蛋白分离纯化

采用亲和加分子筛两种层析方法就能得到大量高纯度的蛋白样品往往是别人家的实验。到自己手上总会有各种惊喜…今天的主角更加过分，在真正纯化之前就需要我们施展十八般武艺把它从细胞上「拽」下来。没错，它就是膜蛋白…人类基因组中，有大约 30% 的基因编码膜蛋白。当今已批准上市的药物中，有超过 50% 以膜蛋白为靶点，然而目前蛋白质结构数据库 (Protein Data Bank, PDB) 中膜蛋白比例不足 1%。欲了解其功能，必解析其结构。是很多结构生物学家心头的 ...

用蛋白或多肽标签融合于重组蛋白中，进而方便重组蛋白的纯化和检验。小分子标签通常免疫原性较低，且不影响目标蛋白功能而得以保留。但是大分子标签如 GST 因其对目标蛋白的结构和生物活性有所影响，通常需要去除。今天我们就来聊一聊柱上酶切那点事儿~什么是柱上酶切柱上酶切纯化路线是指在吸附了标签蛋白的层析柱上添加蛋白酶进行在位去除标签，具有更加灵活、高效、快速的特点。相比于常规的洗脱后的酶切纯化路线，柱上酶切不仅可以简化酶切后 ...

叫糖的不一定都是甜的，还有可能糟心。别担心，这篇多糖纯化技巧教你的纯化实验也可以带点甜。多糖广泛分布于自然界的多种生物体内，尤其是动物细胞膜，植物细胞壁以及微生物细胞壁中，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，是构成生命体的重要分子基础。根据来源可以被分为动物多糖，植物多糖和微生物多糖三种类型。动物多糖动物多糖常见的有甲壳素、肝素、硫酸软骨素、透明质酸等，也是医学和美容保健界的万金油，在临床研究 ...

天然蛋白的特性可以说是迥然有异，每种蛋白都是不一样的烟火，共同特点就是丰度很低，自带丰富的背景杂质，并且没有特异性的纯化方法可寻。然万物皆有共性，我们只需找到他们的共同点就可以求同存异，一切难题也就可以迎刃而解。凡是蛋白质都是氨基酸组成的，氨基酸既是两性电离物质又有多种多样的 R 取代基，那么丰富的氨基酸组成就让不同蛋白质或多或少拥有带电性与疏水性。以上给我们的纯化提供了基础方案：以离子交换层析和疏水层析为核心步骤来 ...

老话说的好，巧妇难为无米之炊，要做好标签蛋白质的纯化实验，首先得选择合适的填料和预装柱，以达到事半功倍的效果。我们今天就来看看 Cytiva 标签蛋白填料的大家族，一起 pick 最适合您蛋白质研究的填料吧！蛋白标签（Protein Tag）所谓蛋白标签（Protein Tag）是指利用 DNA 体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪、和纯化等。常用的标签有His、GST、Strep、MBP、Flag ...

你是否苦于你纯化的标签蛋白无法达到理想纯度而日夜发愁？是否在换了新的标签后仍不太满意而承受老板们鬼畜般的霹雳大吼？朋友别哭，相信这篇文章可以为你带来纯化高纯度蛋白的新思路。进行蛋白质功能研究的关键在于得到高纯度蛋白。习惯于构建单标签的你想必遇到过杂质太多，蛋白表达量少甚至不稳定的情况。何不根据目的蛋白性质构建双标签蛋白进行两种不同亲和层析柱的纯化？没准会有意想不到的效果。01双标签蛋白助力于目的蛋白的高特 ...

还不知道层析策略的小伙伴们，今天就与小编一起来探寻层析策略的内涵吧！所谓层析策略（简称为 CIPP，是 Capture, Intermediate purification, Polishing 的缩写）就是利用组合层析技术纯化蛋白，帮助您获得合适纯度和产率的纯化路线。层析策略的制定可分为三步：1确定蛋白纯化目标，即纯度要求；2确定稳定的纯化后分析方法；3合理组合层析技术，用最少的步骤实现预期的纯度和收率的平衡。一、抗体纯化圆圈内的步骤 ...

现状基于腺相关病毒（AAV）的各种血清型载体被公认在人类基因治疗和基因疫苗接种应用中具有高潜力。在制造AAV载体期间，不必要的，不完全的颗粒共同产生。它们缺乏重组病毒基因组，仅由空衣壳蛋白组成。空衣壳增加了用于医学应用的AAV病毒的所需剂量，并且被认为引起针对载体衣壳的免疫反应，导致不必要的副作用。因此，在制造过程中去除空衣壳以及量化制剂中空AAV颗粒含量的能力是任何AAV生产过程的关键要求。 ❀制备AAV载体的 ...

基因治疗是目前生物医药领域热门的话题之一，生物医药行业对基因治疗持续高涨的热情，令该领域许多公司开始将一次治愈性基因疗法，作为其开发的战略核心。 有行业报告显示，未来预计 6 年内，将有多达 60 种基因疗法获得批准，这些基因疗法在 2024 年的销售额将达到 146 亿美元。 基因治疗的核心是基因载体，病毒载体占据着绝对主导地位。目前腺相关病毒（AAV）和慢病毒（LV）是临床上广泛使用的病毒载体。 从 2012 年荷兰 UniQure 公司的，世界上A AV 基因治疗药物 Glyb ...

分子筛（SEC）无疑是众多层析方法中最娇贵的存在。要想获得满意的实验结果，一个高分辨高性能的柱子是必不可少的。刚接触层析的小伙伴们，接过这娇贵的柱子，是否不觉有种心跳加速，无从下手的感觉？这么娇贵的柱子，要怎么维护？不用担心，让我们一起了解学习一下吧~首次使用建议：在连接层析柱前，请务必务必务必确认流路中没有空气！一般柱子都是保存在20%乙醇溶液中，以避免微生物的繁殖，但是20%乙醇的粘度高于水溶液，因此，需要降低流速 ...

今天为大家带来镍柱的保养和清洗建议。Ni柱的使用与保养1. 对于一般的预装柱（Crude系列除外），上样前，样品需要使用0.22μm/0.45μm滤膜进行过滤或者离心处理，以避免样品中有细胞碎片等固体物质，堵塞柱子。2. 如果细胞裂解后非常粘稠，需考虑是否因为DNA、RNA这类核酸物质过多，需要加入核酸酶去除，以降低样品粘稠度，提高上样速度及洗脱效果。3. 柱子使用过程中，不能超过填料的压力，以免填料被压塌。4. 每次使用后，可使用5-1 ...

His 标签蛋白纯化效果不理想，宝宝心里苦呀。今天，小编来跟大家一起找找原因。纯化所得组分中没有收集到重组的His标签蛋白。该问题主要可以分为以下两个方面：1、His标签蛋白没有结合到填料上就流穿了原因一超声的功率不对。超声功率过高，容易导致蛋白炭化；功率过低，蛋白释放不出来。建议改变超声功率，同时可以在超声前加入溶菌酶。原因二结合缓冲液条件不合适。建议检查结合缓冲液中是否有影响结合的因素，如：金属离子螯合剂、强还原剂 ...

一、用 IPTG 诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因所需特殊试剂：1M IPTG1. 将目的基因与 IPTG 诱导表达载体连接，构成重组质粒并转化相应的表达用的大肠杆菌。将转化体铺于含相应抗生素的 LB 平板，37℃ 培养过夜。通过酶切序列分析等筛选带有插入片段的转化体。2. 分别挑取对照菌和重组菌 1 个菌落，接种于 1 ml 含有相应抗生素的 LB 培养液中，37℃ 通气培养过夜。3. 取 100 微升过夜培养物接种于 5 ml 含有相应抗生素的 LB 培养液中（各 10 份），适当的温度（20－37℃）震荡培养 4 小时，至对数 ...

重组蛋白纯化基本原则蛋白的分离纯化是生物工程下游阶段一个比较重要的部分，尤其在基因工程重组蛋白的分离纯化中，上游过程的许多因素会直接影响到下游蛋白的分离，充分利用上游对下游的影响，对蛋白的纯化做一个全面的考虑和整体的设计。是否带有亲和标签，His标签，GST标签等，不同的亲和标签选择不同的纯化方案；可能是可溶性表达，可能形成包涵体，可溶性的蛋白往往需要复杂的纯化步骤，而包涵体易于分离，纯度较高，但回收具有生物活 ...

IBA 第三代 Strep-tag® 高效蛋白纯化系统，由 Twin-Strep-tag®搭配全新研发出的 Strep-Tactin®XT 组合而成。

人体骨骼是人体运动系统的要素，起着支撑身体及保护身体的重大作用，是人体组成不可或缺的部分。骨骼化是生物结构复杂化的基础，骨骼系统又是生物形态进化的限制因素。近日，吉林省公安厅物质鉴定中心采购了上海净信研磨机，用于研磨人体骨骼，进行一系列的研究。图一吉林省公安厅物质鉴定中心图二 人体骨骼样本人体骨骼提取是人体运动分析过程中捕获人体动作的关键步骤,对分析人体的运动姿态,获取人体运动参数有重要意义。吉林省公安厅物质鉴定 ...

Toxic, hot, and spicy: Nanodiscs improve membrane protein resolution in cryo-EM毒、热、辣：Nanodisc配合冷冻电镜提升膜蛋白的分辨率(作者：Cube Biotech) Nanodisc结合冷冻电镜应用时，Nanodisc提升了通过冷冻电镜对膜蛋白的解析率，同时揭示了功能性磷脂所扮演的重要角色。The last few years have seen a tremendous increase in high-res ...

膜蛋白的重要性不言而喻，假如细胞膜是守护细胞的城墙，而膜蛋白就是站在城墙上的各司其职的士兵，肩负着把守城门、传递信号、运输物质等重要职责。膜蛋白 一旦“失守”，就会造成细胞功能紊乱，进而引起组织和器官发生病变，使身体遭受病痛侵扰。这也就是为什么膜蛋白成为大多数重要的药物研究对象和靶点。在人体蛋白中，有大约30%是膜蛋白，ＦＤＡ批准的新药中，绝大多数都以膜蛋白为靶点，几乎所有的膜蛋白都是研究热点。然而让人吃惊的是，乐观估计 ...

6xHis 标签，也称为多组氨酸标签， His6 标签或 hexa 组氨酸标签, 是一种在转染的细胞中目标蛋白的 C 端或 N 端上由至少 6 个组氨酸残基链接上所组成的氨基酸序列。这种标签通常在重组蛋白的纯化中使用，这是因为组氨酸残基的序列可以在特定的缓冲液条件下结合到几种类型固定的离子上（比如镍，钴和铜）从而达到容易检测和纯化 His 标签蛋白的目的。由于它的相对小的分子量，低的免疫原性，亲水性和在去污剂和其他添加剂存在的情况下的易变性, 因此在天然和变性的条件下 ...

蛋白样品制备中，在细胞破碎之后，既可以利用特定蛋白质的特性来分离某一类蛋白质，比如亲和纯化，比如前面介绍的磷酸化蛋白富集，或者膜蛋白富集；另外一个考虑方向是去除杂质----去掉样品中某些非目标高丰度蛋白或者杂质的干扰，同样可以达到简化样本的目的。当然要小心「倒洗脚水的时候别把婴儿也倒掉了」，一定要选择可靠的产品。比如，潜在疾病标志物的最好样本来源就是血清或其他体液，此类样本可以提供人蛋白质组中绝大部分组份。然而用蛋 ...