RNA提取实验

操作步骤： 提示： （1） 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇! （2） 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。 1. 直接研磨法（推荐）: a. 新鲜植物组织称重后取100mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直 ...

实验目的：掌握由动物组织中提取总RNA的方法 实验原理：Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA则分布在上层的水相中，最后用异丙醇沉淀水相中的RNA，并用70%乙醇洗涤沉淀，这样就可以得到比较纯净的总RNA. 实 ...

在收集到生物材料之后，最好能即可进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。 1. 提取组织RNA时，每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解：提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5~106个细胞加1ml Trizo ...

1.六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min，枪头吹打。 2. 将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振摇15s。15－30℃下孵育2-3min，离心（4℃，12000g，15min）。 3. 离心后液体分为三层（上层－无色水样层为RNA，中层白色为DNA和底层红色为蛋白质），小心吸取上层无色液体移入一新的EP管 ...

真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。 mRNA的分 ...

从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。 从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般认为在这 ...

采用Promega公司的PolyATract® 26reg；mRNA Isolation System III。 使用该试剂盒，mRNA产量极低，因此下述方法是以Promega公司试剂盒操作手册为基础，并采用储昭晖硕士（作物遗传改良国家重点实验室植物分子生物学水稻分室）所建议的改进方法综合而成。 由使用者自备的材料 65℃水浴 无菌的、无RNase的1.5ml塑料离心管 无菌的、无RNa ...

实验目的 从黄化小麦苗中提取总RNA，可以为cDNA文库的构建做好准备。我们重点是要保证RNA的完整性、产率、防止修饰和纯度，尤其是完整性、防止修饰和纯度。RNA是单链，2’OH是它的化学性质远比DNA活泼。所以，提取RNA颇为不易。加之RNA的不均一性，要将所有的RNA（rRNA、tRNA、mRNA）完全提出，更加有挑战性。而Rnase是无处不在的（这种酶遇高温后也不会丧失活性，复 ...

病毒核酸提取试剂盒提供一种快速方便的病毒RNA/DNA提取系统，无需酚仿抽提，可迅速从血清、血浆、尿液、脑脊液或其他无细胞体液、病毒培养上清液和鼻咽拭子等样本中进行病毒RNA/DNA纯化，纯化后的核酸可用于病毒基因分型研究、病毒流行病学研究和传染病研究等。 实验操作： 1、试剂耗材的准备： （1） 试剂：无水乙醇 （2） RNase 去除的耗材：用0.01% （v/v） DEPC 溶液完全浸泡过 ...

一般公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒失败原因和解决方案 很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试剂盒也无法满足科研工作者对植物RNA提取的要求。 下面我们来分 ...

在用血液标本进行基因表达研究时，需要及时把新鲜血液中有核细胞的RNA提取出来。全血还不能直接放到-80℃保存，即使在-80℃保存，全血中的RNA也容易发生降解。传统的提取新鲜全血RNA方法是把先把有核细胞从全血中分离出来，需要加白细胞分离液、离心等步骤，比较繁琐，在临床医院往往难以实施。

一般公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒经常失败原因和解决方案很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试剂盒也无法满足科研工作者对植物RNA提取的要求。下面我们来分析 ...

适用范围：适用于快速提取植物组织细胞总RNA

随着荧光定量PCR仪器的推广。RNA表达水平的检测越来越灵敏，对于高质量的RNA，不残留基因组DNA或者残留尽可能少成为判断RNA提取产品质量好坏的一个重要指标。目前一般RNA提取剂提取的RNA残留DNA还比较多，甚至肉眼都可以见到明显残留。在此情况下，客户只能采取DNA酶消化，或者再次抽提的方法来减少残留，不仅大大增加了时间成本和经费成本，效果往往也不甚理想，甚至还常常降解RNA。

计划通过获得第三层锥体细胞的基因表达图谱，以探讨精神分裂症患者颞上回灰质减少现象。利用激光捕获显微切割法分离到所需要的锥体神经元特异细胞类型后，再分离RNA以获得基因表达图谱。

唐曙明　何林　周克元【关键词】　核酸; 　分离与纯化; 　核酸提取　　核酸的分离与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学、医学及其相关等领域核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展。各种新方法、经完善后的传统经典方法以及商品试剂方法的不断出现极大地推动了分子生物学的发展。现就核酸分离与纯化的原理及其方法学进展作一综述。核酸分离与纯化的原则核酸在细胞中总是与各种 ...

RNA extraction buffer:0.1M NaCl2% SDS50mM Tris/HCl (pH9)10mM EDTA20mM %26szlig;-mercaptoethanol1. Grind leaf tissue on liquid N in mortar and pestle.2. Transfer the ground tissue to a 10ml conical bot ...

N.B: Gloves should be worn at all times during preparation of in vitro RNA. All solutions should be RNase-free i.e. made with DEPC water if home-made or bought specifically to use for RNA work. You wi ...

LEVEL I Figure 7.3 Isolated microsomes Figure 7.4 TEM of hepatocyte MATERIALS 1% Glutaraldehye (GTA) 1% Osmium tetroxide Epoxy or vinyl resin for TEM TEM photomicrograph of liver cells ...

细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol／L氯化钠溶液中的溶解度相差很大。核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度、脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用0.14mol／L氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解作用。 在含有核糖核 ...