蛋白质含量测定

实验原理 血红蛋白具有类过氧化物酶活性，可催化H2O2释放新生态氧，使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化，由无色最终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较，可测出其含量。 实验方法 材料： 1．2g/L邻甲联苯胺溶液 2．1%H2O2 3．10%醋酸溶液 4．分光光度计 方法： ...

目前常用比色法测定样品蛋白的含量：Bradford法（考马斯亮蓝法）、Lowry法（Folin-酚试剂法）、 BCA法等。但各有优缺点，大家可以根据具体情况选取。按相应蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂 ...

稳定性同位素不具有放射性，无论在分离、标记化合物合成及应用过程中均无特殊防护要求，操作简便、使用安全、无毒性，可直接用于动物及人体的营养学、临床医学研究及生物医学、药物研发、营养代谢等等诸多领域。生命科学领域，核磁共振（NMR）和质谱（MS）波谱研究不同蛋白质种群的结构、功能等需要稳定性同位素整合技术，其中包括同位素编码亲和标记方法（ICATTM）、细胞培养中氨基酸稳定同位素标记技术（SILAC） ...

蛋白测定是在生命科学研究中最广泛应用的方法之一。在蛋白提纯，电泳，免疫分析，细胞生物，分子生物和其他研究应用时评估蛋白浓度是必需的。虽然目前有各种不同的蛋白测定方法，但仍然还没有一种测定方法被认为是广泛适合于所有的应用要求。每种方法都有它的优点和限制。一般来说，研究中经常需要用到一种以上的蛋白测定方法以排除一些未知的物质的干扰。 大多数蛋白样品可通过比色测定法定量。在典型的蛋白测定中，化学试剂加 ...

定量蛋白质组学是蛋白质研究的前沿学科。目前常用的定量蛋白质组学研究技术有荧光差异凝胶电泳（DIGE）、同位素亲和标记（ICAT）等。同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术。结合非凝胶串联质谱技术，该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究，具有较好的定量效果、较高的重复性，并可对多达8种不同样本同时进行定量分析。 蛋白 ...

一、试剂 1. 试剂甲：碱性铜试剂溶液中，含0.5n NaOH、10%Na2CO3、0.1%酒石酸钾和0.05%硫酸铜，配制时注意硫酸铜用少量蒸馏水溶解后，最后加入。 2. 试剂乙：与前面的基本法相同。临用时加蒸馏水稀释8倍。 3. 标准蛋白质溶液：同基本法。 二、操作步骤 测定标准曲线与样品溶液的操作方法与基本法相同。只是试剂甲改为1毫升，室温放置10分钟后，试剂乙改为4毫升。在55℃恒温水浴 ...

一、试剂 1. 试剂甲：碱性铜试剂溶液中，含0.5n NaOH、10%Na2CO3、0.1%酒石酸钾和0.05%硫酸铜，配制时注意硫酸铜用少量蒸馏水溶解后，最后加入。 2. 试剂乙：与前面的基本法相同。临用时加蒸馏水稀释8倍。 3. 标准蛋白质溶液：同基本法。 二、操作步骤 测定标准曲线与样品溶液的操作方法与基本法相同。只是试剂甲改为1毫升，室温放置10分钟后，试剂乙改为4毫升。在55℃恒温水浴 ...

一、实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质 ...

一、实验原理 双缩脲法（biuret法）和folin—酚试剂法（lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由bradford建立的考马斯亮兰法（bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰g-2 ...

1. 280nm的光吸收法 因蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处具有最大吸收，且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大，因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。 测定时，将待测蛋白质溶液倒入石英比色皿中，用配制蛋白质溶液的溶剂（水或缓冲液）作空白对照，在紫外分光度计上直接读取280nm的吸光度值a280。蛋白质浓度可控制在0.1～1.0mg/ml左右。通 ...

一、实验原理 这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。folin&mdas ...

样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： nH2CH2COOH+3H2SO4——2CO2+3SO2+4H2O+nH3 (1) 2nH3+H2SO4——(nH4)2SO4 (2) (nH4)2 ...

一、实验原理 双缩脲法（Biuret法）和Folin―酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料，在 ...

视频介绍了体外试管、体内培养细胞蛋白质泛素化的检测方法。该方法同样适用于其他类泛素化小分子修饰的检测，例如苏素化和neddylation。

蛋白质定位或细胞器形态学的高通量检测法，是一种研究蛋白质相互作用的有效工具，它可以帮助获得一个对分子途径的全面了解。

酵母是研究内质网-质膜膜接触点（ER-PM MCSs）的理想模型，因为每个酵母细胞有超过1000个的触点，而且它在所有的真核细胞中均具有保守性。我们已经用即将描述的方法鉴定出几个新的定位于ER-PM MCSs的蛋白质。

为了阐明特定蛋白在细胞胞吞过程的转运机制，有必要精确测定该蛋白质的胞吞速率。视频介绍了一种利用可逆性生物素化来测定多巴胺转运蛋白胞吞速率的方法。

蛋白质定量（一）Bradford法 该方法用于大多数蛋白质定量是相当精确的，特别是用于小分子多肽定量。如核糖核酸酶或溶菌酶等。但是，去污剂的浓度超过0.2%则影响定量结果。如TritonX-100SDSNP-40等。（1）Bradford染液配制：将100mg考马斯亮蓝溶于50 ml 95%的乙醇中，加入100ml 浓磷 酸，然后，用双蒸水补充至200ml，放4C至少6个月。这种染液也可从B ...

野生型p53蛋白可以通过诱导凋亡而抑制肿瘤的生长，突变型p53基因丧失了诱导细胞凋亡的能力，从而增强了细胞的恶性转化能力，而且在恶性肿瘤常可检测出突变型p53基因。p53蛋白也可能参与化疗药物诱导的细胞凋亡。本法运用一步夹心免疫法，定量检测野生型或突变型p53蛋白。【样本来源】（1） 人、鼠、兔的组织切片（2） 肿瘤细胞株【材料与试剂】（1） 过 ...

测定蛋白质含量的方法介绍