PCR技术原理

相信很多人一听到引物二聚体的时候都会很愤怒，因为几乎我们每个人都受到过它的折磨。它作为 PCR 的副产物，甚至有时候是主要产物充斥着我们的整个 PCR 实验过程。你在被它折磨的不行不行的时候，你有想过它为什么总是出现在你的实验结果中吗？接下来就让我带大家走进它的世界，了解它，认识它，最后战胜它。01引物二聚体是什么鬼？引物二聚体其实就是一对引物或者引物自身的 3’ 端部分碱基互补结合，在 Taq 酶的作用下从 3’ 末端延伸所形成的小分子量的双链 DNA 片 ...

欢迎来到《PCR技术讨论版》：本版归属于“实验技术讨论区”，以讨论各种PCR技术和PCR相关技术为主。本版的宗旨是为您提供各种PCR的相关理论和实践经验的交流平台！欢迎您参与交流！发贴必读&加分标准： 新手朋友（0~5分），加分从优 --- 跟丁香园大政策保持一致1、欢迎介绍自己原创资源（包括原创文章、课件、ebook、技术经验、心得体会等），斑竹视情况加1～5分。2、求助或发布资源前请先用 功能在本版检索一下，或到 旧帖资源索引区检索一下（推荐 ...

TaqMan PCR以及ABI-7700的简单介绍------------------------------------------------ABI PRISM® 7700 Sequence Detection SystemIntegrates a PCR-based assay with laser scanning technology to excite fluorescent dyes present in the specially designed TaqMan® probes. It is a fully integrated system for real ...

第一章 PCR和RT-PCR基础PCR基础聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到。反应包括几个成分（表1）。模板可以为纯化的基因组或质粒DNA；由RNA转化得到的cDNA；或未经纯化的粗制生 ...

增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列 退火的引物要符合下面的 一些条件：a.足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60%c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GCe. 避免3'端的互补, 否则容易造成DIMERf. 避免3 ...

聚合酶链反 应（PCR）方舟子　　聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)简称ＰＣＲ，是一项在短时间内大量扩增特定的ＤＮＡ片段的分子生物学技术。【开发史】　　这项技术的发明人是Kary Mullis。１９８３年，在一家生物高技术公司（Ｃｅｔｕｓ）工作的Mullis着手解决用简单的方法鉴定某一段ＤＮＡ的技术问题，有一天晚上他驱车在北部加州１０１号高速公路上，灵机一动想到了一个实际上可以无限扩增某段ＤＮＡ的简单方法， ...

实时荧光PCR检测技术众所周知，PCR（聚合酶链反应）技术自从1985年问世以来，经过十几年的发展，已成为实验室的常规技术。它是现代分子生物学研究中不可缺少的手段，是一种极为敏感的放大系统。相比于传统的临床诊断方法，核酸诊断是分子水平上的诊断技术，可以弥补传统临床诊断方法的某些缺陷，比如，核酸诊断能直接揭示病原体的存在，能客观反映病原体在人体内感染及活动情况，可以作为临床治疗中的一个有效监控手段，另外采用核酸诊 ...

标准的PCR反应体系：　　　　　　 10×扩增缓冲液 　 10ul　　　　　　 4种dNTP混合物 　 各200umol/L　　　　　　 引物 　　　　 　 各10～100pmol　　　　　　　 模板DNA 　　　 　0.1～2ug　　 　　　　　Taq DNA聚合酶 　 2.5u　　　　　　　 Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L　　　　　　 加双或三蒸水至 　100ul　　PCR反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+　　引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用 ...

合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素。选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。许多耐热DNA聚合酶的主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。下面是六种不同耐热聚合酶的比较：Taq：扩增效率最高的耐热DNA聚合酶，能很好的扩增6kb以下的DNA 片段。扩增碱基出错率为10-5左右。Pfu：目前保真度最高的耐热DNA聚合酶，碱基出错率为10-6，但扩增效率低 ...

PCR技术概论聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一Dundefined*段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情，用PCR几小时便 ...

Q1．无CT值（信号）出现A1．1.反应循环数不够。一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。2.检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。3.引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。4.引物或探针的设计，如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。5.模板量不 ...

标准的PCR反应体系：　　　　　　 10×扩增缓冲液 　 10ul　　　　　　 4种dNTP混合物 　 各200umol/L　　　　　　 引物 　　　　 　 各10～100pmol　　　　　　　 模板DNA 　　　 　0.1～2ug　　 　　　　　Taq DNA聚合酶 　 2.5u　　　　　　　 Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L　　　　　　 加双或三蒸水至 　100ul　　PCR反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+　　引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用 ...

vehemency:1。模板可能有降解，建议避免反复冻融，放置时间不能太长。2。抽提RNA时有污染，包括基因组DNA污染和蛋白质污染，需重做抽提。3。提高退火温度，减少非特异性扩增。4。减少循环次数，减少非特异性扩增。5。电泳缓冲液时间太长，ph值和盐离子浓度明显改变。6。电泳时电压不能太高，8V/cm。7。一般来讲，基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中，Mg和dNTP的浓度是相匹配的，不需改动。sstsst ...

PCR版块FLASH动画汇总：思主任以前总结的部分链接：PCR版发布的网络资源FLASH汇总 A flash for RT-PCRPCR FlashPCR Flash推荐一个与RT-PCR有关的FlashA Flash of How RT-PCR is performedPCR-ELISADNA结构FlashPCR原理Primer Premier 5.0演示PCRRT-PCR admation RT-PCR 中文版PCR原理Polymerase Chain Reaction PCRR ...

PCR定义PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。PCR技术的基本原理一.PCR反应成分：1.模板DNA； ...

1.PCR引物序列来做原位杂交的探针序列http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=464691&sty=3&keywords=%D4%AD%CE%BB%D4%D3%BD%BB%B5%C4%CC%BD%D5%EB2.设计原则http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2339929_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive ...

平端连接　　通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PCR产物，用PUS19的Hinc ...

PCR技术简介　前言一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。这也是分子生物医学令人震撼的一例。何谓PCR简单的说，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内 (In V ...

PCR反应模板的制备　　PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等).除去抑制Taq DNA聚合酶活性抑制因子，提高 模板核酸的产量.　　传统的核酸模板提取方法是采用去垢剂如SDS等来破坏细胞组份，溶解细胞膜， 使蛋 ...

－－PCR/RT-PCR疑难问题解答1.问题：RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因：1）RNA被降解建议解决方法：在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA；在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰胺中储存RNA；如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0，否则抑制剂或释放所有结合的RNase。而且，在≥0.8mM DTT时加 ...