PCR运用

实验目的：对RNasin性能效果进行检测及评估。实验材料及设备模板RNA：大鼠肌肉组织RNA引物：Rat β-acting：Forward CCCATCTATGAGGGTTACGC Reverse TTTAATGTCACGCACGATTTCRNase：50mg/ml（simgen）RNasin：40U/µlcDNA第一链合成试剂盒（simgen）、2×SYBR Green PCR mix（simgen）设备：ABI 7000 荧光PCR仪、普通PCR仪 ...

PCR技术自1983Mullis发明以来，给生命科学带来了历史性的变化，现已成为分子遗传学、基因组测序和作图、法医学、系统动物学等各领域内不可缺少的工具。但是，普通的PCR最长只能扩展2-3kb左右的短片段基因，对于5kb以上的长片段基因很难有效的扩增，这使PCR受到了很大限制。故人们一直以来都在尝试利用PCR扩展出更长片段的PCR。“LongPCR”这个名词和技术最早由美国华盛顿大学医学院的Barnes WM提出 ...

skybjp123 转录因子可以用荧光定量PCR测其含量吗？能说明问题吗？谢谢啊～～～xdb86 不能说明问题，因为转录因子不是含量高活性就高。需要用荧光素酶报告基因、EMSA、ChIP等方法研究转录因子。skybjp123 不知道western blot 方法测定转录因子的蛋白含量，拿加药组和未处理组进行含量的对比，来说明药物通过这个转录因子来影响目的物质，这样的设计可以吗？谢谢啊～kidderzhou 我们提供转录因子活性芯片及技 ...

实时定量PCR (qPCR)的优势•实时检测PCR反应过程•精确计算出每个循环的PCR产物量•扩增和检测同时进行•消除后续PCR的干扰在实时定量PCR反应中，杂交探针与插入染料如SYBR Green相比是更好的选择。荧光标记探针可以提高实时定量PCR结果的效率、灵敏度和特异性。而且定量PCR可以在一个反应里同时检测多个目标基因。实时定量PCR的应用•基因表达分析•转基因检测和定量•病原体检测和定量•基因型/ SNP分析•突变 ...

touchdown PCR即降落PCR，可以选定一个温度范围，如50——35，每个温度2循环，然后在50度15循环。其原理是，随着退火温度的降低，特异性逐步降低，但特异性条带在温度较高时已经扩增出来，其浓度远远超过非特异性条带，随着退火温度的降低，特异性条带优先被扩增。这种方法的退火温度范围较大，在不知道最佳退火温度时比较适用。http://www.espanol.pcrlinks.com/variantes/touchdo ...

Cloning of Long Genehttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=344365&sty=1&tpg=45&age=0长片段PCR的new protocolhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=350181&sty=1&tpg=43&age=0Pfu DNA polymerase的延伸时间http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67& ...

xjktony扩增模板的GC 含量为66％,也不算很高,我做过更高的GC 含量(80%)的PCR.对于 这种高GC含量的PCR,要加些DMSO等,以解除其二级结构的影响,当然现在也有专门这种PCR Buffer卖.vanny宝生物有这种做高GC含量的酶和buffer，称为LA TAKARA酶，里面有GC buffer，效果还不错。westernblot你用DMSO5％加到里面，60％应该不是算高的，如果实在不行，就用advantage 2 high GC ...

(一）PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质 ...

http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=155886&sty=1&tpg=63&age=0很小的一个软件，也许会有用。可以预测PCR结果，模拟产物电泳效果。序列同源性的分析：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=203297&sty=1&tpg=59&age=0序列分析和多序列比较BLAST Web sitehttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/ ...

PCR enhancer· DMSO and glycerolRecommended by a number of authors to improve amplificationefficiency and specificity of PCR. However, in the multiplex reactionthese enhancers gave conflicting results. For example, 5% DMSOimproved the amplification of some products , decreased ...

PCR相关经验分享PCR常见问题-分析及对策(无扩增产物、非特异性扩增、拖尾、假阳性)问题1：无扩增产物现象：正对照有条带，而样品则无原因:1.模板:含有抑制物，含量低2.Buffer对样品不合适3.引物设计不当或者发生降解4.反应条件：退火温度太高，延伸时间太短对策:1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量2.更换Buffer或调整浓度3.重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物4. ...

没有做过Realtime PCR,先查些资料，顺便贴这儿跟新手们分享一下。定量PCR常见问题及对策Q1．无CT值（信号）出现A1．1.反应循环数不够。一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。2.检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。3.引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。 ...

精华帖是一个版块的主要财富，也是广大战友查阅知识的主要途径，其价值正如其名，是精华中的精华。但是由于本版发帖较多，而且有相当一部分战友还不知道如何去搜索精华帖的内容。另外，大部分精华帖现在已经不再置顶，导致精华帖沉底，以致在前几页无法找到精华帖。鉴于此，特发此整理帖。帖子以超链接的形式列出本版建版以来的所有精华帖，以方便广大战友查阅。请广大战友有何疑问先查阅精华帖，相信你会得到一定的帮助。请勿跟帖,谢谢。丁香园引物 ...

http://www.bioservice.com.cn/protocol_2.asp?info_cat_id=271DNA Repair Protocols SECOND EDITION • ABI实时定量PCR应用培训班讲义• 基 因 工 程 概 论• Adenoviruses: Basic Biology to Gene Therapy• Viral Vectors for Gene Therapy • RT-PCR Protocols RT-PCR • Transgenesis Techniques Principles and Pro ...

Amplification of Genomic DNA by PCR (Robert H. Cruickshank)提供了标准而且详细的方法，包括了一些疑难问题的解答。・ Calculating Concentrations for PCR (Molecular Biology Techniques Manual)关于如何计算引物和核酸浓度的方法。・ PCR (Fermentas)提供了详细的方法介绍，包括混合液的制备、循环条件等等・ PCR (Bowtell Lab)提供了详细的方法介绍……・ ...

PCR 的问题，无疑是绝大多数学生物的人都关心的问题。今天我们把相关内容整理出来，与大家共同讨论，希望对大家能有所帮助。。一、 引物设计所谓“工欲善其事，必先利其器”，这年头手工设计引物的人似乎不多，还是用软件方便些，防止你一不小心看走眼，丢一个碱基，同时计算起来也方便。设计软件有很多，既可以在线设计如Primer3.,http://frodo.wi.mit.edu/也可以用Primer5、Oligo6.0等等。到哪找？别着急，咱论坛 ...

1.多重PCR的相关文章以及原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2077150_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=7917287&sty=1&tpg=1&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4532991&sty=3&keywords=%B6%E0%D6%D8PCRhttp:// ...

1.当PCR结果不满意时,考虑以下几个方面:(1)将PCR反应的试管与反应板紧贴,(2)使用50ul或更少反应体系时,勿使用AmpliWax,两个反应混合液=的操作方式在大多数情况下很有效,(3)当酶反应混合物以70度"热启动"开始循环时,切记在加入酶后稍微振荡一下,因为在0.2ml的PCR管不能均匀传热.(4)不要随意减少dNTP的用量,必需与其他成分保持平衡.2.没有扩增产物:(1)在提供氯化镁缓冲液中,以0.25mmol ...

我先后用以下三对引物扩同一片断，退火温度在55-65度，都不出来。第三对引物Lup1我试过加1，1.5,2ulDMSO还是不出。我该怎么办？难道中间的n的个数不正确，n是两个contig之间的gap，这段序列是从ncbi的UCSC库中提取的。先谢过！Lep5:125-779bp=655bpF:Acccacaactccccttctg（19）R:Ccacacttacacaccgcact（20）Lep1:47-738=692b ...

由于全血中存在有很多PCR反应抑制物，例如，血红素，蛋白质，盐，抗凝剂等，使得常规的Taq聚合酶不能从全血中直接进行PCR反应。因此，现在临床上往往先要从全血中提取DNA, 但即使这样，也不能完全克服上述抑制物的影响，这也是为什么目前临床上的DNA扩增反应，常常失败的原因如果在遗传病诊断中，能够从全血中快速有效地进行DNA扩增，可以节省大量的人力，时间，费用，对临床遗传病鉴定，以及亲子鉴定是一个革命化的改进。KAPA全 ...