基础知识

ahuchxq 最近要提取核蛋白，看NF-KB的近核情况，然后做western，师姐用了碧云天的试剂盒，但是提的不好，基本没有提出来，实验室其他人也用过，感觉也不是很好。请教高人指点，提供些经验！谢谢！fangweibin119 ahuchxq wrote:最近要提取核蛋白，看NF-KB的近核情况，然后做western，师姐用了碧云天的试剂盒，但是提的不好，基本没有提出来，实验室其他人也用过，感觉也不是很好。请教高人指点，提供些经验 ...

dldenglin 求细胞核蛋白提取的试剂配方，及步骤，最好是亲自做过的方法，万分感谢dldenglin 咋没有人理我呢johndxy117 来源不明，貌似是某文献作者传授给师兄的，自己试过几次，纯度很高，在此表示感谢~密度梯度离心法提核蛋白试剂Buffer A: 1.0mM MgCl225mM KCl10mM HEPES(pH 7.5)protease inhibitors 1:200Buffer B: 0.25mM sucrose in Buffer ABuffer N: 1.1mM su ...

zhang7513 请问各位大侠！Myd88代表什么意思？请指教！谢谢！77472087 髓样分化蛋白-88 myeloid differentiation factor 88, MyD88happylife004007 髓样分化蛋白88， 它是一种接头蛋白分子，含有TIR结构域，在天然免疫中介导信号传导。zhouasd 细胞分化因子88.含有TIR结构的接头蛋白刘芯0220 髓样分化因子(myeloiddifferentiationfactor88, ...

zhtiantao 各位大侠好，我现在正在做蛋白的结合实验，但是做了之后不知道怎么计算结合常数，我用的荧光探针是1-NPN,先加入缓冲液和蛋白，然后梯度加入荧光探针，从2uM一直加到20uM，每个浓度得到一个相应的荧光值，现在很多文章上写就是根据Scatchard方程计算结合常数，我不知道怎么算，请高手指教，谢谢！！waterbeijing 到底是什么蛋白结合实验啊，说清楚了大家才好对症下药啊lastone9853 参考你 ...

kevenhui 求教高人，如何在http://www.ebi.ac.uk/网站上作多物种Pendrin蛋白保守性分析呀。gingivalis 打开网站，选择 tool - sequence analysis - ClustalW2 ，新的页面打开以后，输入fasta 格式多个序列。 然后 RUN。kevenhui 谢谢高人，问题解决了 (~R~S~S~undefined) 嘻嘻……本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shi ...

lwq652 微生物中recA基因编码的是什么酶？他有什么作用，他与限制修饰系统有何联系？对他敲除有何用处？bigbang_0_0 DNA重组，敲除以后就不能重组了，质粒在里面就自由了。lwq652 bigbang_0_0 wrote:质粒在里面就自由了。质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？bigbang_0_0 lwq652 wrote:质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗？这个跟RecA的功能没有关系，质粒要保持稳定，除了要敲除感受态细胞 ...

Rachel1123 求助各位高手，RIPA裂解液提取的蛋白可以用于做STAT3的wb吗？还是需要专门提取核蛋白？多谢！顺便再问一句，stat3在胃癌细胞SGC7901中是否高表达？wangfanyun RIPA裂解液可以做stat3的WB。不需要专门提取核蛋白！zfyyzz00 一般来说，stat是转录因子，只有磷酸化的stat才有活性，它通过形成二聚体的形式进入细胞核内，和相关靶基因结合，启动靶基因转录，因此一般情况下 ...

Cherrybei 请教各位高手，“ timing of cotranslational folding”该如何正确翻译？？谢谢！！！新年快乐！freecell 根据这个句子：We hypothesize that the presence of a rare codon, marked by the synonymous polymorphism, affects the timing of cotranslational folding and insertion of P-gp into the membrane, thereby alt ...

bigyugg825 我想知道HIV中p24蛋白的三级结构和相关的一些参数，该怎么去找呢，还是需要什么特别软件？谢谢了gingivalis chack at here: http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do如果 你找不到，把序列贴出来我看看。bigyugg825 gingivalis wrote:chack at here: http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do如果 你找不到，把序列贴出来我看看。我在 ...

tasthma 请问有没有那位战友用过activ motif 公司的核转录因子活性检测试剂盒TransAM p65啊？我想请教一下，是不是一定要做标准曲线啊？zhujoker 这种试剂盒一般都是需要做标准曲线的。tasthma 谢谢版主！那我还得买他们的标准蛋白才行啊zhuqueleee 没有必要的。我当时用的就是这个试剂盒，因为到最后数值都是以OD值表示的，而且试剂盒里面附带有核蛋白和竞争性Oligo作为系统的阳性阴性对照。而且提 ...

andrew240 请问单独的GFP（绿色荧光蛋白）由内质网核糖体合成，然后进入高尔基体吗？还是在胞浆核糖体合成？有没有相关文献证明这个的？我想找一个确定不在内质网合成的蛋白作为对照，不知GFP合不合适。谢谢loneman 根据我看的教科书好像蛋白都是在内质网核糖体上翻译的吧？zhujoker 我也看看了相应的知识，感觉是长进不少，但是有一点可以确定的是蛋白质都是在核糖体上加工出来的，但是没有相应的知识提供出到底是胞浆中 ...

mrliuw 提问：一个蛋白单体没活性（或者说很低），发挥作用需要形成同源二聚体并发生自体磷酸化，但是在对照和实验组之间没有发现有统计学意义的表达量差异，请问做过类似研究的同行，应该如何开展研究？（比如从定位，修饰变化等等）mrliuw 这个是已有文献报道的，在细胞内完成。如果能得到天然的二聚体体，下面要如何开展研究呢？freecell 如果能得到天然的二聚体体,你的研究目的是什么呢？只有知道了研究目的，才能探讨研究手段吧？m ...

luoqq1985 DNA Binding and Transcription Factor Pull-Down AssayArray Analysis of DNA-Binding Proteins请问这两个是什么方法？什么原理？谢谢，freecell Pull-down可译作“蛋白质下调”，基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”( ...

chenglanying 哪位高手能告诉我质谱的研究进展？急急急！dnazyme 问题不具体。如果是仪器问题，去仪器论坛www.instrument.com/bbs.如果是方法建立，去分析版；如果是学术问题，去检索资料。 www3.interscience.wiley.com/journal/49879/homectttongji 楼上说的很对！要具体问题才能具体分析哇~~~shylook chenglanying wrote:哪位高手能告诉 ...

感谢pinghw，本帖已经锁定，如果有战友继续上传，请到http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=2457613&sty=1&tpg=1&age=0跟帖！谢谢大家的积极参与！ 蛋白版的公共邮箱为：dxyprotein@163.com ，大小2G,最大附件30Ｍ。点击此处去邮箱为方便大家上传及下载资料，此邮箱已经开放使用，公共邮箱的设想及初步使用方法的相关内容请参看下帖，欢迎大家多提宝贵意见，谢谢 ...

在蛋白质组学研究中,如果使用高通量方法会得到大量蛋白质数据, 这就需要采用生物信息学的方法进行处理. 这里介绍一篇文章,希望能起到抛砖引玉的作用, 让大家讨论一下还可以用那些方法进行生物信息学处理.在这篇论文中， 应用了合并2种检索， 非标记定量， 相对量比较（normalized and non normalized），GO term 比较， 3种算法的蛋白定位预测比较， 通路分析，蛋白修饰(包括氨基酸修饰，和蛋白降解修饰)。另外在结果表格中还列出信号肽， 跨膜区，以及 ...

本帖后续更新临时转移至【公告】蛋白版导读--发帖前必读==暨精华帖分类汇总特此公告友情提示：1．为规范起见，特将专人分类改为专题分类，分导读和专业讨论2种。2．部分专题帖因涉及多个领域被重复归类。3．如有分类建议、分类错误或侵犯 个 人 权 利 请直接pm本人，定将致谢/致歉并即刻修改。【蛋白提取】导读首帖：2005-12-06 菌体/细胞裂解法汇总 专业首帖：2004-05-12 提蛋白酶时，缓冲液中为什么要加入精氨和亚精氨以及苯甲脒【凝胶电泳】导读首帖： ...

由于是新手，且前次在实验间隙整理，时间仓促，有诸多不足，现重新整理如下：SDS-PAGE前两条Marker样品弥撒原因SDS-PAGE电泳中溴酚兰指示带弥散的问题电泳时蛋白条带弥散蛋白质跑不到分离胶中SDS-PAGE怎么跑不出带？蛋白条带丢失的原因电泳快速脱色及染色从sds胶里面回收蛋白的几个相关问题SDS-PAGE电泳后可以回收再复性吗？用什么方法保存二维电泳SDS胶？SDS聚丙烯酰胺凝胶的干燥保存方法等电 ...

【兴趣小组】《Guide to Protein Purification, 2nd Edition》读书笔记（二）http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=16631165&sty=1&tpg=1&age=0下载千本书不如好好读一本书，承蒙FreeCell版主提供的资源，《Guide to Protein Purification, 2nd Edition》Methods in Enzymology, Volume 463http://www. ...

1 蛋白质含量测定法2 WESTERN PROTOCOL3 Western免疫印迹（Western Blot）4 蛋白质沉淀法5 蛋白质提取的方法总汇 1 蛋白质含量测定法本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十 ...