其他PCR技术

的2009年1-3月全文，持续更新（3月11日更新一期）《科学》09年3月06日出版pdf全文http://www.rayfile.com/files/babebccc-0dd3-11de-9021-0019d11a795f/重新整理一下，方便大家下载3月08日最新更新三期《自然》09年3月05日出版pdf全文http://www.rayfile.com/files/40b4522e-0b25-11de-b280-0014221 ...

A. Pilot error hypothesis.Background:This is the most common problem with new people. It frequently happens a couple of weeks after someone is "trained" and when they start to work independently.Symptoms:- i) Other people in the lab have the same primers working on the same type of material, using the ...

PCR产物克隆方法平端连接　　通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PCR产物，用 ...

综合性医药卫生1.中华医学杂志 2.第四军医大学学报 3.北京大学学报.医学版 4.第二军医大学学报 5.第三军医大学学报 6.解放军医学杂志 7.中国医学科学院学报 8.复旦学报.医学版 9.同济医科大学学报（改名为：华中科技大学学报.医学版） 10.白求恩医科大学学报（改名为：吉林大学学报.医学版） 11.湖南医科大学学报（改名为：中南大学学报.医学版） 12.华西医科大学学报（改名为：四川大学学报.医学版） 13.第一军医大学学报 14.苏州医学院学报（改名为：苏州大学学报. ...

丁香园是一个非营利的学术科技网站，其今后发展定位是公益性学术科技类型网站，我们在“独立，非营利，纯学术”的思想指导下来建立和发展丁香园，主要目的是希望继传统知识交流平台（报纸，杂志，期刊等）之后，利用现在成熟和发达的互联网，使之成为一个承载和传播先进科技思想的新平台。这个平台与传统知识交流平台相比，具有如下特点：获取信息速度快，范围广，信息量大，互动性强，成本低。这几个特性是传统知识交流平台所不具备的。目前由于对互联网 ...

老板给定了一课题，希望能通过定量PCR来检测一病原真菌对药剂的抗药性。该病原真菌的抗药性由其β-维管蛋白基因的881位的点突变引起。该菌抗药性β-维管蛋白基因序列为：ATGCGTGAGATTGTGAGTGTTTTCCTCTGACCTCTAACTTCAAGCTGTTGCATGCGTTGAGCTTGTGTTTTGTGCCCTTGATTGTACCCCGCCGGGCGGTGGCAGCTCAACAACAATGCA ...

一、 分子生物学Promega: Promega 公司是分子生物学研究工具的经典品牌，已有接近30年的历史，是生命科学这个朝阳产业中的“老字号”。该公司所特有的萤光素酶生物发光技术，灵敏度高，信号/背景比率低，在基础研究和药物筛选领域内得到广泛的应用和认可。应用范围涉及报告基因检测；细胞学活力、细胞毒作用、细胞凋亡检测；蛋白酶、蛋白激酶、核受体检测，以及描述药物先导物的吸收、分布、代谢、排泄等特征性参数的一系列检测方法。Prome ...

深圳市生科源技术有限公司PCR项目客户问题手册（载录）1．何谓PCR？PCR是多聚酶链式反应(Polymerase ChainReaction) 缩写，是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。是一种选择性体外扩增DNA或Rundefined*段的方法，能使极少量的基因组DNA或RNA样品中的特定基因片段，在短短几小时内扩增上百万倍。2．实时荧光PCR和普通PCR的区别？普通PCR技术：对反应的终产物进行半定量分析或定性分析。实时荧光 ...

荧光PCR原理http://www.dxy.cn:8080/bbs/upload/2005/10/21/32745781.docPCR技术http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=1372243&sty=3&keywords=pcrPCR动画http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3318653_1.htmlRT-PCR 实验步骤http://www.dxy. ...

--------------------------------------------------------------------------------虽然长了些, 但耐心看完,应该对你的问题有所帮助各位战友 我们来聊聊PCR ：）PCR可以说是目前分子生物学实验中应用最为广泛的一种技术。从最初的在几个水浴锅里把试管放来放去，到现在各种先进的PCR仪， 到REAL TIME PCR。 设备是越来越先进，方法是越来越多，但基本的原理还是那套。然而实际操作中，仍然有很多的问题让人头疼。正好看到有人建议来个PC ...

直接PCR方法使PCR可以直接从样本开始，为DNA扩增带来前所未有的便捷。未经DNA纯化而直接使用微量原始样本做模板，为PCR实验节省大量的时间和成本。优势：无需进行昂贵又费时的DNA抽提；样品需求量小；实验方案简便，手动操作步骤少；实验时间极短；已对多种样本类型进行测试；强劲的热启动DNA聚合酶保证特异性和高产量。适用于各类植物样本的高效PCR测试样本：叶片（拟南芥、玉米、水稻、棉花、烟草、葡萄藤）种子（苹果、胡萝卜 ...

PCR技术简史　　PCR的最早设想 核酸研究已有100多年的历史，本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想："经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因"。　　PCR的实现 1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内复制，只是在 ...

大家好，Fluidigm BioMark 系统通过集成流体通路（Integrated Fluidic Circuit, IFC），将上万个微小管道、控制阀门集成到微板上，形成纳升（nL）量级的反应仓，不需特别移液器，就可以同时进行多达近万个常规qPCR (传统Taqman 或其他) 实验。操作简单，既有传统qPCR可定量之好处，又有基因芯片高通量耗材少之优点，能大幅提高实验效率及准确度。· 单个细胞基因表达( Single Cell Gene Expression): ...

结构分子生物学进展梁栋材随着学科的交叉渗透和科学技术的迅速发展，一个极其重要的分支学科——结构分子生物学正在高速发展，并已成为当前分子生物学中的一个重要前沿学科。结构分子生物学是结构生物学中最活跃的研究层次，它是在分子层次上从结构角度特别是从三维结构的角度研究和阐明当前生物学中各个前沿领域的重要学科问题。结构分子生物学是一个包括生物学、物理学、化学和计算数学等多学科交叉的，以结构（特别是三维结构）测定为手段， ...

PCR方法实验步骤和常见问题王秀英 (mary at labome dot com)美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司 (Synatom Research)译者王秀英 (mary at labome dot com)美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司 (Synatom Research)DOIhttp://dx.doi.org/10.13070/mm.cn.1.187日期更新 : 2014-11-05; 原始版 : 2011-10-18引用实验材料和方法 2011;1:187英文摘要A t ...

PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求不高，PCR产物也可不加处理。如果使用Stratagene公司的pfu DNA聚合酶或New England Biolabs公司的Vent DNA聚 ...

一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果减少酶的用量，对许多酶来说，相应延长反应时间（不超过16小时）也可完全反应。二、 选择正确的酶不言而喻，选择的酶在底物DNA上必须至少有 ...

PCR常见问题总汇来源：友谊中联生物科技PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多 ...

pH计使用注意、 一般情况下，仪器在连续使用时，每天要标定一次；一般在24小时内仪器不需再标定。2、使用前要拉下电极上端的橡皮套使其露出上端小孔。3、标定的缓冲溶液一般第一次用pH=6.86的溶液，第二次用接近被测溶液pH值的缓冲液，如被测溶液为酸性时，缓冲液应选pH=4.00；如被测溶液为碱性时则选pH=9.18的缓冲液。4、测量时，电极的引入导线应保持静止，否则会引起测量不稳定。5、电极切忌浸泡在蒸馏水中。6、保持电极球泡 ...

FlashGel:可在五分钟内测出DNA及片断】DNA电泳实时检测预制胶系统Lonza公司有一款新型的DNA凝胶电泳系统——FlashGel，利用创新性的技术它可以在2～7分钟内分离DNA，并且它还有一个奇妙的功能，可以边跑边看。而且利用FlashGel系统，你可以在电泳的同时看到胶中的每一条带。此系统比传统的凝胶电泳更加精确，无需紫外线就可以观察到DNA条带。FlashGel系统采用的是包装好的预制胶和缓冲液 ...