蛋白表达

促性腺激素释放激素（GnRH）是一种可调节垂体释放黄体生成素和卵泡刺激素的小肽，这些促性腺激素对生殖功能的调节至关重要。下丘脑GnRH神经元的协调作用是一种很复杂的机制，由此我们提出了一种优化的同步记录双体GnRH神经元的方法。

DNA结台蛋白的分离及克隆 上面简单介绍了鉴定DNA结合元件所结合蛋白质的最常用的方法，对蛋白质更深入的分析应对其相应的基因进行克隆。基因克隆后，就可以通过基因突变判断蛋白质和某生物过程的关系，确定负责蛋白质活性的结构域，分析该蛋白质的作用机制和调控模式。 (一)蛋白质纯化法和序列分析法 克隆DNA结合蛋白，首选蛋白质纯化法，在得到氨基酸序列后，设计PCR简并引物，用于扩增基因片 ...

科学家们近日首次实现了对物种在整个表达谱范围内的蛋白表达噪声测量。该项成果是单分子技术与系统生物学交互融合的典范，预示了单细胞基因表达分析时代的来临。

In vitro transcription with yeast nuclear extract Steve HahnWear gloves throughout use RNAse free solutions (either autoclaved or sterile filtered) and clean bench and pipetmen with 95% ethanol before ...

TRTn3 terminal inverted repeatsHAHemagglutinin (HA) epitope loxRlox site target for Cre recombinaselacZ5'-truncated lacZ gene encoding beta-galactosidaseURA3URA3 gene from S. cerevisiaetetTetracycline ...

Large Scale Tubulin Preparation Tubulin is purified from bovine/porcine brain by two cycles of polymerization/depolymerization followed by removal of copurifying proteins on a phosphocellulose (PC) co ...

约翰斯霍普金斯大学的科学家们使用一种他们研发的方法，在将人体中一种细胞移动到精确位点时，能够不时的进行观察。这种方法可以了解一种蛋白质为何和如何在一个位置能进行信号传递和表达增加，而同样的蛋白质在另一地点则死亡。他们的研究发表在2月14日《Nature Methods》上，用一种化学工具将细胞内的蛋白质移动到外周一个称为质膜的地方。

Materials •Suspension culture of fibroblast cells (1 liter) •35 mM Tris-HClpH 7.4140 mM NaCl (TBS buffer) •10 mM Tris-HClpH 7.510 mM KCland 1.5 mM magnesium acetate (TBS-M) •10X T ...

Motor proteins of several kinesin family groups have now been crystallized: monomeric Kinesin-1 motor domains from humanrat and Neurospora (Kull et al.1996; Sack et al.1997; Song et al.2001)and dimeri ...

Adapted from W.C.CopelandProtein Exp.& Purif 9(1997)1-9 and Schneideret.al.JBC 273:34 (1998)21608-21615. Obtained from Fanning lab and revised by LSM7/23/01 Obtained cell stock of BL21(DE3)cells c ...

Comments: pSV281 RPA70AB Constructed by L.Mizoue; May '02.This plasmid encodes RPA 70 subunit residues 181-422 as a fusion protein with an NT 6His tag.The tag can be cleaved off with TEV protease (rec ...

Materials Expression plasmid (e.g.pET/Ncd in BL21(DE3)pLysS host cells) ZB = 10 g NZ-Amine A 5 g NaCl 860 ml final volume 10X M9 Salts = 1 g NH4Cl 3 g KH2PO4 6 g Na2HPO4 100 ml final volume M9ZB = 86 ...

将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活 ...

一、MTT比色法检测细胞活性 （一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 （二）试剂准备 1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中抽滤除菌。 2、L15基础培养基：1000mlL15培养基，加2g碳酸氢钠，10ml 1 ...

结晶紫法活性测定 1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞，用0.25%胰酶（以无钙镁离子PBS溶液配制，pH7.4）消化后，加入RPMI-1640培养基（10%新生牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素，pH7.2）吹打细胞，使形成细胞悬液。进行细胞计数，使细胞数为2~2.5×105个/ml。接种于96孔细胞培养板，100µl/孔。接种细胞时须不断摇动细胞悬 ...

在原核蛋白表达过程中，选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素：表达载体、宿主菌株、表达诱导条件以获得最满意的表达效果。事实上，在平时的实验中，最容易被忽视的就是宿主菌的选择――多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株，或者是载体配套的菌株，而不去追究原因――即使表达结果不佳，大多在表达条件和载体上找原因，也不会考究菌株的选择是否适合。 作为原核表达的宿主，对外源基因的表达会产生一定的 ...

表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。当然，它也存在一些缺乏高级修饰、细胞内部还原性过高等缺点。 原核表达从一开始的设计就非常重要，所谓好的开始是成功的一半 ...

之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的pET系列载体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darmstadt，已有300多年的历史。已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建有62个生产基地。 ...

常用核酸和氨基酸代码 Amino Acids Table Here is a list of the standard one-letter amino acid codes and their three-letter equivalents. The synonymous codons and their depiction in the IUB codes are shown. You sh ...

影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外，还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素。由于VectorNTIsuitor7.0软件模拟表达，可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难，所以本实验的工作主要针对载体拷贝数、载体稳定和宿主菌的生长状态。 本实验中重组表达质粒PrP-pET-32 ...