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【转帖】蛋白质提取分离技术

蛋白质提取分离技术选择材料及预处理  以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场的 ...

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转载 层析复性蛋白质

层析复性蛋白质李明1 苏志国1 Janson Jan-Christer2 (1 生化工程国家重点实验室,中国科学院过程工程研究所,北京,100080 2 表面生物技术系,Uppsala 大学,Uppsala, 瑞典)摘要在生物学和生物医学中,尤其在制药行业中,蛋白质的体外折叠复性是一个比较棘手的问题。最近利用层析方法复性成为研究的热点,本综述主要介绍层析复性方法的进展。随着基因工程和生物技术的发展,蛋白质克隆与表达已经趋于成熟。在重组蛋白质生产的 ...

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【原创】浆核蛋白提取的一点点实验总结,请各位老师多指正!

核蛋白提取实验准备:1 4℃离心机2 根据标本数计算所需I,II,III,IV总体积,取出液体,并加入蛋白酶抑制剂,(III由加蛋白酶抑制剂I与加蛋白酶抑制剂II混合物)实验操作:1 收集细胞。10ml 对照细胞(1-undefined105/ml )培养48h后,15ml 离心管收集,300g(1370 rpm)_5min。弃上清,加1ml undefinedPBS轻轻涡旋混匀后转移至1.5ml EP管。2 4℃,300g * 5min,弃上清。3 重悬细胞于120μl缓冲液I。4 重悬细胞于120μl缓冲液 ...

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请PM icesugar75

胶体金免疫层析诊断技术是根据免疫反应原理、利用大孔径微孔滤膜为载体、以胶体金做为固相标记物,来定性、半定量或定量检测样本中待测物质含量的一种侧流快速免疫分析技术。它是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、免疫层析技术及胶体金显色技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。近年来发展迅速,目前已经在农业、畜牧业、环境检测、尤其是在医学检验中得到了广泛应用。XXXXXXXX公司是专业提供胶体金免疫层析诊断试剂产品生 ...

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熟悉提蛋白的大侠帮助一下

要做肌浆网上的一蛋白,用RIPA试剂来从组织里提取;按它的说明如下:1.每100mg组织加入1mlRIPA和10ulPMSF(不能预先加到RIPA种,否则PMSF失效)。样本以玻璃匀浆器匀浆,埋在冰里,间或匀浆,避免起泡沫和发热,冰里匀浆;2.将样本转移到1.5ml离心管,4度高速离心30分钟。高速20000g低温离心。3.将上清小心转移到干净无菌离心管中,-20度保存。4.抽提的样本蛋白浓度可以用Lowry 法。空白对照采 ...

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推荐一本书--Protein Arrays: Methods and Protocols

http://www.bio.com/store/product.jhtml?id=prod2020003Protein ArraysMethods and ProtocolsEric Fung, ed.HardcoverPublished April 2004304 PagesISBN: 1-58829-255-XA diverse collection of unique methodologies to synthesize and construct protein arrays for b ...

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表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术

飞行质谱的全称是表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(seldi-tof或seldi)。质谱技术-飞行质谱是由2002年诺贝尔化学奖得主田中(tanaka)发明,赛弗吉(ciphergen)系统生物公司制造的特殊芯片,诞生伊始便引起学术界的重视,成为最引人注目的亮点。  ■工作原理  早期的飞行质谱为基质辅助激光解吸离子飞行质谱(maldi-tofms),基质使被分析蛋白质离子化,再由质谱测定。seldi把基质改为以色谱原理设 ...

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从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记

发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 14:37:18 2005) WWW-POST 本文献给YL 引子  2000年5月6日,我一个人在合肥三孝口书店闲诳,希望买点参考书带出国去。我注意到有一本翻译过来的书, 书名叫做《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。这本书很奇怪,里面列出了很多具体实验的步骤和解释。我很快意识到,这本书实际上是冷泉港实验室开设的一门《蛋白质纯化与鉴定》实验课的教材。这本书深深的吸引了我, 因为里面记录的实验十分经典,涵盖了蛋白质纯化中可能用到的大部分手段,并且对实验细节有十分详尽的解释。 我对这本书爱不释手,于是就买了下来, 而且当时就动了上这门课的念头。这是一个很模糊的想法,没有想到的是,五年以后这个想法竟然实现了。 这一系列文章是我对这次上课经历的全面总结,一部分是八卦,一部分是流水账般的记叙,还有一些是从这课程学到的tricks, 最后也掺杂着自己过去做蛋白质纯化的心得。想到哪说到哪,文字挺松散的,见笑了。 我来解释一下标题。课程结束之后,每一个学员都有一份证书,印着Per Pura

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【资源】各种原核和真核表达载体(总有一款适合你!)

一,酵母表达系统毕赤酵母表达系统(invitrogen公司):分泌型质粒pPIC9K,宿主菌毕赤酵母GS115分泌型质粒pPICZalpha (甲醇诱导)宿主菌毕赤酵母x33分泌型质粒pHIL-S1二,原核表达质粒表达宿主菌为BL21(DE3)系列带His标签(N端):PET5-(a)氨苄抗性带His标签(N端):PET28-(a)卡那抗性带His标签(C端):PET24-(b)卡那抗性带His标签(C端):PET21-(a)氨苄抗性带His标签(N端)+TrxA(硫氧还蛋白):PET-32a氨苄抗性带His标签(N端)+DsbA(二硫键形成蛋白A):氨苄抗性带Gst标签(N端):pGEX-KG,pGEX4T-1,pGEX-5x-1共表达载体:pET-duet。(含有两个T7启动子)表达宿主菌为M15系列表达载体:pQE31表达宿主菌为DH5a,JM109系列热启动表达载体:pBV220克隆载体pGEM-7Z,pUC19 三,自研发原核表达载体1,带His标签(N端):PET-DsbA卡那抗性2,带His标签(N端):PET-DsbA(mutation)卡那抗性说明:DsbA(二硫键形

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【原创】关于鞘氨醇,神经酰胺,鞘磷脂,鞘氨醇磷酸盐,糖鞘脂,磷脂酰肌醇

Sphingosines鞘氨醇Synthetic Sphingosines with C18 Sphingoid Base(合成鞘氨醇与十八类鞘氨醇碱)Synthetic Sphingosines with Sphingoid Bases other than C18合成鞘氨醇与类鞘氨醇碱比其他Synthetic Dihydrosphingosines(二氢鞘氨醇)3-Keto-Dihydrosphingosines (3酮-二氢鞘氨醇)Phytosphing ...

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【信息】Northstar BioProducts(NSBP)

Northstar BioProducts(NSBP),是美国ACC公司旗下研究产品的总称。Northstar BioProducts(NSBP)为应用设备提供一流质量的试剂和优质的化学品,用在糖生物和糖蛋白性质鉴定方面。原Seikagaku America生产的产品现在由美国ACC公司负责管理,并将其归属到Northstar BioProducts(NSBP)品牌下进行销售。Northstar BioProducts(NSBP) ...

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2D第一相是IEF玻璃管的请进

刚开始做,希望多认识几个朋友,做了好几次,都没有出来结果,请多指点Gel Recipe6.6 g Urea1.59 ml Acrylamide/Bis (28.38g:1.62g to 100ml)2.4 ml10% Triton X-1000.48 mlampholyte pH5-80.12 mlAmpholyte pH3-10 (optional)2.4 mlWater12 μlTEMED90 μl3% Ammonium PersulfateThis makes 12 ml total volume, enough to cast two pieces of slab gel (OCEAN mini gel system). Degas the solution before addition of ammonium persulfate.Sample buffer (2X)9.5 M urea5.7 g2.0% Triton X-1002.0 ml 10% Triton X-1005% 2-Mercaptoethanol0.5 ml1.6% Ampholyte(pH 5-8)

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【原创】代谢组学3月份月刊

大家好,为了增进跟各位老师和同学之间的学术交流,我们做了个月刊,这是第一期,以后每个月都有,内容涵盖了近期代谢组学的发展、新技术介绍、实用小技巧分享等多个方面,希望能为大家带来一些帮助!同时,也欢迎各位积极发言,如果有什么是您想跟大家分享或是想要了解更多的方面,请将信息反馈给我们,谢谢! Ⅰ、新技术介绍——ADEMA:一种新的预测分类的方法Ⅱ、如何从SIMCA-P中导出scoreplot等分析图的数据?Ⅲ、2013年03月精品文献1、Comprehensive Analysis ofLC/MS Data Using Pseudocolor Plots2、Evaluation and optimizationof metabolome sample preparation methods for saccharomyces cerevisiae3、Metabolomic profiling as auseful tool for diagnosis and treatment of chronic disease: focus on obesity,diabetes and cardio

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【交流】重组蛋白A在免疫试剂应用中的新进展

重组蛋白A在免疫试剂应用中的新进展广州精达公司-美国免疫学博士 胡勇摘要 抗体是免疫诊断试剂领域最重要的原料,蛋白A是纯化抗体最有效的工具,广泛用于免疫诊断试剂的许多领域。重组蛋白A具有产量大,成本低,纯度高,特异性好的优点。重组蛋白A的国产化将极大促进免疫诊断试剂的产品开发和市场效益。 关键词 抗体纯化 免疫诊断试剂 重组蛋白A 国产化蛋白A(Protein A)为金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白,具有与人类和哺乳动物血液中免疫球蛋白IgG分子的Fc段特异性结合的能力,广泛应用于各种免疫诊断试剂的制备,包括抗体的检测和纯化、免疫细胞化学、病原体的快速诊断;蛋白A也可用于免疫吸附治疗领域。采用发酵、基因诱导、镍柱纯化生产的重组蛋白A使得其成本下降、纯度提高、特异性增强,已经成为免疫诊断试剂抗体制备中最重要的工具!目前,国外有2-3家蛋白A的产品在中国销售,但价格昂贵;国内已有数家公司开展了蛋白A 的克隆或表达,其中,广州精达公司采用美国克隆和生产工艺,顺利的完成了该种产品的国产化。I、蛋白A的应用范围1、用于抗体的检测和纯化 由于蛋白A与IgG具有特异性结合

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【资源】SDS-PAGE经验集锦:有详细的操作细节!

【我们实验室的SDS-PAGE改良集锦】蛋白SDS-PAGE电泳及定量在《蛋白质技术手册》基础上,根据实验条件的方便修改。请仔细看各种细节改良,各种操作效果经本实验室5年验证。【一】 储存液配制(均4℃冰箱保存,用完放回)(1)2 M Tris-HCl (实测pH 8.9±0.1,25℃) 500 mL:121 g Tris base加350 mL双蒸水溶解,以玻璃棒搅拌约1 min,缓慢加入浓盐酸(11.8 M)20 mL,继续搅拌均匀,并使Tris全部溶解,溶液澄清,加入适量双蒸水至500 mL,倒入无色玻璃试剂瓶中,4℃冰箱保存。(2)100 g/L SDS 溶液: 10 g SDS (要求高纯度,其质量明显影响电泳效果)加100 mL双蒸水,于洁净的250 mL烧杯中进行微波加热溶解,注意不要爆沸,间歇用玻璃棒搅拌以加速溶解,完全溶解后的溶液应清澈透明无色。倒入无色玻璃试剂瓶中,4℃冰箱保存。冰箱取出后可微波加热促进储存液的溶化。(3)75%(v/v)甘油:于500 mL量筒中倒入分析纯甘油300 mL,加双蒸水100 mL,以一次性塑料手套封口,颠倒量筒使甘油完全溶解,然后倒

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【分享】Food Polysaccharides and Their Applications

Food Polysaccharides and Their Applications, Second Edition (Food Science and Technology)By Alistair M. Stephen, Glyn O. Phillips, Peter A. WilliamsPublisher: CRCNumber Of Pages: 752Publication Date: 2006-05-26ISBN-10 / ASIN: 0824759222ISBN-13 / EAN: 9780824759223Bindin ...

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【转帖】步骤、注意事项、经验等

[转载]个人整理 Western Blot(步骤简略,但注意事项、经验总结、基本原理很全面)螺旋网1、 丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺,应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N,N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g,N,N-亚甲叉双丙稀酰胺1g,加H2O至100ml。)储于棕色瓶,4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0,因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月,隔几个月须重新配制。如有沉淀,可以过滤。2、 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS,1mlH2O去离子水配制,室温保存。3、 分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合,加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。4、 浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中,用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备,再用

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【原创】多肽合成定制服务

一:公司介绍 武汉明皓生物科技股份有限公司(http://www.moonbiochem.com)坐落于武汉东湖高新技术区光谷生物城, 是由一批在生命科学领域具有相当丰富经验的归国博士及经验丰富的专家共同创办的专业的生物公司。武汉明皓生物始终以“一切以客户为本”为理念,致力于为从事生命科学研究的科研人员提供高质量的化合物,多肽,蛋白及抗体产品以及高效优质的生物技术外包服务。 武汉明皓生物科技股份有限公司重在以高品质高质量为基础,以高满意度的客户服务为立命之本。我们坚信我们良好的发展前景和不断完善的经营模式,会为更多的客户提供更完美的,更贴心的服务。二:我们的专长(1)普通线性肽,链长至120个氨基酸,毫克至克级,纯度可达99%(2)简单修饰肽:免费提供N端乙酰化,末端酰胺化(3)C端:酰胺化(NH2),生物素标记 (用赖氨酸侧链连接),PEG2(用赖氨酸侧链连接), C-FITC(用赖氨酸侧链连接),C-AMC N端:乙酰化(AC),生物素标记(Biotin),脂肪酸修饰(Pal, Myr),罗丹明标记, N-FITC,N-5

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【资源】常用DNA去除方法比较

FDA、SFDA对重组蛋白、vero细胞疫苗等生物制品的DNA残留均有严格要求,近年来包括大牌进口产品在内的狂犬疫苗DNA残留超标问题,引起了社会和业界的广泛关注。为什么一个看似简单的问题,却给众多专业人员带来如此大的困扰?一方面是由于DNA超强的化学稳定性,另一方面是由于DNA其带有大量的电荷易与其他生物大分子结合从而产生聚集(吸附)、包裹作用而难以完全除去。DNA的去除方法主要有层析、膜过滤、离心、沉淀、酶解等方法。这里对工业上应该最广泛和有效的离子交换层析、鱼精蛋白沉淀、酶解三类方法进行比较。1. 离子交换层析DNA带有大量的负电荷,可以被阴离子交换剂吸附而除去(或用阳离子交换剂负吸附)。离子交换层析在生物制品的生产中广泛使用,负载量大、成本低廉,尤其工艺中本身具有这些步骤的情况,不需单独增加去除DNA的步骤,通过控制吸附、洗脱条件,就能取得良好的去除DNA的效果。其缺点是在DNA残留要求较高的情况下难以达到。原因在于,当目标产物与DNA带有同种电荷时,分离较为困难;而当目标产物与DNA带相反电荷时,两者会发生聚集和包裹现象,影响去除效果。2. 鱼精蛋白沉淀鱼

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【原创】 氨基酸态氮的测定

关键词:标准物质 食品成分检测 化学试剂 分析试剂 一、双指示剂甲醛滴定法 1.原理 氨基酸具有酸性的一COOH基和碱性的一NH2基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液 时一NH。基与甲醛结合,从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定一COOH基,并用间接的方法测定氨基酸总量。 2。试剂 ①40%中性甲醛溶液:以百里酚酞作指示剂用氢氧化钠40%甲醛中和至淡蓝色。 ②0.1%百里酚酞乙醇溶液。 ③0.1%中性红50%乙醇溶液。 ④O.1mol·L-1氢氧化钠标准溶液,标定后使用。 3.操作步骤 移取含氨基酸约20~30 mg的样品溶液2份,分别置于250 mL锥形瓶中,各加50 mL蒸馏水,其中1份加人3滴中性红指示剂,用O.1mol·L-1氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为琥珀色为终点;另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20 mL,摇匀,静置1 min,用O.1mol·L-1,氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别记录两次所消耗的碱液体积。 4.

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