基础知识

实验一 蛋白质含量测定法本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比 ...

我总结了一下：具体有几类，但有些问题想请教大家。1，由于很多蛋白有各自的特性，我们遇到需要检测磷酸化的时候，可以检索文献资料，看看是否有可靠的方法可选择。2，一些蛋白磷酸化后其生物学功能会发生改变，可以通过检测生物学功能的变化来间接检测其磷酸化是否发生。但是这个办法操作性很差，因为需要提取蛋白并且需要保证其活性，同时也需要一定量才可以达到可以检测到活性变化的水平。3，此外有非特异性的丝，酪氨酸磷酸化抗体，具体情形 ...

选择性阻止大脑中称之为11beta-HSD1的酶在实验中成功逆转了年老小鼠的记忆丧失， 在全球人口老龄化的背景下，这一研究成果将有深远的影响意义。—— Docofsoul Promising Drug Candidate Reverses Age-Related Memory Loss in MiceScienceDaily (Oct. 13, 2010) — Researchers at the University of Edinburgh report a new experimental compou ...

不记得是07还是08年我发过一个帖子，询问western淬灭的解决办法，至今，仍有站有私信我关于这个问题的解决办法。与其一个一个的回复，还是发个帖子，特别说明，帮助更多的朋友走出这个困扰。从私信我的站友的数量上看，western淬灭的现象还是挺普遍的。解决的办法其实非常简单，也常常有人提及，只是我们对这个改进有时不敢相信，或者没有做到相应的程度。呵呵，不卖关子了，下面就对荧光淬灭的现象形成和解决办法做一个详细的解 ...

小弟把最近一个多月来所做的工作，做了个总结，供大家一起分享，希望版主能加分，现在我还是0分，很多帖子不能阅览，希望版主加分，今后我实验有了新的进展，我会把总结发上来，和大家一起分享。我做的是GS115表达VEGF，目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结，再与大家分享。希望大家支持，绝对原创！！！一.实验材料1．菌珠E.coli DH5αGS115酵母菌2．质粒PIC9K/VEGF165重组质粒3．试剂NB酵母氮 ...

丁香园蛋白质技术讨论版公用邮箱正式开通＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝蛋白质技术讨论版目前的公共邮箱之供战友下载资料用，因此导致很多战友的大于300Kb的资料无处上传。鉴于此，特开通这个公共邮箱供广大战友上传以及下载资料用。帐号：dxy-protein@56.com空间大小：2G单个邮件附件上限：15M备份邮箱：backup-protein@56.com空间大小：2G单个邮件附件上限：15M1、上传 ...

为了响应ftp资源讨论版不再处理站友的上传申请而由各专业讨论版的版主负责的举措，现做出以下说明：1.有关蛋白质技术的资源希望通过ftp共享，请在本版 http://www.dxy.cn/bbs/post/page?bid=65&sty=1&age=0&s=493 发新帖申请，一般有五人以上需要后即发给上传密码。是否加分鼓励，由本版的版主根据情况决定。对于不易界定专业的资源，以及部分比较难得的精品，仍然在ftp资源讨论版发帖申请。2. ...

转自科学网论坛 Linxubo 点：free user 下载Molecular Biology Methods Bookshttp://rapidshare.com/files/58795488/201_Combinatorial_Library.pdfhttp://rapidshare.com/files/58796259/202_Thyroid_Hormone_Receptors.pdfhttp://rapidshare.com/files/587 ...

Proteomics in Practice: A Guide to Successful Experimental Design, 2nd, Completely Revised EditionShort descriptionStill the only concise practical guide, this edition combines the best features of a laboratory manual with a concise reference for successful experimental des ...

外源基因在宿主细胞中的高效表达1．有效的转录起始与基因的高效表达有效的转录起始是外源基因能否在宿主细胞中高效表达的关键性步骤之一，也可以说，转录起始的速率是基因表达的主要的限速步骤。因此，选择强的可调控的启动子及相关的调控序列，是组建一个高效表达载体首先要考虑的问题。最理想的强的可调控的启动子应该是：在发酵的早期阶段表达载体的启动子被紧紧地阻遏，这样可以避免出现表达载体不稳定，细胞生长缓慢或由于产物表达而引 ...

你注意过以下技巧吗?1. Milk-based blockers may contain IgG that can cross-react with anti-goat antibodies. This can significantly increase background and reduce antibody titer. Milk may also contain endogenous biotin or phospho- epitopes that can cause higher background.2.To stretch the O ...

想和大家讨论一下关于dominant negative的问题。首先，什么是dominant negative？在网上查到的解释多为：显性抑制---虽然多数的突变都隐性的，可是在遗传学的实验上，也曾观察到显性的突变，如果这突变会抑制或破坏某一正常的功能，就称之为“显性抑制”。在实验中给野生型表达或转入无功能的基因或目的蛋白无功能类似物，观察是否会影响原来也具有正常功能的基因或蛋白的作用。一般用于验证实验的准确性。就我的理解， ...

前两天在网上提问，有不少朋友回答，万分感谢，后来我的一位同学给我寄来了科学出版社的一本蛋白质预测的书的WORD版，放在这儿给需要的人看看。 涉及到的因特网资源物理性质预测： Compute PI/MW http://expaxy.hcuge.ch/ch2d/pi-tool.html Peptidemass http://expaxy.hcuge.ch/sprot/peptide-mass.html TGREASE ftp://ftp.virginia.edu ...

一、蛋白质数据库1.UniProt (The Universal Protein Resource)网址：http://www.uniprot.org/http://www.ebi.ac.uk/uniprot/简介：由EBI(欧洲生物信息研究所)、PIR(蛋白信息资源)和SIB(瑞士生物信息研究所)合作建立而成，提供详细的蛋白质序列、功能信息，如蛋白质功能描述、结构域结构、转录后修饰、修饰位点、变异度、二级结构、三级结构等，同时提供其他数据库，包括 ...

酪安酸差色光谱法1.打开分光光度剂，预热30分钟，是紫外灯处于稳定发光状态2.在2容积为1mlde 微量石英比色杯中分别加入900ulPH7.4,PH12.0的0.1mol/l磷酸缓冲液，把盛有PH12.0缓冲液的比色杯放入样品杯中放入支架上，把盛有PH7.4缓冲液的比色杯放入到参比杯的支架上，然后准确的测出295nm波长下的光吸收值，或用250－350nm扫描3.在上述的2个比色杯中分别加入100UL的待测样品液，小 ...

最近2个月都在做原核表达，刚开始什么都不会，连SDS-PAGE都跑成模糊的一片，其中的辛酸只有自己知道，现在实验慢慢上正轨了，自己也积累了一些经验。很怀恋之前探索的那段时光，现在把我做蛋白表达的过程和一些问题写出来，希望能够帮助开始做蛋白表达的人少走一些弯路。1、表达载体的构建构建表达载体是比较简单的，不过也是需要对你的蛋白还有所用的载体有一个详细的认识，对于比较大的蛋白最好选用能够助溶的标签，但是也不是固定的 ...

watermark分子生物学基础 4.46Mhttp://immuneweb.xxmc.edu.cn/havrd%20molecular/DNAI.ppt蛋白质和DNA的关系 4.88Mhttp://immuneweb.xxmc.edu.cn/havrd%20molecular/DNAIII.pptDNA复制（第一讲） 1.28Mhttp://immuneweb.xxmc.edu.cn/havrd%20molecular/Replicatio ...

觉得这篇文章不错啊，贴出来与大家分享！恳请版主加分！真核表达系统的研究进展经络 陈勇自上世纪70年代基因工程技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今日已取得令人瞩目的成就。在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是原核表达系统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体 (一般为质粒)转化细 ...

随着SELDI技术从美国的引进，有部分战友已经接触到了这个技术，现把园里有关的帖子总结于下。SELDI 芯片的再现性http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1115005&sty=3&keywords=SELDISELDI和飞行质谱所能检测的蛋白质的分子量范围是多少？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=749497&sty=3&keywords= ...

看到坛子里最近有好多朋友发贴问膜蛋白的相关问题，尤其是一些新手。其实坛子里以前就有过不少这方面的讨论，只有你搜索一下就会发现好多有用的信息，肯定比你在那焦虑的等待别人回帖效果好。而且好多新人常常迫不及待的就重复发贴，造成了一定程度的资源浪费，而且这也是版规所不容许的。正好本人最近也在准备这方面的课题，所以顺手总结一下过往的一些帖子，希望对大家有所帮助。（数字仅为标号，绝非排名:P）小弟抛砖引玉，冀望各位不吝拍玉:) 小 ...