其他PCR技术

实验中的一些好习惯(转自零点花园）问问自己，有没有过发生这样的事：从冰箱中拿出一个EP管，发现上面只有一个数字，打破脑袋也想不起来这个数字的意义；一边讲话一边配PCR反应，加着加着不知道自己加到哪一管了；做完实验后发现有一种试剂有问题，可是同样的试剂有几瓶，再也记不得当时用的哪一瓶……凡此种种问题，归根到底都是因为实验习惯不好。今天看到的这篇文章无论是对实验室新人还是“老手”都很值得一看！( 由于是很多人的经验总结,所以 ...

PCR常见问题总汇(一）PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变性 ...

PCR常用优化策略PCR过程中如果没有找到最佳的扩增条件将会导致产生许多不确定的、不需要的产物，有时甚至没有目的产物；而在另一个极端，又可能没有扩增到任何产物。这时改变已知对引物－模板的忠实性和引物延伸有影响的诸多参数中的一两个，将会达到优化扩增的目的。其中最主要的优化变量包括 Mg2＋浓度、缓冲液pH值和循环条件，在循环条件中又以退火温度最为重要。1．降落PCR降落PCR代表了一种完全不同的PCR优化方法，它不是 ...

确诊丙肝　　目前全世界有近2亿丙肝病毒感染者，我国受感染者就达6000万。由于至今缺乏有效的预防和治疗方法，早期诊断是防止丙型肝炎病毒传播的有效手段。1993年，我国研制成了第一代丙肝检测试剂，但经过多年临床应用，时有漏检现象发生，2003年，科研人员利用新的思路和技术攻克了困扰医疗界多年的问题，研制成了我国自主知识产权的丙肝确认试剂，使广大受血者免受丙肝病毒感染。　　1988年春，一场空前的甲肝大流行突然袭击了中国上海， ...

8月1－10号无人应助贴汇总，请高手出手应助，恳请斑竹从优加分。同时请发贴不规范的战友按照版规修改帖子。求助！ rabbit beta-acitn primer300bp左右http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4003101&sty=1&tpg=34&age=0请大侠帮我看看我的引物！http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4003655&sty=1&tpg= ...

常规PCR一般注意点：1）PCR模板是关键，引物可以优化。制备模板的时候，一定要注意核酸模板的纯度和量。纯度上要避免杂质和杂蛋白质的混入，同时还要注意添加模板的量，模板很理想的话，不用加太多，加的多了，混进去的杂质机会就多了。当模板的浓度过低,比如低于100个分子时, 引物和模板之间就很难发生反应. 引物容易自身进行反应形成二聚体.用 booster PCR,即开始几个cycles保持primer的低浓度,保证primer:tem ...

http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4280976&sty=1&tpg=44&age=0如何用DGGE-PCR研究微生物分子生态http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4283300&sty=1&tpg=44&age=0求助：如何设计这种引物呀？？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4284441&sty=1&t ...

摘录于某公司技术资料我不是做广告的所以贴在这里：RT-PCR 1. cDNA产量的很低可能的原因：RNA模板质量低对mRNA浓度估计过高反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足同位素磷32过期反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系与反应起始时RNA的总量及纯度有关建议在试验中加入对照RNundefined第一链 ...

这个试验如何直接用细菌模板扩PCR？在real time反应中如何选择control 基因？如何知道一个已知序列的基因在保守序列呢 保守序列在引物设计中是否是一个必须明确的问题 保守序列和NCBI中CDS的又有什么区别呢？关于保守序列 如何知道？做RACE时基因特异性引物的设计这样做还能反映目的基因的转录水平高低吗?DNA凝胶直接作为模板DNA变性时间是否与片断长短有关？GenomeWalker Kits可否用来进行未知RNA ...

请问哪里可以购rat heme oxygenase-1（rHO-1）的全长cDNA？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5598968&sty=1&tpg=7&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5570022&sty=1&tpg=12&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5542551&sty=1 ...

核酸版blast精华 【旧贴整理】关于blast 精华如何使用blast 请教如何使用blast 请教blast如何使用？ 轻轻的问：BLAST怎么用啊？ 怎么样操作Blast及其怎么分析可行性 求助•！！！BLAST如何使用？急！！！其它问题 关于BLAST的问题 blast的结果怎么看 求助！！！如何使用BLAST验证引物？ 求教：我看不懂这个Blast结果！ 请教有关BLAST的一个问题 请BLAST高手帮忙分析一下引物 请帮我看看我设计的引物怎样 blast的结果可 ...

多重PCR的一些体会这些年一直做一些多重PCR，对多重PCR，有一些自己的小体会，现写出来与大家一道共享并期待与大家的交流。实际求是的说，高通量核酸扩增技术一直是大规模核酸样品检测分析的瓶颈。现在的样品检测比如基于生物芯片平台的核酸样品检测，都是基于同时对成百上千个样品、上百上千个靶基因位点进行，很不幸的是，现有的核酸扩增技术，当然主要是PCR技术，现有的多重PCR是远远不能满足需求的。因此，现在又很多人都在致 ...

PCR常见问题总汇PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底 ...

众所周知,PCR技术以其高敏感性在分子生物学上得到了广泛应用,然而每一种方法再其优势方面的同时,其不可避免存在相关的问题,比如PCR技术的高敏感性是不是与其高特异性是一对矛盾??本人就个人研究过程中的经验总结几点所得,希望能为大家起到抛砖引玉的作用.首先,先提出影响PCR特异性的几个方面和解决方法:1. 引物序列不用多说,引物与模板的匹配是PCR成功扩增的关键,尤其上下游引物3'端的序列一定是要匹配的,但究竟要几个 ...

PCR常见问题及对策（一）没有得到扩增产物（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。（3）变性温度是否准确：PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。（4）反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶，应在 ...

天津美伦医药有限公司实施GMP工作汇报各位专家、各位领导：天津美伦医药有限公司始建于1989年，隶属于天津医药集团。随着“入世”的要求和市场份额的扩大，老厂房狭小、设备陈旧、主要制药工序均委托加工，加之资金匮乏，严重制约了企业的再发展。2001年初，美伦医药有限公司进行了资产重组,筹建了新的天津美伦医药集团。在董事长赵永良先生为首的公司领导总体策划下，在天津北辰经济技术开发区购地200亩，计划投资3亿元，分三期将美 ...

1.重组PCR原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1263309_0.html2.是直接以初次PCR扩增产物作重叠延伸，还是电泳后切胶回收后再做http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5540543_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/4745715http://www.dxy.cn/bbs/post/vi ...

如何做标准曲线求助：EB毒理学资料求助：酵母总RNA的提取请问这样的实验如何操作？看引物设计得行不行ABI与MJ荧光定量哪个好如何知道我的引物包含有内含子序列多重PCR过程中退火温度如何掌握pcr扩增后的DNA在跑agarose胶之前还需不需要处理一下看我设计的大鼠IL－6引物行不求助RNA提取问题请大家帮忙看看我的引物PCR-ARMS是怎么个做法克隆一种野生大米谷蛋白的编码序列并测序的疑问［求助］AP ...

理论上应该扩增出超过2kb的片段，但每次得到的PCR产物都只有700多bp，跟这个基因的cDNA长度类似。换过好几个模板，得到的结果都相同。上游引物：CATGAGCTACATCAATCTGCCC下游引物：AGTCCAACCTGGGTAGGAGGenebank上查到的序列：小鼠胸苷激酶（tk）基因M684891 ccatggcaga tccggaggga tggtcgagct ccaggctttt cacgtagctg agaggt ...

问题1:不出现扩增条带引物：引物质量是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。对策为：①选定合适的引物合成单位；②引物的浓度不仅要看OD值，最好用引物原液做琼脂糖凝胶电泳，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应与引物合成单位协商解决，如一条引物亮度高，一条引物亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度；③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏而导致变质降解失效；④引物设计不合理，如引 ...