RNA原位杂交

在基础科研领域，mRNA、IncRNA、circRNA、miRNA是科研界的宠儿，吸引着无数科研狗们前仆后继。打开pubmed搜索RNA的文章，许多篇都有RNA荧光原位杂交（RNA-FISH）的身影，然而受限于实验仪器，技术或者经费的影响，对于一些硕博生们，RNA-FISH始终如那海市蜃楼，可望而不及。没关系，今天科研狗小助手带你手把手做RNA-FISH。一、原理荧光原位杂交(fluorescence in situ hybrid ...

原位杂交实验流程常规脱蜡至水洗。制作湿盒：用5×SSC（35ml）+甲酰胺（35ml）置于湿盒内。30%H2O21份+9份纯甲醇混合液室温处理10min。DEPC水洗3次，每次1min;切片置于湿盒内，用0.2mol/L盐酸滴于组织上，常温15min，用DEPC水洗2次，每次1min（盐酸可中和带电荷的碱性蛋白，降低背景）蛋白酶K覆盖组织，分子杂交仪中37℃20min。蛋白酶K可以消化和暴露被遮蔽的靶核酸，增加探针的结合效率 ...

bingo816 一篇关于miRNA的文章值得分享bingo816 有什么见解的 一定留言啊龍崎 下来看看本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

wgqsdams 各位高手，我们想做miRNA的实验，通过qPCR的方法验证，现在我们自己有引物序列，想找个便宜又有保证的公司进行引物茎环部分的序列设计和合成，请各位高手给指点迷津。谢谢！！masmas 我合引物一般去上海英骏godsay5605 同样推荐英骏，我们合引物也是去他们家epdnge 广州锐博生物可以86964109 最近用上海生工合的，还可以本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

如来的观音 如题，谢谢zjubell 建议先google一下，至少有些基础的认识。原理其实很简单的，用一个带loop的引物去做逆转（单链也行，但带loop的效率会高一些）然后正向引物是特异性引物，反向引物其实是一条通用引物，与loop结合的。再用普通的sybr green直接定量PCR即可。一个样本，一个miRNA几百元其实比较贵了。提RNA，逆转，引物，我觉的50块钱么差不多了。当然，人力比较值钱。wangke80 费用还取决于 ...

xan36 各位大侠，我现在想验证下我的RNA是否为环状RNA。请问有何高招？我能想到的是用RNA酶进行消化，如果被消化了，那么就说明它不是环状的。那么请问，我该选用哪种RNA酶呢？hzfjy 这位大侠，你太牛了，两年前就开始研究环状RNA啦？我是最近刚开始接触的，我也想问这个问题，请问你现在有答案吗？如果有的话，请告之，万分感谢！bingshuangcom8 RNase Rdxy333721 楼上正解vanasil nature上的文 ...

liliuri1231 本人课题需要检测Caspase3的蛋白及mRNA的表达量，众所周知，Caspase3的蛋白有前体（31KD）和激活体（17KD和12KD）之分，但是mRNA也有这种区别吗，如果有的话，我得qPCR的引物应该怎么设计，请大虾指教。shejun1000 liliuri1231 wrote:本人课题需要检测Caspase3的蛋白及mRNA的表达量，众所周知，Caspase3的蛋白有前体（31KD）和激活体（ ...

又忘了了 我们实验用miRNA转染后，下调了目的基因，但是转入miRNA inhibitor后，目的基因水平也是下调的，并且下调水平和miRNA相近，这个是什么原因造成的？难道是inhibitor凑巧也抑制了别的基因了吗？或是别的原因，请大哥大姐们帮帮忙啊，谢谢啦！又忘了了 自己顶一下，呵呵大鹏鸟 你的细胞转染效率如何？转染miRNA后干扰效率如何？如果转染效率低的话干扰效果，miRNA的inhibitor的封闭效果都不会好。 ...

yaoyao82986 想请教一下关于长链非编码RNA的基因多态性（SNPs）的研究方法，如何从已知的lncRNA中选择SNPs位点（pubmed数据库中好像很多lncRNA都没有多态性信息）？非常感谢各位啊！霍一刀hxs 将查询到的lncRNA序列输入http://genome.ucsc.edu/网站中的Blat选项，点击submit，再选择browser,图表中会出现SNPs位点。接下来就可以做SNPs分析了。wils ...

freezingfall 请问战友有没有什么能常温将RNA携带的方法，求具体处理步骤，不胜感激freecell 方法1： 利用INVITROGEN的RNALATER试剂保存RNA。Room-temperature storage (18–25°C) in RNAlater is possible for up to 7 days according to manufacturer’s instructions, although significant mRNA degradation was det ...

otherwise http://azaleasays.com/2009/09/06/brief-history-of-microrna-research/从无人问津到淘金热–微RNA研究简史Posted onSeptember 6, 2009 by azalea今天师兄Charles推荐了2008年Lasker Basic Medical Research Award得主之一VictorAmbros的一篇文章:Ambros,V. (2008). The evolut ...

zwmc 很多文章使用这种方法来表达miRNA, 而且我在论坛上看到很多坛友也比较推崇这个方法。但是我最近遇到了问题：我想要克隆表达的miRNA具有5p和3p两种剪切形式，理论上我把包含该pri-miRNA的基因组片段到表达载体在细胞里表达之后，这种情况下我表达出来的miRNA是兼有5p 3p两种形式？或者是只有一种呢？很困惑，请大家不吝赐教！吴佰霖 1. 查文献，看这个miRNA的5p和3p是否都有表达，还是以其中一个为主要产 ...

perpetuity_love 请问有谁正在做RNAa的研究，麻烦留个言，我想了解一下国内这方面的研究进展。zhujoker 在Pubmed里面使用RNAa搜索一下不就什么都搞定了？freecell http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0008848# What is RNAa?RNAa or RNA activation is a novel small RNA-media ...

myskite 同一张组织切片能同时做microRNA 原位杂交和某基因的原位杂交以及免疫组化吗？zhujoker 不行，一般使用连续切片来达到你的这种研究目的。myskite 哦，谢谢myskite microRNA探针用生物素标记还是荧光标记，还要做某基因的免疫组化myskite 做microRNA的原位杂交，公司说，地高辛比较常用，那么，如果我还要做目的基因的原位杂交，是不是，也要用地高辛标记啊？组化用荧光标记行吗？没做过原位 ...

myskite 网站预测了某个microRNA有两个不同的靶基因，而且，这两个基因都已证实与某一种疾病相关，并两基因间存在相互调控机制。我应该如何设计实验呢？zhujoker 这个说起来很简单啊，但是操作起来是比较麻烦的。首先我还是建议你先用生物信息学软件，多用几个预测一下，因为需要实验验证是比较麻烦的事情。如果可以我建议你分为以下几步来验证你的实验：1.首先构建miRNAs表达质粒！构建质粒注意事项请参考丁香园相应 ...

yinfengzhizi 请问克隆测序出新的microRNA分子，如何知道它的hairpin precursor sequences？freecell try this:http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/help/submit.shtmlyinfengzhizi freecell wrote:try this:http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/help/submit ...

轩竹 请教：miRNA原位杂交中寡核苷酸Tm值的计算？有没有哪位同仁知道LNA修饰的寡核苷酸探针的Tm值应该怎么计算？我看到有些文献上说每增加一个LNA Tm值增加1-8°C，范围太大了，有没有有关的计算公式？急求！！！邮箱地址:xuanzhu1985@sina.commomo8208 帮您顶！帮您顶！轩竹 Post is deletedhp69813031 有一个网站可以计算，我以前还用过，但是我找了半天都没有找到，你自己在找找看。freec ...

jiliki 那里能够检查线粒体tRNA赖氨酸基因上发生1个A8344G突变，该基因与MERRF（伴破碎红纤维的肌阵挛性癫痫）相关。谢谢，有人知道的吗？slytjiaofei 可以咨询一下温州医学院遗传教研室，他们那里专门做线粒体疾病的。jiliki 谢谢啊，问问看baiyongheng http://zjmglab.org/本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师 ...

lily18902 初学MicroRNA/RNAi,看些哪方面的书或是质料好些？谢谢各位！freecell 建议先用micrRNA/RNAi在CNKI搜索，看些中文综述，熟悉了怎么回事后，再看英文综述。另外： “质料“应该是”资料“， 东北人好像都发成“质料” 8D路得自己走 哈哈！同意先看中文综述啊！zywm008 《生物化学实验》 ，《生物化学和分子生物学实验指南》很少谈及microRNA的。-----版主文献是要看的，但是如果完全是刚刚接触我建议最好 ...

kunyushan 遇到一个问题，请达人帮助解答一下，以解心中疑惑。如有人已验证A基因在某种细胞是B微RNA的靶点，若在我的目的细胞系中，用B微RNA模拟或抑制物进行研究，并进一步检测A基因在mRNA及蛋白水平的改变，请问这是否有意义？因未见到这样的文献，故请教。SHIIHS 我认为miRNA对基因是多对一的作用模式，所以不一定有会有mRNA及蛋白水平的改变。如果你验证末改变，可能说明还有别的miRNA对这个mRNA ...