RNA提取实验

1. 将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中，30℃过夜旋转培养。2. 稀释过夜培养的菌液，重新在10ml培养基中培养细胞。3. OD600达到1.0时，收菌，4000rpm/min离心5min弃培养基。4. 将细胞悬浮于400μlAE缓冲液（50mMSodiumAcetate10mMEDTA调整pH值至5.2）。5. ...

RNA的提取准备试剂：氯仿，异丙醇，75�乙醇，无RNase的水或0.5�SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)操作步骤：1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎每50-100mg组织加入1ml TRIzol用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10�。b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸 ...

如何提取小小的miRNA（microRNA），各大生物技术公司均推出了自己的试剂盒，国内知名核酸纯化公司百泰克针对不同来源的样本亦推出了一系列拥有自己独特技术的miRNA（microRNA）提取试剂盒！

点杂交和狭线杂交技术用于在同一固相支持物上固定几种核酸样品，然后用合适的探针与已固定的样品杂交，并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出的信号强度，与已知浓度的标准品信号强度进行比较，确定待测样品中靶序列的量。现在的点杂交和狭线杂交一般用纯化的RNA样品。

多数情况下，为检测特定的靶mRNA，需先将RNA通过琼脂糖电泳分离后，再从胶上转移到二维支持物上（通常为尼龙膜），再与特异的标记探针杂交。本文主要介绍RNA在上行的缓冲液作用下从琼脂糖胶上转移至膜性支持物，然后采用不同方法将RNA固定在膜上进行杂交。

多数情况下，为检测特定的靶mRNA，需先将RNA通过琼脂糖电泳分离后，再从胶上转移到二维支持物上（通常为尼龙膜），再与特异的标记探针杂交。本文主要介绍RNA在上行的缓冲液作用下从琼脂糖胶上转移至膜性支持物，然后采用不同方法将RNA固定在膜上进行杂交。

本文所述的是RNA提取的一步法的改进，可从少量组织和细胞中同时回收DNA、RNA和蛋白质。这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞，加入氯仿产生第二相，DNA和蛋白质在有机相中被抽提，RNA则被留在上层水相中。用乙醇和异丙醇连续沉淀可分别分离有机相中的DNA和蛋白质。

与rRNA，5SRNA,5.8SRNA和tRNA相比，大多数真核生物的mRNA在其3’端带有poly（A）尾巴，因此mRNA能用oligo（dT）-纤维素亲和层析法从细胞总RNA中分离。本文中介绍的方法是利用带有poly（A）尾巴的mRNA能与连在纤维素介质上的短链oligo（dT）形成稳定的RNA-DNA杂合链的原理。poly（A）+RNA能用oligo（dT）层析柱选择洗脱，也能分批洗脱，即批量层析的方法。

乙二醛化RNA琼脂糖凝胶电泳和含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳均可按大小分离RNA。RNA样品经甲酰胺处理以及经含有甲醛的凝胶电泳分离可能会发生变性，但因为变性RNA比乙二醛电泳后的RNA在Northern分析过程中更易从凝胶上分离，因此甲醛凝胶电泳仍然是分离RNA的一个普遍采用的方法。然而，在甲醛凝胶上的RNA条带总是模糊不清，不能与乙二醛琼脂凝胶电泳的清晰条带相媲美。

如何提取高质量RNA?

科研中的“新星”技术——MicroRNA荧光定量PCR

众多文献报道，许多植物由于未能有效地分离纯化出其组织中的RNA， 而阻碍了其分子生物学方面的研究进展。比如Northern杂交分析，体外翻译分析或建cDNA文库，RT-PCR及差异显示分析等研究，都需要高质量的RNA。因此，提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。

众所周知，从土壤中提取DNA已非易事，而想从中再提取RNA可说是难上加难。DNA不容易提取是因为本身土壤中富集的材料就少，提取过程相对复杂，造成操作损失；而RNA不容易提取除了以上所提到的原因外，还有一个很关键的原因——无处不在的RNA酶，对RNA的稳定存在构成极大威胁。另外还有一点就是土壤中某些物质的微量残留都会影响到科研人员后期PCR反应。这就是目前国际国内市场中土壤RNA提取产品不多的原因。

在用血液标本进行表达谱芯片实验时，需要把血液中有核细胞的RNA提取出来；传统的提取RNA方法是把先把有核细胞从全血中分离出来，需要加白细胞分离液、离心等步骤，比较繁琐。目前有一些公司生产了相关试剂，可以从全血中直接提取RNA。我们比较了不同公司的产品后，认为北京百泰克生物公司生产的TRI pure LS Reagent用于全血有核细胞的RNA抽提效果较好，可以满足基因表达谱芯片的分析要求。一般1ml的全血可以得到10μg左右的total RNA，足够满足芯片分析的需要。

众所周知，从土壤中提取DNA已非易事，而想从中再提取RNA可说是难上加难。DNA不容易提取是因为本身土壤中富集的材料就少，提取过程相对复杂，造成操作损失；而RNA不容易提取除了以上所提到的原因外，还有一个很关键的原因——无处不在的RNA酶，对RNA的稳定存在构成极大威胁。另外还有一点就是土壤中某些物质的微量残留都会影响到科研人员后期PCR反应。这就是目前国际国内市场中土壤RNA提取产品不多的原因。

在样品用液氮瞬间冻结之后，应该储存在-80°C，千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻，也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该首先在超低温条件下先研磨成粉，然后置于裂解液中进行匀浆。

本文总结了一些RNA抽提过程中的技巧和注意事项，可以作为新手入门指南。

有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA， 而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA相互作用。酚类化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失，或 ...

RNA提取应该说已经成为了一种常见的分子生物学操作步骤了，但是不少科研人员仍然烦恼着如何寻找一种最好的方法，或者找到一种适合于特殊用途方法。比如说传统的血液标本表达谱芯片实验需要先把有核细胞从全血中分离出来，加白细胞分离液、离心等步骤，比较繁琐，如果能进行全血的提取，那就再好不过。

从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。