基础知识

计算方法一直在蛋白质设计中发挥重要作用。本工作主要集中在搜索蛋白质序列空间，以找到一条或数条与已知结构和功能相容的蛋白质序列。在期望的功能和结构限制下，概率性计算方法为所容许的氨基酸变化范围提供信息。这样的方法可用于指导 建立蛋白质的单个序列或组合库。

无论是保存还是运输，请避免反复冻融。反复冻融，冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构，导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变，从而降低抗体的结合能力，也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否，直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果，如果保存得当，Immune tech（苏州杰恩生物）的抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。1. 收到抗体和重组蛋白后的操作收到抗体和重组蛋白后（大部分抗体和重组蛋 ...

viola2010 您好，我是新手，请问核蛋白如何提取？试剂盒那个公司较好？kkndd 不用试剂盒，这篇1989年的文章的方法，我们实验室现在还在用，非常有效，非常简单，Nucleic. Acids. Res. (1989) 17: 6419. (PMID: 2771659)这是一篇比较新的文章，用的也是那篇89年的方法，Mol. Cell. Biol. (2000) 20: 8783-92. (PMID: 11073979)xhjggl 上海生工的 BSP009shylook 很多kit都可以用呀 ...

xiaonichi 我现在在做一个蛋白，命名为fkbp38，按道理应该是38kd。因为同家族的fkbp12为108aa，约12kd但现在在ncbi上找到的序列，人的有413个aa，显示的分子量为44-45kd左右这是啥原因呢？xianyuanshan 楼主找到的是这个吗？—— NP_036313peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP8 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protei ...

qingyu2010 打算挑战一下传说中的EMSA所以需要学习提取核蛋白了~不过因为还是菜鸟所以有个小问题。。。我想先做western检验一下核蛋白和胞质蛋白分离的好不好，该选择什么蛋白来检测呢？当然最好能是常用的或者以后也用的上抗体的蛋白啦~对于核蛋白，是不是用histone或者laminin或者大多数转录因子都可以？Thermo的网页上给的是OCT-1，某文献里是SP-1，我用c-Jun之类的OK么?_?对于胞质 ...

米宝 这俩天做实验，极其郁闷。我做的总AKt和pAkt,大鼠脑组织，第一次跑总AKT的时候，我觉得可能是因为蛋白是提取的浓度比较好吧，出来了一条浓浓的条带，三组总AKt都出了，接下来做pAkt,就出了一个带，效果挺明显的。后来再做pAkt的时候，跑了4张膜，显影的时候，太干净了，上面什么都没有，甚至连个杂带，斑点 都没！实验是在实验员的领导下完成的，技术上基本没什么纰漏，查阅本版面有关这问题方面的介绍，有的解释说pakt降解了 ...

winniw214 同样的菌液，用来提蛋白的。因为摇床问题，今天先摇了一半，离心后-80度冻存。另一半正在摇，准备明天离心冻存的。但是发现明天没有离心瓶了。由于是冻菌，不方便借别人的离心瓶。我是想可不可以将现在冻着菌的瓶子拿出来离，反正菌是一样的。但是我介意的是离心是4度，菌液冻存后从-80到4度，又累积了新的菌后又存-80，这样可以吗？紧急提问啊，在线等,谢谢！dnazyme 如果是哺乳动物肯定很多细胞死掉了.大肠也许坚强一些 ...

keep-smile 最近在做原代培养的神经细胞的凋亡研究。对于六孔板中蛋白提取有些疑问。药物处理后，总有一些细胞漂浮起来，估计就是凋亡或坏死细胞，直接吸弃培养基怕对凋亡相关蛋白检测有影响。如果细胞消化离心，又担心提取不够迅速使一些目的蛋白去磷酸化，比如MAPK信号通路蛋白。请问大家，应该怎么解决这个问题呢，有什么好的办法？ronaldo_zj 1. 我们也遇到过类似问题，但经过检测，我们发现培养基上清漂浮的细胞确实就是晚期 ...

owen79 各位大侠好，小弟愚问一下，我想测定NF-KB活化后细胞核内的量，这需要提取核蛋白，但是蛋白量太少，提取出来能否测出NF-KB啊！thank you !ronaldo_zj 1. 通过提取细胞核、细胞浆内的蛋白来行western blot检测NF-kappa B 的表达情况是可以的，因为很多时候是通过NF-kappa B转位来实现活化的，所以提取的时候我不知道楼主是自己配制试剂提取还是用试剂盒提取的，我建议可以将2-3皿细胞（当然是相同的 ...

wyj2002 低氧诱导因子-1 是一种核转录因子，看到有些文献直接抽胞浆蛋白进行实验，请问有经验的朋友，是抽取胞浆蛋白还是核蛋白？先谢过了！xhjggl 可以用胞浆蛋白和核蛋白提取试剂盒，确定其在胞浆和核中的的分布情况，也可能是在胞浆中合成再进入细胞核中的，上海生工就有这样的试剂盒卖。细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织 ...

月下独见 我最近打算提核蛋白做EMSA，我是自己配制的buffer，其中要加入100x Protease Inhibitor使buffer里含有1x Protease Inhibitor。这个100x Protease Inhibitor有没有买的？还是要自己配制。我查了一下资料Protease Inhibitor里含有Aprotinin Leupeptin Pepstatin PMSF，如果自己配Protease Inhibitor的话以上的试剂要 ...

clariceerica 要看某个基因对应的DNA及mRNA上,它翻译出的蛋白的锌指区以及脱乙酰酶作用区各在那一段.B)谢谢啦谢谢啦~~woxingwosu http://www.genecards.org/看看有没有需要的clariceerica woxingwosu wrote:http://www.genecards.org/看看有没有需要的:O):O):O):O)打开了一封天书!!!clariceerica 我..我被打败了.吭哧看了那许多 ...

daydayupmj 最近做了加入刺激因素后细胞AMPK的激活情况，我选择了0,30min ,60min,120min,240min提取蛋白，结果发现在60min 时总AMPK和P-AMPK表达都很弱，有几点不清楚，信号表达会在某个时间点突然降低，然后再回升吗,非磷酸化的蛋白也会随时间变化而变化吗，再有活化情况该如何比较daydayupmj 还有细胞在加入处理因素前需要同步化处理吗07yhguan daydayupmj wrote: ...

霍一刀hxs 如何由已知蛋白查询其调控的基因？已知一个蛋白质，通过哪些方法可以查询其调控的基因？谢谢。woxingwosu 比较直接的是察看看这个蛋白是否含有与潜在的DNA结合（特别是promoter）的区域，然后做一下real time或reporter assay等验证一下，有效果就可以通过点突变等进一步验证。如果要大范围的筛选受其调控的基因，需要microarray或者2D吧，我想。zjubell 呵呵，这个是最典型的免疫 ...

宝贝儿妮妮 请教各位大虾，我做的是AIF（凋亡诱导因子），激活后从胞浆释放到胞核，与DNA结合，引起DNA的片段化那我是不是必须得提取核蛋白，来证实发生了核转位？要怎么来提取效果好一点？时间紧急啊，非常感谢lily628 买抽提核蛋白的试剂盒，国内的或国外的都行．xhjggl 上海生工有 021-37772436细胞核蛋白质提取试剂盒Nucleoprotein Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒提供独特的组份， ...

winniw214 有一个蛋白，我想把它denature之后再进行refolding。（这样可以加入一些调节因子之类的）我想问问具体的方法。网上搜到的都语焉不详。最好有buffer配方和步骤。有相关参考文献也好。谢谢！！蛋白大小为27kD.N端亲水，C端疏水。全蛋白不溶zhujoker 请参考以下两个链接：http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=F5674C5F-89 ...

chenccy 各位老师好，我想问一下，如何寻找一个已知蛋白和其他因子是否结合，以及探寻该蛋白是否作用某些未知的基因？问题问的不好，希望各位老师能帮忙吴佰霖 Co-IP,打质谱woxingwosu 1） 如果是要检验一个蛋白和另外的一个目的蛋白是否结合，有很多方法，包括免疫共沉淀（IP）,pulldown（包括GST和His tag的pulldown等等），免疫荧光染色共定位，BIACORE，FRET（或者BRET）甚至还有超速离心的方 ...

ahuchxq 最近提NF-kB的核蛋白，是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer，一个低渗的提胞浆蛋白，一个是高盐的提核蛋白的缓冲液，我想问的是，有没有可以不加核蛋白的buffer 直接把胞浆蛋白提取来后，直接加SDS 裂解液裂解上样做的?谢谢大家提供点信息。。。fangweibin119 ahuchxq wrote:最近提NF-kB的核蛋白，是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer，一个低渗的提胞 ...

13163666257 there are many proteins can be constrainted. first of all ,you should find a effective method of target proetin constrainting. you can usesoftware to find a method. the method is better than the method from software. the method adopt software and hydrophilemechanism,compari ...

jairsa 求助：蛋白长期保存在处于等电点附近的缓冲液中，是否会影响其稳定性呢？freecell 为何有此说法？一般说如果溶液pH值和其本身等电点相近，蛋白质溶液沉淀。xuezhishui 蛋白质要长期保存最好能够冻干以干粉状保存！另外如果要在缓冲液中保存最好应该避免极端pH值缓冲液和近等电点pH值缓冲液；如果由于实验的需要不好避免的话还是分装以后低温保存，每次解冻后即用，避免反复冻融对蛋白的影响！gaolisuo 在等 ...