长起来的，事实上，如果不出错我们就很难学到更多的东西！（我的western blot技术也是从上百次的失败中成熟起来的，这中间我就学到了很多，相对于PCR，我第一次就成功的做出了RT-PCR和重叠延伸PCR，但是对于PC ...

SDS-PAGE_的准备流程超详细：SDS-PAGE_的准备流程视频本视频来自youtube

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最经常使用的一种方法。它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS）以及巯基乙醇一起加热，使蛋白变性，多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原，肽链被打开。打开的肽链靠疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同的大小的肽链由于在迁移时受到的阻力不同，在迁移过程中逐渐分开，其相对迁移率与 ...

蛋白质在十二烷基硫酸钠（SDS）和巯基乙醇的作用下，分子中的二硫键还原，氢键等打开，形成按1.4gSDS/1g蛋白质比例的SDS-蛋白质多肽复合物，该复合物带负电，故可在聚丙烯酰胺凝胶电泳中向正极迁移，且主要由于凝胶的分子筛作用，迁移速率与蛋白质的分子量大小有关，因此可以浓缩和分离蛋白质多肽。 聚丙烯酰凝胶电泳分离蛋白质多数采用一种不连续的缓冲系统，主要分为较低浓度的成层胶和较高浓度的分离胶， ...

（一）原 理 由于聚丙烯酰胺凝胶的浓度可以按要求配制，因此可以形成“连续系统”和“不连续系统”两种电泳系统。“不连续系统”最大的特点在于大大提高了样品分离的分辨率。这种电泳的主要特点是：（1）使用两种不同浓度的凝胶系统；（2）配制两种凝胶的缓冲溶液成分及pH不同，并且与电泳槽中电泳缓冲液的成分、pH也不相同。在实验中，电泳凝 ...

一、各种蛋白染色方法的灵敏度比较 染色方法 灵敏度 与质谱的兼容性 Silver 1- 10ng - Silver (MS compatible) 10ng + Comassie G -250 or R-250 ...

1. 总的策略 ① 化学试剂纯度要高，至少是分析级，目前国产试剂达不到纯度要求 ② 使用去离子水(电导<2uS) ③ 尿素和丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺需新鲜配制 ④ Deionize urea pri ...

蛋白质凝胶电泳的操作方法【材料与试剂】（1）2×SDS凝胶加样缓冲液（2）聚丙烯酰胺凝胶电泳槽和电泳仪（3）加样器和吸头等（4）水浴锅【操作方法】（1） 把上述处理的样品按1:1（V/V）与2×SDS凝胶加样缓冲液混合，100℃加热3分钟，使蛋白质变性；（2） 取出变性蛋白质，立即放于冰上。样品如粘稠可进行超声对DNA进行剪切，以最大功率处理0.5～2分钟应能有效地将裂解液粘稠 ...

SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行，而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集，最常用的就是SDS－PAGE电泳技术，关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论：Q：SDS－PAGE电泳的基本原理？A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）， SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多 ...

问 题 可能原因 建议解决方法 推荐电压条件下电泳时间过 ...

双向电泳IEF (sigma) IEF（not IPG）/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做“热”的所谓蛋白质组的. IEF用Biorad的圆盘电泳槽（不行用国产的吧，不推荐），SDS-PAGE用六一厂的就可以了(推荐六一的，买进口电泳槽的钱留出来测搞出的差异蛋白质的序列吧） BIO－RAD 的圆盘电泳槽，国产的不推荐，因为上槽Bi ...

【实验目的】 1.掌握聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦的基本原理 2.学习用等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的操作和方法 【实验原理】 等电聚焦法是一种特殊的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。它的特点是在凝胶柱中加入两性电解质载体-Ampholine，从而使凝胶柱上产生pH梯度。当向两性载体凝胶施加电场时，即可形成pH梯度，pH梯度的顺序是从阳极到阴极pH值逐渐增大。 蛋白质为两性电解质，其所带电荷的性质和数量随 ...

【实验目的】 1.掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理。 2.学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术，用于分离蛋白质。 【实验原理】 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺作为支持物的一种电泳形式。单体-丙烯酰胺和交联剂-甲叉双丙烯酰胺相互作用可形成聚丙烯酰胺，该聚合反应以TEMED作为催化剂，以APS 作为引发剂。 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的比例可决定凝胶网孔的大小，交联剂所占比重越大，凝胶的网 ...

【实验目的】 1.掌握SDS—聚丙烯酰胺电泳法的原理。 2.学会用此种方法测定蛋白质的分子量。 【实验原理】 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法主要依据蛋白质的分子量对其进行分离。SDS与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。SDS&mda ...