蛋白表达

蛋白表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。越来越多的基因被发现，其中多数基因功能不明，利用蛋白表达系统表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。常见的蛋白表达系统包括大肠杆菌/原核蛋白表达系统、酵母/真核蛋白表达系统、哺乳动物细胞蛋白表达系统、昆虫细胞蛋白表达系统、植物蛋白表达系统。在此针对一些常见的问题进行总结，与大家共享，共同学习。Q1：为什么蛋白表达出来了，SDS-PAGE检测时大小不符？A1：进行 ...

相信如何提高目的重组蛋白的诱导表达量是很多同学在研究中都会遇到的问题。记得小编在读书的时候就经常在研究这个问题，泡了无数论坛，看了无数帖子，尝试过IPTG的诱导浓度、培养基成分、诱导温度、诱导时间，甚至让别的公司帮忙做密码子优化（将目的片段通过全基因合成的方式合成出来）。总的来说，提高IPTG浓度是可以提高目的蛋白的诱导表达量的，但一般也就用到1mM的浓度，再高对细胞有毒性； 培养基营养越丰富，表达量越高，所以如果追 ...

通过对90多种真核蛋白在原核中的表达总结出提高可溶表达的一些经验，很有借鉴意义～AbstractBackground: In the search for generic expression strategies for mammalian protein families several bacterial expression vectors were examined for their ability to promote high yields of soluble protein. Proteins ...

今天进行了GST融合蛋白的表达，pGEX-4T-1载体,BL21菌。步骤：摇菌至A600：0.7，然后加IPTG诱导3小时，温度35度（终浓度：0.3mM)，取1ml诱导后菌，离心去培养基，冰冷PBS洗一次，离心，吸净液体，加入undefined上样缓冲液50微升和终浓度1mM PMSF，100度煮菌5分钟，离心，取20微升上清跑胶。结果如图。1.空载体对照有GST的表达2.所有重组载体同样有GST大小的片断，（箭头 B）3.箭头A所示的条带在空载体 ...

蛋白表达及纯化研究中的FAQ一、原核蛋白表达及纯化1、怎样提高E.coli中6′His标签蛋白的表达水平？6 × His标签蛋白的表达水平低原因可能为：目标蛋白有毒或不稳定，或者是细菌生长过程中不能维持表达结构。有时候，插入片段的5’端序列编码了干扰转录或翻译的元件（比如有反向重复序列而形成茎环结构，掩盖了Shine-Dalgarno序列），在这种情况下，有必要检查和修改表达序列。改变培养基和宿主菌也可能会有所帮助。外源性 ...

因为最近做了好几个非常毒的蛋白质的表达，为了取得良好的表达效果，痛下血本买了NEB公司的T7系列的全部表达株。需要注意的是，NEB公司在中国是不卖这些细胞株的，尽管我曾经跟他们的经理表示愿意高价购买这些菌株。无奈之下，托了在美国baylor 医学院的一个朋友帮我买了四种细胞，今天凌晨带回来给我了。我在下面介绍一下这些细胞株的特点，相信战友一定能发现其很多亮点（http://www.neb.com/nebecomm/pr ...

刚刚去BD网站，发现一个优惠活动，送BD绿色荧光蛋白表达载体，原价是6000千元的，赶快贴在这里，大家赶快去要呀，是个好东东！！Free AcGFP green monomer vector while supplies last!Commemorative Promotion: Ten Years in Fluorescent ProteinsDear Researchers,Over the past ten years, your feedback has helped Clontech beco ...

体外小麦胚系统+ 脂质体技术亚诺法体外蛋白质表达系统以小麦胚真核翻译机制为基础开发而成。小麦胚将所有翻译所需的成分存储于干燥浓缩的状态，在胚芽开始成长时即进行蛋白质的合成。普通的小麦胚萃取物中包含有RNA N-糖苷酶麦芽凝集素和其它翻译抑制物，例如硫堇、核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶类和蛋白酶等。这类抑制物产生于胚乳中。对小麦胚进行充分的清洗从而去除其中的胚乳污染物，使得萃取物具有高度的稳定性和活性。将具有5' 端甲基化与3' 端 ...

人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL）是Kjeldsen等人于1993年在中性粒细胞的特殊颗粒中首先发现的。以往的研究表明NGAL与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号转导以及多种肿瘤的发生与发展等过程密切相关。NGAL在乳腺癌、食管癌、结直肠癌、胃癌、慢性粒细胞性白血病等细胞系中均过表达，并在癌细胞的浸润与不良分化中发挥重 ...

最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。从园子里也学到不少。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正。1. 首先介绍一下背景。载体是novagen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是Invitrogen的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。2. 第一次失败 ...

最近2个月都在做原核表达，刚开始什么都不会，连SDS-PAGE都跑成模糊的一片，其中的辛酸只有自己知道，现在实验慢慢上正轨了，自己也积累了一些经验。很怀恋之前探索的那段时光，现在把我做蛋白表达的过程和一些问题写出来，希望能够帮助开始做蛋白表达的人少走一些弯路。 1、表达载体的构建 构建表达载体是比较简单的，不过也是需要对你的蛋白还有所用的载体有一个详细的认识，对于比较大的蛋白最好选用能够助溶的 ...

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