蛋白质含量测定

一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2 CH2 COOH+3H2 SO4 ――2CO2 +3SO2 +4H2O+NH3 (1) 2NH3 +H2 SO4 ――(NH4 )2 SO4 (2) ...

(一)实验原理 双缩脲法(Biuret法)和Folin�酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法)是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料在酸性溶液 ...

Glutathione- a microassay for determining glutathione content in cells 检测细胞谷胱苷肽含量 Laboratory of P.J.HansenDept.of Animal SciencesUniversity of Florida http://www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/gsh.ht ...

Bradford Protein Assay- a microassay for determining protein content in a 96-well microtiter plate format Laboratory of P.J.HansenDept.of Animal SciencesUniversity of Florida http://www.animal.ufl.edu ...

Bradford quantification of protein concentration Brandford法测定蛋白浓度 http://www.msu.edu/user/delgadoi/192.html Standard Curve m g of standard B ...

（一）双缩脲测定法 1．原理 蛋白质中的肽键有双缩脲反应，在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物，在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。此法特异性强，游离的氨基酸、小肽和核酸均不产生这种反应，但此法不够敏感，仅能测出毫克水平。 2．试剂配制 硫酸铜（CuSO4 .5H2O） 1.50g 酒石酸钾钠 5.00g H2O 500.0ml 10%氢氧化钠（不含硫酸钠）300ml H2 ...

本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比 ...