蛋白分离纯化

J.MoviusKCoachmanand S.Hahn (Hahn Lab) last modified 10/9/00 Induction of BRF in bacteria and purification on Ni-NTA agarose Transform BRF plasmid into strain BL21 DE3 (pLysS)or JM25 (DE3 containing t ...

George P.Smith Division of Biological Sciences Tucker Hall (573)882-3344 Introduction to B-PER B-PER from Pierce Chemical Co.is a Tris-buffered detergent formulation that lyses bacterial cells without ...

摘　要:　综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法 主要包括高效液相色谱法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。 ...

本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术，综和近年来国内外的一些研究结果，结合实际应用的例子，分析了各种分离纯化方法的优点，同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。

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当需要较高的收率时，尤其当研究的样品对象在微克范围时，建议应考虑以下几点： 1.根据样品处理量，选择最小可用的超滤容器，在小容器中反复添加样品，反复超滤。 2.在适量范围内，选截留分子量最低的超滤膜。 3.如可能，使用水平转头代替角转头离心，这样可减少在离心过程中溶液与离心管接触的表面积。 4.将压力或离心力降低到大约最大推荐数值的一半。 5.避免过度浓缩，最终体积越小，越难得到完全回收，如可能， ...

超滤透过通量的影响因素如下： 1.料液流速 提高料液流速虽然对减轻浓差极化、提高透过通量有利，但需要提高料液压力，增加耗能。一般紊流体系中流速控制在1-3m/s。 2.操作压力 超滤膜透过通量与操作压力的关系取决于膜和凝胶层的性质。超滤过程为凝胶化模型，膜透过通量与压力无关，这时的通量成为临界透过通量。实际操作压力应在极限通量附近进行，此时的操作压力约为0.5-0.6Mpa。 超滤过程中只有当 ...

超滤技术的关键是膜。膜有各种不同的类型和规格，可根据工作的需要来选用。早期的膜是各向同性的均匀膜，即现在常用的微孔薄膜，其孔径通常是0.05 μm ～1.0μm。近几年来生产了一些各向异性的不对称超滤膜，其中一种各向异性扩散膜是由一层非常薄的、具有一定孔径的多孔“皮肤层”（厚约0.1m和0.025 mm），和一层相对厚得多的（约1m）更易通渗的、作为支撑用的&l ...

1. 配料； 2. 检查出口阀门是否关闭，搅拌料浆； 3. 启动泵，打开出口阀，开始超滤； 4. 改变压力，观察不同压力对超滤的影响； 5. 配制不同浓度的悬浮液进行超滤，观察悬浮液浓度对超滤的影响； 6. 关闭泵，结束实验。 ...

超滤装置是在一个密闭的容器中进行，以压缩空气为动力，推动容器内的活塞前进，使样液形成内压，容器底部设有坚固的膜板。小于膜板孔径直径的小分子，受压力的作用被挤出膜板外，大分子被截留在膜板之上。超滤开始时，由于溶质分子均匀地分布在溶液中，超滤的速度比较快。但是，随着小分子的不断排出，大分子被截留堆积在膜表面，浓度越来越高，自下而上形成浓度梯度，这日才超滤速度就会逐渐减慢，这种现象称为浓度极化现象。为了 ...

超滤原理 超滤（Ultrafiltration）技术是一种膜滤法，也有错流过滤（Cross Filtration）之称。它能从周围含有微粒的介质中分离出10～100A的微粒，这个尺寸范围内的微粒，通常是指液体内的溶质。其基本原理是在常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜介质，依靠膜两侧的压力差作为推动力，以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，大分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚 ...

1) grow 20ml cells O/N 37 C dilute 50X into prewarmed LB grow to 0.6 OD or about 1hr. Induce w/ 2mM IPTG (238mg/0.5l) grow 3hr spin 6k GS3 10' freeze at -70 ℃. 2) resuspend cells (from 500ml) in flipt ...

Bases Buffer is Buffer C (as per Schroter)(as per SRF)pg.27 20mM Hepes pH 7.9 0.1% NP40 0.2mM EDTA 20% glycerol Lysis Buffer: 0.75M KCl Need buffers containing 00.1M0.6M & 1.0M KCL in addition to ...

1.Add 222.2μl 1M MOPSpH 7.5 to 2ml of 10mg of CREBtide (0.1M MOPS pH 7.5 final concentration). 2.Read OD205OD280 (using 0.1M MOPS buffer as blank) 3.Affigel-10 is stored frozen at < -70℃.Thaw at ...

1)grow 20ml cells O/N37℃ dilute 50X into prewarmed LBgrow to 0.6 OD or about 1hr.Induce w/ 2mM IPTG (238mg/0.5l)grow 3hrspin 6k GS3 10'freeze at 70℃ 2)extract cells (from 500ml)in 25 mls.Heintz Buffer ...

1.Prepare 1 ml of packed beads by washing them 4 times in 10 ml of d-H2O in a 15 ml tube.The beads are Act.Ultrogel 22 AcA from IBFand stored in the coldroom.The protein binding site is via glutaralde ...

1.Start a 5 ml overnight culture from a frozen stock (in the -70℃)in the following media: For 100 ml of M9CA media tyrp 10 ml of 10X M9 salts 5 ml of 10% casamino acids 0.2 ml 1M MgSO4 0.01 ml 1M CaC ...

Low (“Low”)Imidazole Buffer 0.5L 100mM Imidizole 3.4g 5% glycerol 25ml 100% glycerol 50mM Tris-HCl (pH 7.9)50ml 0.5M Tris-HCl (pH 7.9) 0.1% Tween-20 0.5M 100% Tween-20 500mM NaCl50ml 5M Na ...

Inoculate 2ml of 5ml o/n culture of either p3133 (empty vector pET11a)or p3134 (dnEBNA-1/Soft)in E.coli BL21 LysS per 0.5L LB ampicillin (grow two 0.5L cultures of each) Incubate ~2hrs 37℃250rpm until ...

Making GST fusion proteins:(07/19/03)ver.1 Grow up 5ml LB with Amp o/n. Add to 45ml LB with Amp 37o shake 2.5- 3 hrstill OD600 0.4-0.8 Put bottles in room temperature water for 10 min to cool do ...