Real-Time PCR

一般的数据分析方法的文献光看中文就够头大，但是这个英文文献很通俗易懂，很适合我们初学者。文中列举了几个实际的例子，可以方便大家参考。Example 1The mean CT of the HOXD10 gene in treated and untreated samples was 24.6 and 27.5, respectively. The mean CT of the 18S rRNA in the treated and untreated samples was 9.9 and 9.8, respectively. What is the fold c ...

1.原理，基本步骤http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4476935&sty=3&keywords=%D3%AB%B9%E2%B6%A8%C1%BFPCRhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=9466944&sty=3&keywords=%D3%AB%B9%E2%B6%A8%C1%BFPCRhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=6 ...

1.RT-PCR操作指南http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=130889&sty=3&keywords=PCR%2CRT-PCR2。RT-PCR标本制备http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1309149_0.html3。RT－PCR电子书http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=4137614&sty=3&k ...

很抱歉，这阵子忙了好久，没有时间来写后续的部分。因为第一次写的时候承诺过继续写下去的 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=323830&sty=3 希望没有让等待的战友太失望。言归正传：这一次谈一下逆转录酶和逆转录反应的问题，在一般的逆转录反应中，较常用的是MMLV（鼠源的）和AMV（禽源的）两种，现在更有各家公司推出的耐热的（50-60度）、超长片段的逆转录酶，这方面具有专长的数gib ...

结合网上查阅的一些信息和TaKaRa使用说明书中的引物设计要求，同时结合文献上的论述，总结出Real-time PCR 引物设计的要求及设计步骤。首先向那些以前发布信息的朋友表示感谢！因为有些是引用你们的（由于引用的比较散，无法署名感谢）1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区5’端的300-400bp区域内，可以用DNAman, Alignment 软件看看结果。2.引物长度一般在17-25碱基之间，上下游引 ...

自90年代Taqman探针诞生以来，虽然荧光探针（引物）不断有新的技术出现，但是作为一种经典的定量PCR技术，Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选，这主要是因为相对于SYBR荧光染料，Taqman探针具有序列特异性，只结合到互补区，而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系，因此特异性强灵敏度高，而且条件优化容易；而相对于杂交探针，Taqman探针只要设计一条探针，因此探针设计较便宜方 ...

1．SYBR Green I：一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异性荧光有很大帮助。2．Taqman探针：也称为水解寡核苷酸探针。该探针在5’端标记报告荧光基团，在3’端标记淬灭荧光基团，在探针完整时报告荧光基团发出的荧光被淬灭荧光基 ...

1.选择方法（同管或是不同管）http://www.dxy.cn/bbs/thread/80432892.循环次数选择http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1701400_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4882246_0.html3.内参比目的片断亮http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/po ...

This protocol describes the detailed experimental procedure for real-time RT-PCR using SYBR Green I as mentioned in Xiaowei Wang and Brian Seed (2003) A PCRprimer bank for quantitative gene expression analysis. Nucleic Acids Research31(24): e154; pp.1-8. Please refer to this paper and the P ...

Book Description:The BIOS Advanced Methods series is intended for advanced undergraduates, graduate students and established research scientists. Titles in this series are designed to cover current important areas of research in life sciences, and include both theoretical bac ...

PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 。无论定性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。但是在许多情况下，我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运而生。所谓的实时荧光 ...

实时荧光定量PCR——一种科学准确的定量方法实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。本文试就其定量原理、方法及参照问题作一介绍。一. 实时荧光定量PCR原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧 ...

1。real time PCR原理http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=3425617&sty=3&keywords=real+time+PCRhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1401010_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/4604271http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id ...

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用多聚集链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术及其应用做一综述。1 实时荧光定 ...

实时定量PCR应用中的问题及优化方案聚合酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。随着分子生物学技术研究的不断进展，定量PCR技术取得了突飞猛进的发展，不仅建立了一系列的方法，而且也诞生了许多与这些方法相匹配的新型热循环仪和实验材料。实时定量PCR(real-time qua ...

品牌不是唯一，高性价比的荧光定量PCR仪选购指南从1996年ABI公司推出了全球第一款荧光定量PCR以来，经过10几年的发展，由于荧光定量PCR仪的在科研、检测和诊断领域的广泛应用，市场规模也不断扩大。已有多家国内外生产厂商涉足研发生产,就连Eppendorf公司也于2006年底推出了自己的荧光定量PCR仪。这些产品良莠不齐，令研究人员选择是不免挑花了眼。于是很多资金充足的实验室为了保险起见都选择购买了几家 ...

以前对real-time了解并不多，但是现在工作需要，必须熟悉AB的定量产品，因此对其网站深度挖掘了一番，收获颇丰，给大家贴出来一起进步。总的来说AB的各个地区网站中，个人感觉tw地区的最好，pp的台湾mm，让你的学习体验非常有感觉，请大家点击感兴趣的课程，简单注册后即可免费在线学习，蛮好的哦！Real-Time PCR 原理http://www.appliedbiosystems.com.tw/webinar/reg_rtpc ...

帮朋友发个帖子，他刚进实验室，PCR实践技术还在摸索中，找了以下这些文章来学习，不看不知道，一看吓一跳，这些用Real-PCR做出来的研究好些都发了不错的杂志，影响因子都比较高的，可惜我这边没有权限下载全文，哪位朋友帮帮忙，下载几篇全文吧，本人不胜感激！！！1. 标题: Quantitative analysis of cell-free Epstein-Barr virus DNA in plasma of patients with nasopharyngeal car ...

关于REAL-TIME引物设计和探针选择， 附有三种常用探针的介绍网址，希望对大家有用1.The design step: the selection of PCR primers and probes2.Choice of detection method (SYBR Green or a fluoresent nucleic acid probe) for the real time PCR.Generally, real time PCR with SYBR green is used to optimize primers and is principa ...

Real-Time RT-PCRhttp://www.ambion.com/techlib/basics/rtpcr/by Subbu Dharmaraj, MSRT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) is the most sensitive technique for mRNA detection and quantitation currently available. Compared to the two other commonly ...