cDNA合成技术

longchi 近来看了一些文献，被CDNA有关东西弄迷惑了，请求帮助解惑。1、cDNA是以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录而成，其组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。有文献说“分析XX的cDNA可发现它有一个很长序列的3“ 非编码区域”，既然cDNA不含内含子和其他调控序列，为何还有非编码区域呢，非编码区域不属于内含子或调控序列吗？2、某基因有外显子1含362个BP，外显子2含150个BP，外显子3含1 ...

能nca 我反转录的cDNA，跑了电泳，发现条带是一抹的，但是有三处看着比较明显的条带，我问了别人都说，cDNA的条带都应还是一抹的，没有特别明显的条带，我不知道自己的cDNA除了什么问题，有的人和我说是由污染，到底是怎么回事啊，有出现类似情况的师兄师姐们，帮忙解答一下原因出在哪里啊？nono1986 对总mRNA进行逆转录得到的cDNA是涂抹带的，那三条明显的条带应该是rRNA。能nca 哦，谢谢啊能nca 对了我还想问一下， ...

heychristy 各位大侠 像高手请教两个问题，我以前帮过很多别人呢，希望高手们指导一下：一 我想做siRNA方面的实验，想直接合成siRNA，然后用脂质体转染，想请问是不是直接合成 21bp的正义链和反义链互补的siRNA，然后用不用退火使两者形成双链，是直接转染合成的两个单链呢 还是转染退火以后的双链siRNA？二 如果我想重cDNA用PCR获得目的基因，因为CDNA是不含有内含子的，但又含有5，端和3，端得非编码区，那我设计 ...

clariceerica 笨人多作怪,刚开始试验周围没有师兄师姐的临床菜鸟,请原谅.1,NCBI查到的基因序列应该是cDNA把,有什么办法能以图片或什么易理解的方式显示它在总DNA中占什么位置么?比如之间的intron之类.有文献提到一个叫GRAIL的软件,不过好像过时了,下不到.2,那个cDNA有7k多长,翻译出的肽只900多,是因为翻译前剪切么,又有什么方法能看到cDNA里那些是coding区呢?3,分离外周血T ...

zhang184369688 用survivin引物扩增小鼠卵巢的总cDNA，却扩出了两条条带，而且目的条带不如新出现的条带明显，这是为什么呢？请大侠给予指导！小么小小子 你好，您扩的条带是多大的呢，出现的新条带又是多大的呢~小么小小子 因为我也碰到了这个问题，虽然您帖子有点久了，最后您解决没有呢zhang184369688 我觉得是杂带！小么小小子 时间有些久了哈，我现在做的实验跟你描述的基本一样~也是扩增小鼠卵巢总cDNA，出 ...

dingsl 大家好，有没有同学知道怎么能找到线粒体某个基因的全长cDNA序列呀？找了一天都没找到，数据库上的都只有编码区序列，哭啊，求助中。。。freecell http://www.google.com/#hl=en&source=hp&q=%E7%BA%BF%E7%B2%92%E4%BD%93%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E5%85%A8%E9%95%BF&aq=f&aqi=&aql=&oq=&gs_rfai=CtiHoppNVTNCOGo- ...

yh_sunflower 请问为什么NCBI中的同一个蛋白，同一个物种还有好几种不同的序列呢，以哪个为主呢？waterbeijing 你指的是不止一种cDNA的编码区吧很多时候基因转录有不止一个转录起始位点，而转录后会发生多种mRNA的选择性剪接，最终产生不同序列的cDNA甚至不同编码区组合侠骨仁医 yh_sunflower wrote:请问为什么NCBI中的同一个蛋白，同一个物种还有好几种不同的序列呢，以哪个为主呢？同意 ...

lizzi 基因组dna文库和cdna文库在构建原理和用途上的主要区别是什么zhujoker cDNA文库以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达，而且处在不同环境条件、不同分化时 ...

霍一刀hxs 各位高手，有没有专业的网站，可以根据一段cDNA序列，预测一下它的UTR区的序列？多谢。freecell http://171.66.122.45/content/15/5/742.fullor tryhttp://www.google.com/#hl=en&source=hp&q=+utr+prediction&aq=f&aqi=g-m1&aql=&oq=&gs_rfai=&fp=bcdf8cbbf06dc4f霍一刀hxs 谢谢freece ...

PCR352 请教：本人想利用特异性抗体结合CDNA法筛选某蛋白的膜受体，这种方法是否可行？cDNA文库构建工作量大不大？如果构建膜蛋白的cDNA文库，是否就是提取膜蛋白的RNA，然后反转录成CDNA，然后转化就可以了？本人不是生化专业，理论知识欠缺，还请高手指教。zhujoker 为什么用抗体呢？biogenesci 膜蛋白酵母双杂交有专门的试剂盒的，可以找公司问问，这个试剂盒是illumina的，有公司可以代做的，上海海 ...

琼琼qiongqiong 小女子在这里多谢大家的帮忙了，:)freecell cDNA是单链DNA分子cRNA是单链RNA分子。cRNA是cDNA体外转录的产物，其本质的意义是体外扩增mRNA，采用cRNA的主要原因是，cRNA与DNA的杂交结合力远大于cDNA与DNA的结合，使检测结果更加稳定可靠。lmnsmu cDNA是指“complementary DNA”，翻译为“互补DNA”，是由逆转录酶催化，以RNA为模板合成的、与 ...

会跳舞的蛋糕 请问用于酵母双杂交的cDNA文库有什么特别要求？自己构建好还是公司构建好？iscience 没有什么特别要求。可以给公司做。如果说你自己做好，还是公司做好，那么只能问你自己了。有些人的文库做得比公司的好。zhj008 建议找公司做，自己做浪费时间，关键质量不好，还不会少花钱，我们以前自己做的，发现比公司做的质量差远了，成本也不低。可以找上海海科生物问下，他们做酵母文库很专业，我们实验室在那做过好几个了，都能筛选到 ...

dengxiaoyu1221 本人用SMART试剂盒做cDNA文库，做到λ噬菌体cDNA文库向质粒cDNA文库转化的过程，不知什么原因全部失败，不知哪位大侠能提供λ噬菌体cDNA文库向质粒cDNA文库转化的详细方法过程，在下不胜感激dengxiaoyu1221 没有人为我解答么？freecell refer to:http://scholar.ilib.cn/A-QCode~jcst200601006.htmldengxiao ...

rainbubu 谢谢大家？急切需要答案freecell 这些东西自己那么急于要为什么不能亲自动手，Google搜索一下呢？一个理想的基因组DNA文库应具备下列条件：重组克隆的总数不宜过大，以减轻筛选工作的压力载体的装载量最好大于基因的长度，避免基因被分隔克隆克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域，以利克隆排序克隆片段易于从载体分子上完整卸下重组克隆能稳定保存、扩增、筛选参考:www.dlujpk.com/gene/ ...

真核生物mRNA的纯化以及cDNA文库的构建把带聚腺苷酸的mRNA

试剂盒公司型号次数价格推荐指数mRNA提取生工SK141110次750SK141220次1100mRNA提取invi K1580-96TAKARA230066 rxns7059mTRAPTMMaxi 235065 x 6 rxns30019mTRAPTMMaxi 晶美2309696次9605mTRAPTM 962309796次11815mTRAPTM 96 w/MAG-96promegaZ542015 isolations420PolyATt ...

总RNA，经寡聚(d丁)纤维素亲和层析柱分离出mRNA，以寡聚(d丁)为引物，经反转录合成双链cDNA。先用反转录酶合成第一条cDNA链；经碱降解作用除去RNA模板后用大肠杆菌DNA聚合酶，以第一条链cDNA的3’末端结构为引物合成第二链，最后形成双链cDNA。 (一)仪器和材料 紫外线透射仪、移液枪、琼脂糖凝胶电泳系统 (二)试剂 特异引物、逆转录试剂盒 （一）cDNA的合成 ...

随着分子生物学研究的进展，越来越多的新技术被开发和应用到核酸检测领域。除PCR技术之外，TMA技术（Transcription mediated amplification）、NASBA技术（nucleic acid sequence-based amplification）、b-DNA技术、LCR技术（ligase chain reaction）以及SDA技术（strand disp ...

详细介绍了分离斑马鱼胚胎全部RNA以及由RNA合成较稳定的cDNA的方法，整个纯化和合成过程均使用商业化的试剂盒。

第一部分 Total RNA 的提取 一、 试剂配制 准备工作： 1、研钵、5ml/10ml/ 25ml移液管、100ml/250ml量筒、250ml/100ml容量瓶、药匙、 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部，置于烤箱内180℃，烤6小时。 2、50ml/1.5ml离心管、枪头等塑料制品用0.1‰DEPC水浸泡过夜后，121℃ 20mins 高压灭菌。 3、电泳槽及电泳托、梳子 ...