蛋白质含量测定

平行反应监测（ Parallel Reaction Monitor-ing, PRM）是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术，能够对目标蛋白质、目标肽段（如发生翻译后修饰的肽段）进行选择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。PRM技术首先利用四级杆质量分析器（如Orbitrap系列）的选择能力，用Q1选择目标肽段的母离子；随后在collision cell中对母离子进行碎裂；最后利用高分辨、高质量精度分析器在二级质谱中检 ...

2020-09-14

Label Free非标记定量技术

非标记定量蛋白质组学(Label Free)近年来成为重要的质谱定量方法，按照其原理进行分类，可以分为两类。Spectrum counts类的非标记定量方法，发展比较早，也形成了多种算法进行定量，但是主要的原理都是根据MS2的鉴定结果作为定量的基础，各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量方法的原理是以MS1为基础，计算每个肽段信号在LCMS质谱上的积分，目前Label Free主要的数据分析方法 ...

2020-09-07

Label-free/iTRAQ定量蛋白质组学技术

定量蛋白质组学分析定量蛋白质组学分析（Quantitative Proteomics）是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白，结合生物信息学揭示细胞生理病理等功能，同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。目前定量蛋白质组学技术常见标记（Label）和非标记的（Label Free）定量策略。定量蛋白质组学技术常见的几类主 ...

2020-08-25

免疫印迹（Western Blotting）实验

免疫印迹（Western Blotting）的基本原理及应用免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术，在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物，然后利用抗原-抗体的特异性反应，从蛋白混合物中检测出目标蛋白，从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。Western blotting还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析，作为一种廉价、便捷、可靠的研究工具，将 ...

2015-10-30

【资源】蛋白定量FAQS

蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功，或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存，需对细胞裂解液进行蛋白定量；为了判定蛋白的产量，需对纯化好的蛋白进行定量；为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记，同样需首先对蛋白样品进行定量，以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒，如BCA定量试剂盒等，操作起来，简便快捷。当然也有不少实验室，还是采用传统的方法进行 ...

2015-06-29

【转帖】考马斯亮蓝测定蛋白含量

一、原理考马斯亮蓝G-250（Coomassie G-250）是一种甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的蓝色染料，在465nm处有最大吸收值。考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质—考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收λmax的位置发生红移，在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质—考马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此，可大大地提高蛋白质的测定 ...

2015-06-29

考马斯亮蓝G—250染色方法

一原理：考马斯亮蓝G—250法于1976年由Bradform建立。考马斯亮蓝G—250具有红色和蓝色两种色调，在酸性溶液中，其以游离态存在呈棕红色，当它与蛋白质通过疏水作用结合后，变为蓝色。色素对可见光谱的最大吸收值从465nm转移到595nm处。蛋白质和色素的结合反应很快速，约在2分钟左右的时间内达到平衡，在室温1小时之内是稳定的。在0．01一1.0mg蛋白质／m1范围内，蛋白质含量与A 595值呈正比。二、染液配制 ...

2015-06-29

【原创】微板考马斯亮蓝蛋白定量法，大家共享!评论一下各位的心得

微板考马斯亮蓝蛋白定量法1. 0.01%考马斯亮蓝液的准备称取10 mg考马斯亮蓝（coomassie brilliant blue，CBB）G-250溶于5 ml 95%的乙醇中，加入85%的磷酸10ml，混匀，作为储存液保存于4℃。使用时取此母液每1.5 ml用双蒸水稀释至10ml即为工作液，应避光保存，一月内用完。若有不溶沉渣宜滤纸过滤后使用。2. 制作标准曲线表1 组织匀浆液蛋白含量测定中标准曲线的制作试管编号 1 2 3 4 5 6 7BSA Conc 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1（mg/ ...

2015-06-29

借问一个问题: 定量很低浓度的蛋白

借问一个问题---定量很低浓度的蛋白请教一个问题:各位朋友：我用一篇文章中介绍的BCA微量法测定微量蛋白浓度,结果发现其漏了一项NaHCO3 于是加入相应量的NaHCO3, 结果线性关系还是不好, 而且不稳定, 所以想找原始文献, 但我一直找不到原始文献:不知那位用过这种方法请指点指点，或者手头有这篇文献提供参考, 谢谢！Schoel, B., Welzel, M., and Kaufmann, S. H. E. (1995) Quantification of protein in dilute and ...

2015-06-29

【资源】bradford法测蛋白方法步骤及视频

http://v.youku.com/v_show/id_XNzcxMjMzMjg=.html具体操作步骤:（一）实验原理双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的 ...

2015-06-29

残留菌体蛋白含量测定规程

1材料和试剂:1.1.1包被液:碳酸盐缓冲液，PH9.61.1. 2洗涤液:PBS-Tween20,PH7.41.1.3稀释液:0.5%BSA-PBS-Tween20,PH7.41.1.4底物缓冲液:柠檬酸-磷酸盐缓冲液,PH5.01.1.5底物液:邻苯二胺8mg溶于底物缓冲液20ml,30%H2O230ul1.1.6终止液:1mol/LH2SO41.1.7兔抗大肠杆菌抗体1.1.8 HRP酶联兔抗大肠杆菌抗体1.1.9菌体蛋白标准:中国药品生物 ...

2015-06-29

血清中COMP检测及临床意义

血清中人类软骨寡聚蛋白（COMP）检测及临床意义：背景介绍：COMP最早被认为具有软骨特异性，表达于软骨细胞周围的基质中，但近年研究表明，COMP在所有关节结构中均有表达，包括韧带、半月板、肌腱、滑膜。此外，视网膜和血管平滑肌细胞内也能表达COMP,COMP主要由软骨细胞和滑膜细胞分泌。软骨寡聚基质蛋白是近10余年来新发现的软骨代谢标志物,能反应关节滑膜炎的活动性及骨与软骨破坏的一种较为敏感的血清学标记物。COM ...

2014-10-08